海洋链球菌次级代谢产物Streptochlorin对金黄色葡萄球菌诱发乳腺细胞氧化应激的保护作用

[目的]本试验旨在探讨Streptochlorin对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起小鼠乳腺上皮细胞氧化应激的影响及机制。[方法]采用海洋链球菌次级代谢产物Streptochlorin预处理小鼠乳腺上皮细胞指标检测(EpH4-Ev)2 h,适时加入S.aureus(MOI=10)共孵育4 h,收集样品;通过细胞活性检测、倒置荧光显微镜观察、生化指标检测、Western blot、RT-PCR等方法检测相关指标,并辅以计算机分子对接技术,明确Streptochlorin对S.aureus诱发乳腺上皮细胞氧化应激的影响及潜在机制。[结果]20μmol·L-1 Streptochlorin预处理能够明显改善S.aureus侵袭导致的乳腺上皮细胞排列紊乱、皱缩等形态改变,降低细胞损伤标志物乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的分泌以及肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)等炎性细胞因子的基因表达(P<0.05)。Streptochlorin预处理能显著降低乳腺上皮细胞胞内活性氧(ROS)水平,提高细胞总抗氧化能力(T-AOC)水平,减少丙二醛(MDA)水平(P<0.05)。Western blot检测以及分子对接结果显示,Streptochlorin可能通过Keap1-Nrf2信号通路促进下游分子血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H∶醌氧化还原酶1(NQO1)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的基因表达发挥抗氧化作用(P<0.05)。[结论]Streptochlorin对S.aureus感染小鼠乳腺上皮细胞诱发的氧化应激和炎症反应具有显著的保护作用,这可能与Keap1-Nrf2信号通路的激活有关。

夫西地酸联合黄芩素对金黄色葡萄球菌的体内外抗菌作用研究

目的研究夫西地酸(fusidic acid,FA)联合黄芩素(baicalein,BE)在体内和体外对13株金黄色葡萄球菌的抗菌特性。方法采用微量肉汤稀释法和微量棋盘法测定最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。采用FICI评价综合效果,采用时间-杀菌曲线法测定杀菌效果。利用琼脂二倍稀释法对5株金黄色葡萄球菌的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)和防耐药突变选择窗(mutant selective window,MSW)进行测定,比较夫西地酸单独应用及联用黄芩素后防耐药突变窗的变化。使用金黄色葡萄球菌感染肺炎小鼠模型进行体内实验,测定FA和BE单独和联合治疗后生命体征、肺脏指数、菌落定植数和血清炎症因子的变化。结果研究发现,FA与BE组合的协同效应为53.8%,相加效应为30.8%,无关效应为15.4%。此外,研究人员观察到,当FA与BE以特定浓度(分别为1MIC和1/2MIC)结合时,在24h后对3株金黄色葡萄球菌(SA-ATCC29213、MRSA-ATCC43300和MRSA-210702212)均有杀菌作用。FA对这些菌株的MPCs为128~256μg/mL,而MSWs为64~256μg/mL。而当BE加入混合物时,菌株的MPCs降低到16~32μg/mL,MSWs降低了8~16倍,说明BE提高了FA对这些菌株的抗菌活性。FA和BE的组合对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的生命体征影响很小。小鼠肺脏指数、肺部金黄色葡萄球菌定植数、血清中炎症因子等实验结果表明,FA和BE组合对金黄色葡萄球菌的影响很小,但联合用药组对小鼠肺炎的治疗效果明显优于单药组。结论FA单独应用时,MSW较宽,联用BE后,FA的MSW明显缩小。FA联合BE有协同杀菌效应,治疗小鼠金葡菌肺炎效果较单药组好。

