二倍体马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

根据GenBank发表的四倍体马铃薯栽培种(Solanum.tuberosum)来源的马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因序列,用PCR方法从二倍体马铃薯IVP101(Solanum.phurejia)cDNA文库和基因组DNA扩增得到马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ的cDNA和DNA,命名为PINⅡ2x。测序表明,PINⅡ2x基因组DNA全长580bp,含有一个115bp的内含子,cDNA有462bp(除去终止密码子)。推测的PINⅡ2x分子量是16.6kD,等电点6.08。与其他马铃薯蛋白抑制剂Ⅱ同源性比较表明,核苷酸同源性高达88%;推测的氨基酸序列同源性为93%,并具有相同的活性中心。RT PCR表明,PINⅡ2x的mRNA在叶片中具有强烈的伤害诱导表达特性。同时,构建了分别以水稻ActⅠ启动子和玉米Ubi启动子驱动PINⅡ2x基因的双元载体。

二倍体彩色马铃薯杂交群体的蒸食品质遗传多样性评价

二倍体育种是近年马铃薯育种热点。为了筛选蒸食品质优良的二倍体彩色马铃薯亲本,本研究以11个天然结实群体和15个人工杂交组合的309个二倍体彩色马铃薯后代为研究对象,对其薯块蒸食品质的质地、变色、酶促褐变程度、香味和口感这5个方面进行鉴定与评分,并比较天然结实和人工杂交组合后代薯块蒸食品质各指标的辛普森指数多样性的差异。研究结果表明:综合评价指标口感等级评分中,共有24份材料平均口感评分在8.00分以上,其中10份来自天然结实的群体,其余14份来自人工杂交组合。在蒸食评价质地方面,天然结实组合后代平均多样性指数高于人工杂交组合后代;在蒸后变色和酶促褐变方面,天然结实和人工杂交后代差别很小;在香味和口感评分等级方面,人工杂交后代多样性略高于天然结实后代。本研究中所筛选出来的蒸食品质优良的材料可作为二倍体亲本,通过杂交筛选二倍体彩色马铃薯品种。