二十二碳六烯酸单细胞油(DHASCO)——婴幼儿及孕产妇的DHA营养补充剂

DHA是大脑中最丰富的长链多不饱和脂肪酸之一,也是视网膜光受体中最丰富的多不饱和脂肪酸。然而人体,特别是婴幼儿自身合成DHA的能力有限,缺乏DHA会影响大脑和视力的发育及其功能,故从饮食中摄取足够的DHA十分重要。鱼油是目前DHA的主要来源,但鱼油中与DHA同时存在的EPA会影响婴儿的生长发育,因此鱼油不适合添加进婴幼儿配方食品中。利用现代生物技术生产的二十二碳六烯酸单细胞油含有40%左右的高纯度DHA,几乎不含EPA,产品已能工业化生产,各种理化指标稳定,纯度和安全性优于鱼油,目前已开始应用于婴幼儿奶粉和作为功能性食品原料使用。评述了二十二碳六烯酸单细胞油的原料来源、制作过程、理化性状、吸收代谢、安全性以及在婴幼儿、孕产妇的临床功能研究等方面的研究进展,并对二十二碳六烯酸单细胞油在保健食品中的应用情况作了简单的介绍。

二十二碳六烯酸抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人结肠癌细胞系HT-29的影响及其作用机制。方法将人结肠癌细胞系HT-29分为对照组,25、50和100μmol/L DHA处理组,以及100μmol/L DHA+30μmol/L 740Y-P处理组。MTT检测HT-29细胞增殖,annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白以及p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达,RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA相对表达量。结果与对照组相比,DHA 25、50和100μmol/L处理HT-29细胞后细胞存活率下降(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平均下降(P<0.05或P<0.01),NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA相对表达量均下降(P<0.05或P<0.01)。此外,DHA 100μmol/L和740Y-P 30μmol/L共同处理HT-29细胞后,细胞生存率、蛋白磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt和p-mTOR)、mRNA相对表达量(NLRP3、Caspase 1和IL-1β)均低于对照组(P<0.05)和740Y-P 30μmol/L组(P<0.05),而高于DHA 100μmol/L组(P<0.05或P<0.01)。结论DHA抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖,作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR和NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号分子通路有关。

原生二十二碳六烯酸纯牛奶对小鼠学习记忆功能的辅助改善作用

探讨了原生二十二碳六烯酸纯牛奶对小鼠学习记忆障碍的辅助改善作用。将SPF级昆明小鼠设置为正常小鼠、记忆获得障碍模型小鼠两个模型,每个模型中包含对照组,低(6.67 mg/kg体质量)、中(13.33 mg/kg体质量)、高(40.00 mg/kg体质量)剂量组。各组小鼠灌胃30 d的受试物后,依次进行跳台、避暗和水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力。跳台实验结果显示,与模型对照组相比,模型中、高剂量组测试期潜伏期显著延长(P<0.05)并且错误次数极显著减少(P<0.01);避暗实验结果显示,与阴性对照组相比,中剂量组消退期错误次数和错误动物数均显著减少(P<0.05);水迷宫实验结果显示,与模型对照组相比,模型中剂量组到达终点的总时间显著减少(P<0.05)。结论为原生二十二碳六烯酸纯牛奶可以通过延长测试潜伏期并减少错误次数和错误动物数起到辅助改善小鼠学习和记忆障碍的作用。

二十二碳六烯酸治疗癫痫的作用机制研究进展

癫痫是一种神经系统的慢性疾病,主要由大脑异常放电引起,可导致患者头痛、认知障碍及情绪异常波动等,严重影响患者身心健康,给家庭和社会带来沉重负担。目前关于癫痫的具体发病机制研究较少,且治疗癫痫的药物效果有限,还可产生一定的副作用,因此需寻找更多安全有效的天然产物预防和治疗癫痫。二十二碳六烯酸是人体必需的一种多不饱和脂肪酸,主要来源于海洋生物,具有提供能量、影响炎症反应、免疫反应和保护神经等多种生物功能。本文主要综述抑制细胞凋亡、抗氧化和抗炎等多种途径对二十二碳六烯酸治疗癫痫的研究,为癫痫治疗的新思路提供参考依据。