新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌分离鉴定及其对金黄色葡萄球菌的抑制作用

[目的]分离、鉴定新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌,评价其对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]从呼图壁县某驼场采集健康驼乳样本45份,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用细菌16S rDNA序列PCR扩增及测序方法进行分子生物学鉴定。利用点种法、琼脂斑点法和牛津杯双层琼脂扩散法筛选对金黄色葡萄球菌ATCC 29213具有抑制作用的乳酸菌。将MRS培养基的pH值调节至1~10,测定乳酸菌的耐酸能力;在MRS培养基中添加0~0.30%的牛胆盐,测定乳酸菌的耐胆盐能力。应用微量肉汤倍比稀释法测定乳酸菌无细胞上清液(cell-free culture supernatant,CFCS)对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和亚抑菌浓度(subinhibitory concentration,SIC);考查CFCS在不同pH值条件下及经酶处理后对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑制作用变化,初步分析CFCS的抑菌活性物质;利用牛津杯双层琼脂扩散法测定CFCS对驼乳源和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌野生株的抑制作用。[结果]从45份驼乳中分离得到5种20株乳酸菌,分别为粪肠球菌(Enterococcus faecalis,n=13)、鼠李糖乳杆菌(Lacticaseibcillus rhamnsus,n=1)、发酵黏液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum,n=3)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei,n=1)和融合魏斯氏菌(Weissella confusa,n=2)。经3种方法筛选,鼠李糖乳杆菌KC4株对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑菌作用最强,且具有良好的耐酸和耐胆盐特性,在pH值为4~7和牛胆盐浓度为0~0.20%的条件下均可正常生长。KC4株的CFCS对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的MIC和SIC分别为62.5 mg/mL和7.8125 mg/mL;在pH值为2~5时仍具有抑菌效果,经过胃蛋白酶、过氧化物酶、胰蛋白酶、肽酶、蛋白酶K、过氧化氢酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌效果极显著(P<0.01)降低;对驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生株均具有良好的抑菌效果。[结论]在呼图壁县驼乳中筛选出1株对金黄色葡萄球菌标准菌株以及驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生菌株均具有较强抑制作用的鼠李糖乳杆菌,具有较强的耐酸和耐胆盐能力,其抑菌活性物质可能包括酸、过氧化物和蛋白类物质等。研究结果为驼乳源乳酸菌的开发利用提供了潜在菌种资源。

截短侧耳素衍生物PCI对48株牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床菌株的抗菌活性

为了探讨截短侧耳素衍生物PCI对48株牛乳腺炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床菌株的体内外抗菌活性,采用微量肉汤稀释法测定了PCI对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)标准菌株,以及48株牛乳腺炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床菌株的最小抑菌浓度(MIC),并进行了小鼠大腿感染试验。结果表明,PCI对金黄色葡萄球菌和MRSA的MIC均为0.0078μg/mL,对牛源MRSA临床菌株的MIC为0.0078~0.125μg/mL;小鼠大腿感染试验结果表明,PCI减轻了肌肉组织的变性和坏死,且大腿组织载菌量显著低于延胡索酸泰妙菌素组(P<0.05),极显著低于模型组(P<0.0001)。综上所述,PCI对48株牛乳腺炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离菌株具有优异的抗菌活性,能够减轻MRSA造成的大腿肌肉感染。

乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌抑制条件的研究

研究温度、pH、使用浓度及保存条件等对乳酸链球菌素抑 制金黄色葡萄球菌的影响,结果表明,温度、pH会显著影 响乳酸链球菌素的活性,酸性条件下,乳酸链球菌素对温 度较稳定,随着pH的增加,温度越高,乳酸链球菌素活 性下降越显著。乳酸链球菌素对沙门氏菌无抑制作用,在 温度为10℃、pH5.0的条件下100mg/kg浓度的乳酸链球 菌素在96h内可以抑制培养基中浓度为5.0×106个/mL 的金黄色葡萄球菌的生长。

内酯型槐糖脂与乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比较及联合抑菌效果研究

研究内酯型槐糖脂对食品病原菌金黄色葡萄球菌的抑制作用对开发槐糖脂食品添加剂具有重要意义。通过管碟法、试管二倍稀释法、液体培养抑制测定OD值法、微量棋盘稀释法研究内酯型槐糖脂单独使用和内酯型槐糖脂-乳酸链球菌素联合使用对金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果显示:内酯型槐糖脂和乳酸链球菌素浓度为10mg/mL时,抑菌圈直径分别为10.50,21.30mm,最小抑菌浓度分别为32,0.5μg/mL,最小杀菌浓度分别为64,1μg/mL,短时间内(1h)表现出较强的抑制活性随后下降并趋于平稳,联合使用表现出无关作用(FIC=1.5)。研究表明:内酯型槐糖脂单独使用和内酯型槐糖脂-乳酸链球菌素联合使用对金黄色葡萄球菌具有很强的抑制作用,槐糖脂-乳酸链球菌素联合使用不表现出拮抗作用,有望开发成槐糖脂食品添加剂和复合食品添加剂。

