Sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯的酶法合成

以甘油三酯型鱼油为原料,利用天然DHA相对富集于甘油酯2位的特点,以1,3-特异性固定化脂肪酶催化制备Sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯(Sn-2 DHA-MAG)。建立了"格氏反应-薄层色谱-高效液相色谱"联用以Sn-2位DHA含量为标准筛选最佳反应原料的方法,随后考察了反应体系,硼酸浓度,反应温度和反应时间等因素以优化反应条件。结果表明,以优选的甘油三酯型鱼油为原料,50 mg/m L硼酸乙醇溶液∶鱼油∶固定化脂肪酶Lipozyme TL IM质量比等于40∶80∶18构建反应体系,在常温下反应4 h,反应产物减压蒸馏后,经硅胶柱层析纯化,所得Sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯的纯度达90%以上。

响应面法的脂肪酶富集金枪鱼油中二十二碳六烯酸甘油酯工艺优化的研究

以金枪鱼副产物为原料提取精炼鱼油,研究了皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida Rugosa)富集金枪鱼油二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)甘油酯的工艺条件。在单因素实验的基础上选取水油质量比、脂肪酶添加量、反应温度和时间4个因素为自变量,以甘油酯中DHA、ω-3含量和甘油酯得率为响应值,采用中心组合(box–behnken)进行响应面实验设计和分析。结果表明,最佳条件为水油比1:1.7,脂肪酶添加量1%,反应温度50℃,反应时间3 h。在此条件下,甘油酯中DHA质量分数为35.55%,ω-3质量分数为42.25%,甘油酯得率为73.85%。本课题成功建立了甘油酯中DHA、ω-3含量(R2=0.8832)和甘油酯得率(R^2=0.9425)的拟合模型。卡方检验分析表明这两种模型的预测值和实测值无显著性差异(P>0.05)。

原生二十二碳六烯酸纯牛奶对小鼠学习记忆功能的辅助改善作用

探讨了原生二十二碳六烯酸纯牛奶对小鼠学习记忆障碍的辅助改善作用。将SPF级昆明小鼠设置为正常小鼠、记忆获得障碍模型小鼠两个模型,每个模型中包含对照组,低(6.67 mg/kg体质量)、中(13.33 mg/kg体质量)、高(40.00 mg/kg体质量)剂量组。各组小鼠灌胃30 d的受试物后,依次进行跳台、避暗和水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力。跳台实验结果显示,与模型对照组相比,模型中、高剂量组测试期潜伏期显著延长(P<0.05)并且错误次数极显著减少(P<0.01);避暗实验结果显示,与阴性对照组相比,中剂量组消退期错误次数和错误动物数均显著减少(P<0.05);水迷宫实验结果显示,与模型对照组相比,模型中剂量组到达终点的总时间显著减少(P<0.05)。结论为原生二十二碳六烯酸纯牛奶可以通过延长测试潜伏期并减少错误次数和错误动物数起到辅助改善小鼠学习和记忆障碍的作用。

二十二碳六烯酸治疗癫痫的作用机制研究进展

癫痫是一种神经系统的慢性疾病,主要由大脑异常放电引起,可导致患者头痛、认知障碍及情绪异常波动等,严重影响患者身心健康,给家庭和社会带来沉重负担。目前关于癫痫的具体发病机制研究较少,且治疗癫痫的药物效果有限,还可产生一定的副作用,因此需寻找更多安全有效的天然产物预防和治疗癫痫。二十二碳六烯酸是人体必需的一种多不饱和脂肪酸,主要来源于海洋生物,具有提供能量、影响炎症反应、免疫反应和保护神经等多种生物功能。本文主要综述抑制细胞凋亡、抗氧化和抗炎等多种途径对二十二碳六烯酸治疗癫痫的研究,为癫痫治疗的新思路提供参考依据。

饲粮中添加富含二十二碳六烯酸和月桂酸单甘酯的复合物对公猪精液品质的影响

本试验旨在研究饲粮中添加富含二十二碳六烯酸(DHA)和月桂酸单甘酯(GML)的复合物对公猪精液品质的影响。选择48头19~24月龄杜洛克公猪,随机分成4组,每组12个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2和3组分别在基础饲粮中添加0.18%、0.24%和0.30%富含DHA和GML的复合物。试验期16周。结果表明:1)试验2和3组的精子DHA、n-3多不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量均极显著高于对照组(P<0.01)。2)在第16周时,试验1、2和3组的总精子数和有效精子数均显著高于对照组(P<0.05),精子畸形率均极显著低于对照组(P<0.01)。3)在第4、12和16周时,试验1、2和3组的精子膜完整性均极显著高于对照组(P<0.01);在第10周时,试验2和3组的精子膜完整性显著高于对照组(P<0.05)。4)试验1组的新鲜精液旋转运动精子比率显著低于对照组(P<0.05);在储存72 h后,试验1组旋转运动精子比率极显著低于对照组(P<0.01)。5)试验2组的血清丙二醛(MDA)含量极显著低于对照组和试验1、3组(P<0.01)。试验1和2组的新鲜精子超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著高于对照组(P<0.01),试验2组的新鲜精浆SOD活性显著高于对照组(P<0.05)。在储存24 h后,试验1、2和3组的精子MDA含量均极显著低于对照组(P<0.01)。6)试验1和2组的血清白细胞介素-6(IL-6)含量极显著低于对照组(P<0.01)。试验1和2组的粪便二胺氧化酶(DAO)含量极显著低于对照组(P<0.01),试验1和2组的粪便钙卫蛋白含量显著低于对照组(P<0.05)。由此可见,富含DHA和GML的复合物通过影响精子脂肪酸组成、氧化应激和炎症状态等方面对公猪精液品质产生了积极影响。