饲粮中添加富含二十二碳六烯酸和月桂酸单甘酯的复合物对公猪精液品质的影响

本试验旨在研究饲粮中添加富含二十二碳六烯酸(DHA)和月桂酸单甘酯(GML)的复合物对公猪精液品质的影响。选择48头19~24月龄杜洛克公猪,随机分成4组,每组12个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2和3组分别在基础饲粮中添加0.18%、0.24%和0.30%富含DHA和GML的复合物。试验期16周。结果表明:1)试验2和3组的精子DHA、n-3多不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量均极显著高于对照组(P<0.01)。2)在第16周时,试验1、2和3组的总精子数和有效精子数均显著高于对照组(P<0.05),精子畸形率均极显著低于对照组(P<0.01)。3)在第4、12和16周时,试验1、2和3组的精子膜完整性均极显著高于对照组(P<0.01);在第10周时,试验2和3组的精子膜完整性显著高于对照组(P<0.05)。4)试验1组的新鲜精液旋转运动精子比率显著低于对照组(P<0.05);在储存72 h后,试验1组旋转运动精子比率极显著低于对照组(P<0.01)。5)试验2组的血清丙二醛(MDA)含量极显著低于对照组和试验1、3组(P<0.01)。试验1和2组的新鲜精子超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著高于对照组(P<0.01),试验2组的新鲜精浆SOD活性显著高于对照组(P<0.05)。在储存24 h后,试验1、2和3组的精子MDA含量均极显著低于对照组(P<0.01)。6)试验1和2组的血清白细胞介素-6(IL-6)含量极显著低于对照组(P<0.01)。试验1和2组的粪便二胺氧化酶(DAO)含量极显著低于对照组(P<0.01),试验1和2组的粪便钙卫蛋白含量显著低于对照组(P<0.05)。由此可见,富含DHA和GML的复合物通过影响精子脂肪酸组成、氧化应激和炎症状态等方面对公猪精液品质产生了积极影响。

富二十二碳六烯酸-磷脂酰丝氨酸缓解环磷酰胺导致的小鼠肾损伤机制

目的:研究富二十二碳六烯酸-磷脂酰丝氨酸(docosahexaenoic acid-enriched phosphatidylserine,DHAPS)对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导小鼠肾损伤的改善作用及其机制。方法:32只雄性ICR小鼠随机分为正常组(CON组)、模型组(MOD组)、50 mg/kg mb DHA-PS组(50 DHA-PS组)和100 mg/kg mb DHA-PS组(100 DHA-PS组),每组8只。腹腔注射80 mg/kg mb CTX建立小鼠肾损伤模型,5 d后,MOD组和DHA-PS组分别灌胃等量生理盐水或DHA-PS,7 d后处死小鼠。测定各组小鼠肾脏指数、血清生化指标、肾脏氧化应激和炎症因子表达水平,分析组织病理变化及肾脏组织非靶向代谢组学。结果:与MOD组相比,DHA-PS可显著降低小鼠肾脏指数以及肌酐、尿素氮、胱抑素C和肾损伤分子-1水平(P<0.05);显著提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶等抗氧化酶活性(P<0.05),并显著降低丙二醛含量(P<0.05);显著下调白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α等促炎细胞因子的表达(P<0.05),显著上调抗炎细胞因子IL-10的含量(P<0.05)。染色结果显示,DHA-PS组小鼠肾脏组织结构明显恢复。此外,肾脏组织代谢组学分析结果表明,DHA-PS主要通过影响甘油磷脂代谢、嘌呤代谢及其代谢物缓解CTX导致的小鼠肾脏代谢紊乱。结论:DHAPS可通过减轻氧化应激和炎症反应、调节甘油磷脂代谢和嘌呤代谢等途径缓解CTX导致的小鼠肾损伤。