乳酸链球菌素对肉食杆菌和腐生葡萄球菌的抑菌机制研究

目的研究乳酸链球菌素(Nisin)对肉食杆菌(Carbibacterium divergens)和腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)的抑菌作用机制。方法采用肉汤稀释法测定乳酸链球菌素对肉食杆菌和腐生葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),由细菌生长曲线、电导率、胞外核酸、胞外蛋白、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活力,并采用扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察,综合评价乳酸链球菌素对肉食杆菌和腐生葡萄球菌细胞结构的影响,通过测定细胞保护酶中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力来分析乳酸链球菌素对肉食杆菌和腐生葡萄球菌细胞酶活性影响。结果乳酸链球菌素对肉食杆菌和腐生葡萄球菌的MIC分别为6.2500 mg/mL和10.000 mg/mL,菌体经MIC和2 MIC处理后,其正常生长受到抑制,其对肉食杆菌的抑菌作用明显强于腐生葡萄球菌被抑制的作用。SEM观察发现,经MIC乳酸链球菌素处理后的两种菌体细胞形态发生扭曲收缩、有褶皱,电导率、胞外核酸、胞外蛋白含量和AKP活力升高,而菌体的SOD与CAT活力均降低。结论乳酸链球菌素能够改变肉食杆菌和腐生葡萄球菌细胞的形态、增加膜的通透性,造成了细胞内容物的泄露,降低菌体内细胞保护酶的作用,从而导致细菌的死亡,乳酸链球菌素对肉食杆菌的抑制作用强于对腐生葡萄球菌。

C5aR在金黄色葡萄球菌LukS-PV诱导非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)通过活化补体5受体(C5aR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H460凋亡的影响。方法:将敲低C5aR表达的慢病毒载体转染至A549和H460细胞中,qRT-PCR和Western blot检测C5aR敲低率,Annexin V/PI染色法检测敲低C5aR对细胞凋亡的影响。对敲低C5aR的细胞再加入LukS-PV,通过Annexin V/PI染色法和凋亡相关蛋白检测细胞凋亡情况。结果:与PBS对照组相比,LukS-PV可促进A549和H460细胞凋亡(P<0.05)。慢病毒载体转染A549和H460细胞敲低C5aR后,细胞C5aR表达水平降低(P<0.05)。在敲低C5aR基础上再加入LukS-PV,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论:敲低C5aR可抑制LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡。

葡萄籽和苹果原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究苹果原花青素和葡萄籽原花青素对变形链球菌(Streptococcus mutans)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抑制作用,采用试管液体稀释法和琼脂稀释法抑菌实验测定其最低抑菌质量浓度(MIC)和质量最低杀菌质量浓度(MBC),并通过测定培养基pH值的变化,研究葡萄籽原花青素对变形链球菌产酸能力的影响。结果表明:苹果原花青素、葡萄籽原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌生长都有抑制作用;苹果原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.25、4.00mg/mL,葡萄籽原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.75、2.00mg/mL;苹果原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为4.00、9.00mg/mL,葡萄籽原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为2.00、6.50mg/mL。葡萄籽原花青素质量浓度大于1.00mg/mL对变形链球菌的产酸能力有显著抑制效果。

乳酸链球菌素联用美罗培南对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌作用初探

为研究乳酸链球菌素(nisin,NIS)与美罗培南(meropenem,MEM)联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑菌作用,本研究通过棋盘法联合抑菌试验计算部分抑菌浓度指数(FICI)来评价联用抑菌效果,使用结晶紫染色法半定量检测药物联用对MRSA菌株生物膜生成的影响,最后通过大蜡螟模型观察药物联用对MRSA感染的大蜡螟存活率的影响。结果显示,在乳酸链球菌素组(NIS)、美罗培南组(MEM)和联用组(MEM+NIS)中,MEM+NIS组对三株MRSA分离株均表现为协同抑菌作用,其FICI值分别为0.375、0.5和0.375;作用6 h时,MEM+NIS组与NIS组均可抑制生物膜生成,但组间无统计学差异(P>0.05);大蜡螟生存模型显示,五天后,三株MRSA菌株感染的大蜡螟幼虫的MEM+NIS组生存率分别为30%、80%、30%,其中Yn2020051和Yn2020078,MEM+NIS组的大蜡螟幼虫存活率均高于NIS组、MEM组和阳性对照组(PC),差异均有统计学意义(P<0.05)。

降钙素原对草绿色链球菌及金黄色葡萄球菌感染的感染性心内膜炎的鉴别价值

目的探讨降钙素原(PCT)对草绿色链球菌及金黄色葡萄球菌感染的感染性心内膜炎(IE)的鉴别价值。方法选取中国医科大学附属第一医院2012年1月—2015年11月诊断的患者59例,根据血培养结果将所有患者分为草绿色链球菌组44例和金黄色葡萄球菌组15例。比较两组患者血清PCT水平、PCT升高程度。结果金黄色葡萄球菌组患者血清PCT水平和PCT升高程度高于草绿色链球菌组(P<0.001)。结论血清PCT可用于鉴别诊断金黄色葡萄球菌及草绿色链球菌感染的IE。

乳酸链球菌L16对感染金黄色葡萄球菌小鼠肠道菌群的调节作用

为研究乳酸链球菌L16对金黄色葡萄球菌感染小鼠肠道菌群结构的恢复情况,采用高通量测序技术,构建小鼠肠道微生物的16S rRNA基因测序文库,通过菌群结构图、等级丰度分布曲线、热图、稀释性曲线图、维恩图等,分析预防组、治疗组、正常组和模型组小鼠的肠道菌群组成和生物多样性。结果:模型组中脱铁杆菌门(12.67%)显著升高,菌群结构异常。预防组中厚壁菌门(49.03%)和拟杆菌门(43.15%)的相对丰度接近正常组(44.75%;42.08%)。结论:乳酸链球菌L16能预防金黄色葡萄球菌感染小鼠肠道,调节肠道菌群结构。

传统发酵食品中分离的乳酸菌粗提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抑菌机制研究

目的 探究乳酸菌HS011(LactobacillusplantarumMG5276)、德氏乳杆菌保加利亚亚种HS023(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus strain NDO4)、嗜热链球菌HS033 (Streptococcus thermophilus 3233)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)的抑菌机制。方法 以MRSA为研究对象,探索乳酸菌粗提物对MRSA菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)的影响、抗菌药物复合作用对细菌生长的影响、抽提物对MRSA生物被膜抑制和清除效果,以及抽提物对MRSA细胞膜完整性的破坏作用等。结果 乳酸菌粗提物HS011、HS023、HS033对MRSA的MIC分别为5.75、5.00、6.00mg/mL;指示菌MRSA的生长过程受到粗提物明显抑制,在6h时HS011、HS023、HS033对MRSA的抑菌率分别为28.69%、69.20%和42.19%;3株乳酸菌粗提物与四环素复合使用时对MRSA的抑菌效果增强,抑菌直径分别提高了39.33%、32.00%、37.43%,但与亚胺培南复合使用时,其抑菌效果却减弱了;3株乳酸菌粗提物在1MIC时对MRSA生物被膜形成具有一定的抑制和清除效果,对生物被膜形成的抑制率分别为27.30%、18.20%、17.57%,对成熟被膜的清除率分别为42.10%、54.50%、45.50%;通过测定指示菌的核酸泄漏量、胞外蛋白含量以及扫描电镜成像发现乳酸菌粗提物处理过的MRSA,其细胞膜被破坏。结论 3株乳酸菌的粗提物通过破坏MRSA的细胞膜有效抑制MRSA的生长和生物被膜的形成,本研究结果为乳酸菌的抑菌机制探究提供一定的基础数据。

乳酸杆菌产细菌素对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌临床株的体外抑菌效果研究

目的通过使用乳酸杆菌分泌的细菌素对两种致病菌进行相应作用后比较其效果,旨在找出一种可靠的抑菌方法。方法40例肺炎患者,痰液中分离培养出20株金黄色葡萄球菌和20株肺炎链球菌。把乳酸杆菌产细菌素加入在这两种致病菌的培养皿中,计算细菌个数,使用扫描电镜对细菌的生物膜进行观测。分析乳酸杆菌产细菌素对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌分离株生长及分离株生物膜的抑制作用。结果实验组金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌菌落数分别为(3.41±0.91)×10^(8) CFU/ml、(4.81±1.21)×10^(8) CFU/ml,均低于对照组的(12.76±3.21)×10^(8) CFU/ml、(14.32±3.81)×10^(8) CFU/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。乳酸杆菌产细菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌率为89.64%、灭活率为73.28%,均高于对肺炎链球菌的75.11%、66.41%。结论乳酸杆菌产细菌素对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌的生长及生物膜都表现出较强的抑制作用,相比之下,对金黄色葡萄球菌的抑制作用更明显,可以体现乳酸杆菌产细菌素在临床上显著减轻肺炎症状的重要价值。