人体二十二碳六烯酸检测方法的研究进展

二十二碳六烯酸(DHA)作为人体必需的长链多不饱和脂肪酸之一,对儿童尤其是婴幼儿大脑发育、成人脑功能维持及心血管疾病预防等均有重要作用。DHA的人体来源主要依靠膳食补充,其缺乏人群较为普遍。因此,监测人体内DHA水平是预防因DHA不足或缺乏引起疾病的关键。目前人体DHA水平检测方法较多,但标准化的检测方法尚少见文献报道。该文通过综述近几年已发表的人体DHA水平评估或检测方法,主要包括膳食调查法、色谱法、核磁共振技术和近红外光谱技术,并对各种方法的优势和局限性进行分析总结,以期为人体DHA水平检测提供新思路及科学指导,并助力健康人群DHA水平参考区间的建立。

β-乳球蛋白与二十二碳六烯酸互作效应对β-乳球蛋白致敏性机制的影响

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)是牛乳中的主要过敏原,以β-LG为原料,采用三维荧光光谱法、圆二色谱法、分子模拟对接法和间接竞争酶联免疫吸附测定法探究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)与β-LG互作效应及其对β-LG致敏性的影响。结果表明:DHA与β-LG结合后显著改变了β-LG中芳香族残基的微环境,使其极性增加;DHA通过疏水作用力与β-LG结合形成稳定复合物,且结合后,β-LG的二级结构发生改变,蛋白质骨架发生折叠,随着DHA浓度的增加,β-折叠相对含量先增加后减少,α-螺旋相对含量的变化与β-折叠相反,β-转角、无规卷曲相对含量变化没有明显规律;此外,在两者结合后,β-LG的抗原性降低,DHA浓度为3 mmol/L时,免疫球蛋白E结合能力抑制率约为29%。

二十二碳六烯酸对奶山羊乳腺上皮细胞转录调控机理研究

本试验旨在研究二十二碳六烯酸(DHA)对奶山羊乳腺上皮细胞(GMECs)转录调控机理。试验使用不同浓度的DHA(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000和100.000μmol/L)对GMECs进行处理,并测定细胞活力,然后利用转录组测序(RNA-Seq)技术对DHA作用的GMECs进行测序,获得并分析相关基因表达。结果表明:1)与空白对照组(无DHA处理)相比,低浓度DHA(≤25.000μmol/L)对各时间点GMECs细胞活力无明显抑制作用;当DHA浓度高于50.000μmol/L时,GMECs细胞活力出现明显下降。在不同时间点,24 h时各浓度DHA处理GMECs细胞活力高于其他时间点。因此,选择处理时间为24 h、DHA浓度为25.000μmol/L用于后续试验。2)构建DHA在GMECs中作用的RNA文库,获得的碱基质量值≥20的碱基所占百分比(Q20)和碱基质量值≥30的碱基所占百分比(Q30)均在96%以上,鸟嘌呤和胞嘧啶(CG)占比为53%,各个组的比对效率为98.18%~98.43%,表明转录组信息质量较高。3)以|log10[差异倍数(FC)]|>1且P<0.05为筛选标准,共筛选出236个显著差异表达基因(DEGs),其中108个基因表达上调,128个基因表达下调。4)基因本体论(GO)富集分析发现,DEGs主要富集在铁离子结合、聚合细胞骨架纤维、中间丝状体细胞骨架和中间丝状体中,并参与Rho家族鸟苷三磷酸酶(Rho GTPases)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和Hippo等信号通路的信号转导。5)京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析发现,DEGs显著富集到视黄醇代谢、谷胱甘肽代谢、亚油酸代谢、化学致癌、药物代谢-细胞色素P450和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路。由此可知,DHA在GMECs的免疫、细胞骨架构建、抗炎、抗癌及代谢等相关通路中具有明显作用,其中亚油酸代谢、PPAR信号通路能够在脂代谢方面发挥作用。