巴西苏木素对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌抑制作用机制研究

目的探讨巴西苏木素对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的体外抑制作用及其机制。方法收集临床分离的金黄色葡萄球菌,经VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪鉴定为MSSA,采用二倍稀释法和平板法测定巴西苏木素对其的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);采用绘制生长曲线方法观察巴西苏木素对其生长的影响作用;采用油镜法观察巴西苏木素对MSSA形态的影响;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定巴西苏木素对MSSA可溶性蛋白的影响;采用紫外分光光度计测定其DNA及RNA等大分子物质的外渗水平;通过测量MSSA产溶血环的大小来反映巴西苏木素对α-溶血素分泌的影响;通过建立MSSA生物膜模型、计算生物膜内存活菌的数量反映巴西苏木素对MSSA生物膜的作用效果。结果巴西苏木素对MSSA的MIC为65μg/mL,MBC为130μg/mL;生长曲线显示巴西苏木素浓度增加,对MSSA的抑制作用增强;镜下形态学的改变表明,药物浓度增加,抑制作用增强,表现为菌体数量减少、干扰菌体繁殖时的聚集;SDS-PAGE蛋白电泳结果表明药物浓度增加,对MSSA可溶性蛋白形成的抑制作用增强;巴西苏木素对MSSA的DNA、RNA的外渗有显著影响(P<0.05),药物浓度增加,外渗量增大;药物浓度增加,溶血环直径减小;药物浓度增加,MSSA生物膜内的存活菌量减少。结论巴西苏木素对MSSA具有极好的抑制作用且具有浓度依赖性,可能通过减少其可溶性蛋白的形成、改变细胞膜的通透性、影响MSSAα-溶血素的活性,从而起到对MSSA的杀灭作用;药物也可能通过破坏生物膜,减少生物膜内MSSA的存活数量来发挥抑制作用。

黄芩素联合nisin对金黄色葡萄球菌生物被膜的体外作用

金黄色葡萄球菌的生物被膜是引起其增殖扩散并产生毒素的重要原因。该文探究乳酸链球菌素(nisin)与黄芩素联合使用对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制效果。通过筛选确定nisin与中药成分联用对生物被膜的抑制效果及最佳浓度配比,并初步探究二者联用对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制机制。结果表明nisin与黄芩素对金黄色葡萄球菌生物被膜的MIC_(50)分别为0.5、0.1 mg/mL;二者联用时多个浓度配比对生物被膜均有协同抑制作用,同时可以降低剂量,其中最佳质量浓度配比为0.0625 mg/mL的nisin和3.125μg/mL的黄芩素;二者联用可降低生物被膜的黏附性、疏水作用、自动聚集能力、胞外多糖和eDNA的产生,表明其可抑制生物被膜的黏附、生长和成熟;在18 h时nisin与黄芩素对生物被膜的抑制和清除效果最佳;通过扫描电镜观察到生物被膜附着大量减少,菌落分明。nisin与黄芩素联用可协同抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。

鼠尾草酸、α-倒捻子素联合不同作用机制抗生素的抗金黄色葡萄球菌作用研究

目的探究植物源抗菌天然产物鼠尾草酸、α-倒捻子素分别与抗生素的联合应用效果,发现不同联合应用效果的抗菌组合物。方法分别以敏感金黄色葡萄球菌ATCC25923、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA 01为指示菌株,采用微量肉汤稀释法,测定鼠尾草酸、α-倒捻子素和不同作用机制抗生素对指示菌株的最低抑菌浓度;再采用棋盘格法,分别测定鼠尾草酸、α-倒捻子素与不同作用机制抗生素联用对测试菌株的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。结果鼠尾草酸、α-倒捻子素联合硫酸庆大霉素对测试菌株的FICI范围分别为0.28~0.62、0.31~0.50,前者对两株测试菌株分别显示协同或无关作用,后者均显示协同作用;鼠尾草酸、α-倒捻子素分别与其他抗生素对测试菌株的FICI范围为0.52~1.12,均显示无关作用。结论靶向细胞膜的鼠尾草酸、α-倒捻子素与作用于核糖体影响细胞膜的氨基糖苷类庆大霉素联用时,主要呈现协同的联合抗菌效果,进一步证实了课题组发现的联合用药效果的相关规律;组合物鼠尾草酸/硫酸庆大霉素对金黄色葡萄球菌的不同菌株既可显示协同,又可显示无关作用,为联合用药防细菌耐药的进一步研究打下了基础。

抗奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌-细菌素的筛选及特性研究

奶牛乳房炎时常危害奶牛群,给奶牛养殖业造成严重的经济损失。在所有细菌性乳房炎中,金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎占比极高。本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用琼脂扩散法进行抑菌试验,从内蒙古手工奶酪中筛选到一株产细菌素的乳酸菌作为研究对象。根据形态特征,结合16S rRNA序列结果分析,鉴定菌株为Lacticaseibacillus saniviri,命名为LS-1。通过酶稳定性试验、酸碱稳定性试验、热稳定性试验,确定菌株LS-1的细菌素生物学特性。LS-1细菌素对木瓜蛋白酶、胃蛋白酶较敏感,经100℃水浴处理具有良好抑菌活性。LS-1细菌素经p H处理,p H为11.0时抑菌活性丧失。本研究所筛选的LS-1,丰富了产细菌素的菌种资源,其所产细菌素具有作为治疗奶牛乳房炎替抗产品的潜力。

分离乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用

本试验旨在探究从羊瘤胃内容物中分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。首先对乳酸菌进行分离纯化、形态学鉴定并结合16S rDNA测序,通过生长曲线与产酸曲线证实其具有较好的生长性能与产酸能力;牛津杯双层平板法检测分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用;乳酸抑菌试验探究分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株发挥抑菌作用的最适pH。结果显示:从羊瘤胃内容物中分离的1株乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)具有良好的抑菌活性;该乳酸菌的无菌发酵上清液原液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有抑菌作用,但经氢氧化钠(NaOH)处理后抑菌圈消失,表明该乳酸菌的无菌发酵上清液接近中性,不能发挥对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。乳酸抑菌试验说明,pH为1.4~2.1时乳酸溶液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有一定的抑制作用,pH大于3.8时,无论是乳酸溶液还是乳酸菌无菌发酵上清液均不能观察到对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑制作用。结论:本试验从羊瘤胃内容物分离出1株具有良好抑菌活性的乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)。通过产酸试验、乳酸抑菌试验和用NaOH处理乳酸菌无菌发酵上清液作用于金黄色葡萄球菌ATCC29213株,证明乳酸菌无菌发酵上清液中发挥抑菌活性的物质为有机酸类,乳酸发挥作用的最适pH为1.4~2.1,这可为后续研究乳酸菌活性物质的抑菌机制提供试验基础。

布氏乳杆菌细菌素BSX01对金黄色葡萄球菌及其生物被膜形成的影响

为评估布氏乳杆菌所产细菌素在食品工业中的应用潜力,通过培养布氏乳杆菌获得具有抑制金黄色葡萄球菌的抑菌活性物质,经纯化后鉴定其相对分子质量大小与抑菌特性,并对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成进行探讨。结果发现,布氏乳杆菌在37℃MRS培养基中培养至20 h后进入稳定期,在26 h时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达峰值,为(26.36±0.86)mm。通过ÄKTA pure系统串联Superdex 30 Increase纯化后,鉴定得到抑菌活性物质(BSX01)的相对分子质量为773.56,对多种蛋白酶敏感,推测为Ⅰ类细菌素。在pH 10(2 h)和121℃(30 min)处理后,BSX01仍具有较好的抑菌活性,最小抑菌质量浓度(MIC)仅为12.50μg/mL。此外,BSX01在1/2 MIC时可有效降低金黄色葡萄球菌生物被膜的形成,在2 MIC时能够完全抑制生物被膜的形成。基于上述结果,布氏乳杆菌产生的细菌素BSX01是食品工业中的潜在生物防腐剂和抑制食源性致病菌生物被膜形成的有效候选品。