二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用的分析

目的:分析二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法:行细胞培养后运用噻唑蓝比色(MTT)法检测人胰腺癌细胞的增殖,采用流式细胞术检测人胰腺癌细胞的凋亡、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、环氧合酶-2(COX-2)的表达,统计分析不同浓度的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌细胞的存活率、凋亡率,并统计分析不同浓度的DHA培养液培养48 h人胰腺癌细胞的细胞周期分布及不同浓度的DHA培养液培养24 h人胰腺癌细胞Bcl-2、COX-2的表达。结果:0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的存活率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的凋亡率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05)。0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养48 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的G_(0)~G_(1)期、G_(2)~M期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05),S期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05)。0μg/mL的DHA培养液培养24 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞Bcl-2、COX-2的表达水平、蛋白荧光值均高于50μg/mL(P<0.05)。结论:DHA可抑制人胰腺癌细胞的生长,途径可能为下调人胰腺癌细胞中的Bcl-2、COX-2表达。

气相色谱法测定鱼油中的二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸及其品质评价

目的建立气相色谱法测定鱼油中的二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA),并对不同原料来源鱼油的品质进行分析与评价。方法对GB 5009.168—2016《食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》第一法内标法中的水解提取法、色谱条件和结果分析方法等分别进行优化,然后进行方法验证。应用优化后的方法检测实际样品鱼油中EPA与DHA的含量,并进行品质评价。结果EPA和DHA分别在5.57~278.50μg/mL和6.95~347.50μg/mL范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性均符合实验室质量控制规范、化学分析方法验证确认和内部质量控制要求,其加标回收率均在95%~105%之间,相对标准偏差均小于2%。通过对不同来源鱼油中的EPA和DHA含量进行分析,结果显示市场所售的鱼油存在假冒伪劣现象。结论该方法准确、灵敏,适用于鱼油中EPA和DHA含量的测定。市场所售的鱼油产品优劣掺杂,此方法可以作为鱼油品质评价与质量控制的科学依据。

二十二碳六烯酸标准样品的研制

建立了二十二碳六烯酸标准样品的研制方法。以裂壶藻为原料,利用高速逆流色谱制备分离,通过紫外吸收光谱、红外光谱、质谱和核磁共振等技术对二十二碳六烯酸进行结构确定与表征。标准样品通过高效液相色谱-紫外检测法进行了均匀性、稳定性检验和8家实验室联合定值。结果表明,该标准样品在95%的置信区间内均匀性良好;在4℃条件下可储存9天,在-20℃条件下可储存24个月;定值结果确定其纯度为98.95%,置信度为95%时扩展不确定度为0.17%。该标准样品达到了GB/T 15000.3—2008规定的技术要求,具有溯源性,可用于含有二十二碳六烯酸相关产品的质量控制和含量分析。

从深海鱼油中制备提纯二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)乙酯的研究

用尿素沉淀法和分子蒸馏法研究了二十碳五烯酸（ 简称 Ｅ Ｐ Ａ） 、二十二碳六烯酸（ 简称 Ｄ Ｈ Ａ） 乙酯的分离提纯。实验表明，尿素沉淀法能够将 Ｅ Ｐ Ａ、 Ｄ Ｈ Ａ 乙酯提纯到９０ ％ ，分子蒸馏法能提纯到７０ ％ 以上。两种方法对比，分子蒸馏法提纯工序简单，效率高，尿素沉淀法工序繁杂，效率低。

二十二碳六烯酸与氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞株MGC803的影响

目的评估二十二碳六烯酸(DHA)联合氟尿嘧啶(FU)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测DHA、FU单用和联合应用对细胞增殖的影响,Chou-Talalay联合指数原理计算药物单用和合用时的中效浓度(Dm)及合用指数(CI),流式细胞仪检测药物对细胞周期及凋亡的影响,Western blot检测bcl-2和caspase-3蛋白的表达。结果DHA可抑制MGC803细胞生长,低浓度DHA可促进正常细胞生长(P<0.05)。DHA能显著增强FU对胃癌细胞生长的抑制作用,将FU的Dm减少3.6～2.5倍;两者合用抑制效率达30%时呈协同作用(CI<1),并表现为显著的G_0/G_1期阻滞作用(P<0.05)。DHA能提高FU的诱发凋亡作用,促进剪切型caspase-3蛋白表达。结论DHA可抑制胃癌细胞株MGC803生长,与FU对胃癌细胞的抑制具有协同作用,可减少FU用量。

从鱼油中提取分离高纯度二十二碳六烯酸的试验研究

研究了用超临界ＣＯ２萃取技术与硝酸银络合相结合的方法，从鱼油提取分离高纯度二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）的试验工艺。结果表明：单独用超临界ＣＯ２只能将ＤＨＡ浓缩到７５％左右；而用两步法则可获得纯度为９５％以上的ＤＨＡ。

响应面法的脂肪酶富集金枪鱼油中二十二碳六烯酸甘油酯工艺优化的研究

以金枪鱼副产物为原料提取精炼鱼油,研究了皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida Rugosa)富集金枪鱼油二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)甘油酯的工艺条件。在单因素实验的基础上选取水油质量比、脂肪酶添加量、反应温度和时间4个因素为自变量,以甘油酯中DHA、ω-3含量和甘油酯得率为响应值,采用中心组合(box–behnken)进行响应面实验设计和分析。结果表明,最佳条件为水油比1:1.7,脂肪酶添加量1%,反应温度50℃,反应时间3 h。在此条件下,甘油酯中DHA质量分数为35.55%,ω-3质量分数为42.25%,甘油酯得率为73.85%。本课题成功建立了甘油酯中DHA、ω-3含量(R2=0.8832)和甘油酯得率(R^2=0.9425)的拟合模型。卡方检验分析表明这两种模型的预测值和实测值无显著性差异(P>0.05)。

气相色谱法测定鱼油软胶囊中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的柱前衍生化方法改进

目的建立柱前衍生-气相色谱法测定保健食品中二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）含量的分析方法。方法鱼油软胶囊经皂化后用1%的硫酸-甲醇甲酯化,用气相色谱法测定,FID检测器检测,色谱柱为DB-FFAP（30 m×0.25 mm,0.25μm）,进样口温度250℃,检测器温度260℃,柱温215℃,直接进样,外标法定量。结果 EPA和DHA在0.05~5 mg/mL范围内线性良好（r_（EPA）=0.9999,r_（DHA）=0.9999）,EPA和DHA的回收率分别为93.1%~102.3%和92.2%~103.9%,EPA和DHA的相对标准偏差均小于3%。结论该方法操作简便、快捷,避免了有毒试剂的使用,定量准确,重现性好,适合大批量样品的快速检测。

二十二碳六烯酸对神经细胞生长发育的影响

目的 :观察二十二碳六烯酸 (DHA)对神经细胞生长发育的影响。方法 :将无血清培养的新生大鼠大脑神经细胞分为实验组和对照组 ,实验组加入 0 .33mol/L乳化DHA4 0 μl。对两组细胞进行形态学观察及蛋白质含量测定。结果 :实验组大脑神经细胞的突起生长速度、胞体面积和直径、神经细胞存活率及蛋白质含量均显著高于对照组。结论 :DHA对神经细胞的生长有促进作用 。

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响。方法:将30只健康SD大鼠随机分为地面对照组(Ⅰ)、悬吊对照组(Ⅱ)和悬吊实验组(Ⅲ)。悬吊实验组鼠料中添加DHA、EPA,其他2组为普通鼠料。悬挂40d后利用激光衍射法测定红细胞变形指数、取向指数,荧光偏振法测定红细胞膜流动性,硫代巴比妥酸荧光法测定红细胞膜脂质过氧化物(LP0),激光共聚焦显微镜观测红细胞纤维型肌动蛋白的改变及含量。结果:失重下大鼠红细胞的变形指数、取向指数以及红细胞膜的流动性明显降低(P<0.05),LPO增加,红细胞形态和骨架发生改变,F-actin含量明显降低(P<0.05)。结论:在模拟失重条件下,红细胞膜流动性降低,DHA、EPA可拮抗损伤作用,对红细胞膜具有较强的保护作用。

鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的气相色谱-红外光谱分析

本文利用气相色谱-红外光谱联用仪对鱼油中的EPA和DHA进行了定性、定量的分析研究,建立了EPA-E和DHA-E的蒸气相红外标准谱图和气相色谱保留时间数据库,提供了一种在无法找到标准物质的情况下对鱼油中EPA和DHA进行定性、定量分析的简便准确的方法。