全顺式二十碳五烯酸甘油酯和二十二碳六烯酸甘油酯的制备工艺研究

目的：用高纯度的二十碳五烯酸（ＥＰＡ） 乙酯和二十二碳六烯酸乙酯制备ＥＰＡ、ＤＨＡ甘油酯的工艺。方法：用一定量的均相化试剂如油酸钾能使互不相溶的甘油和ＥＰＡ乙酯、ＤＨＡ乙酯形成均相反应溶液，并在１２０℃就开始发生酯交换反应。结果：ＥＰＡ乙酯、ＤＨＡ乙酯和甘油形成均相溶液后，在１７０℃１ｈ 内甘油脂转化率大于４５ ％ ，反应产物经过分子蒸馏提纯，可制得纯度大于７０％ 的ＥＰＡ甘油酯、ＤＨＡ甘油酯。结论：均相反应法结合分子蒸馏是一条制备高纯度ＥＰＡ 甘油酯、ＤＨＡ 甘油酯的可行工艺途径。

富二十二碳六烯酸-磷脂酰丝氨酸缓解环磷酰胺导致的小鼠肾损伤机制

目的:研究富二十二碳六烯酸-磷脂酰丝氨酸(docosahexaenoic acid-enriched phosphatidylserine,DHAPS)对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导小鼠肾损伤的改善作用及其机制。方法:32只雄性ICR小鼠随机分为正常组(CON组)、模型组(MOD组)、50 mg/kg mb DHA-PS组(50 DHA-PS组)和100 mg/kg mb DHA-PS组(100 DHA-PS组),每组8只。腹腔注射80 mg/kg mb CTX建立小鼠肾损伤模型,5 d后,MOD组和DHA-PS组分别灌胃等量生理盐水或DHA-PS,7 d后处死小鼠。测定各组小鼠肾脏指数、血清生化指标、肾脏氧化应激和炎症因子表达水平,分析组织病理变化及肾脏组织非靶向代谢组学。结果:与MOD组相比,DHA-PS可显著降低小鼠肾脏指数以及肌酐、尿素氮、胱抑素C和肾损伤分子-1水平(P<0.05);显著提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶等抗氧化酶活性(P<0.05),并显著降低丙二醛含量(P<0.05);显著下调白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α等促炎细胞因子的表达(P<0.05),显著上调抗炎细胞因子IL-10的含量(P<0.05)。染色结果显示,DHA-PS组小鼠肾脏组织结构明显恢复。此外,肾脏组织代谢组学分析结果表明,DHA-PS主要通过影响甘油磷脂代谢、嘌呤代谢及其代谢物缓解CTX导致的小鼠肾脏代谢紊乱。结论:DHAPS可通过减轻氧化应激和炎症反应、调节甘油磷脂代谢和嘌呤代谢等途径缓解CTX导致的小鼠肾损伤。

人体二十二碳六烯酸检测方法的研究进展

二十二碳六烯酸(DHA)作为人体必需的长链多不饱和脂肪酸之一,对儿童尤其是婴幼儿大脑发育、成人脑功能维持及心血管疾病预防等均有重要作用。DHA的人体来源主要依靠膳食补充,其缺乏人群较为普遍。因此,监测人体内DHA水平是预防因DHA不足或缺乏引起疾病的关键。目前人体DHA水平检测方法较多,但标准化的检测方法尚少见文献报道。该文通过综述近几年已发表的人体DHA水平评估或检测方法,主要包括膳食调查法、色谱法、核磁共振技术和近红外光谱技术,并对各种方法的优势和局限性进行分析总结,以期为人体DHA水平检测提供新思路及科学指导,并助力健康人群DHA水平参考区间的建立。

二十二碳六烯酸抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人结肠癌细胞系HT-29的影响及其作用机制。方法将人结肠癌细胞系HT-29分为对照组,25、50和100μmol/L DHA处理组,以及100μmol/L DHA+30μmol/L 740Y-P处理组。MTT检测HT-29细胞增殖,annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白以及p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达,RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA相对表达量。结果与对照组相比,DHA 25、50和100μmol/L处理HT-29细胞后细胞存活率下降(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平均下降(P<0.05或P<0.01),NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA相对表达量均下降(P<0.05或P<0.01)。此外,DHA 100μmol/L和740Y-P 30μmol/L共同处理HT-29细胞后,细胞生存率、蛋白磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt和p-mTOR)、mRNA相对表达量(NLRP3、Caspase 1和IL-1β)均低于对照组(P<0.05)和740Y-P 30μmol/L组(P<0.05),而高于DHA 100μmol/L组(P<0.05或P<0.01)。结论DHA抑制人结肠癌细胞系HT-29增殖,作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR和NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号分子通路有关。

β-乳球蛋白与二十二碳六烯酸互作效应对β-乳球蛋白致敏性机制的影响

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)是牛乳中的主要过敏原,以β-LG为原料,采用三维荧光光谱法、圆二色谱法、分子模拟对接法和间接竞争酶联免疫吸附测定法探究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)与β-LG互作效应及其对β-LG致敏性的影响。结果表明:DHA与β-LG结合后显著改变了β-LG中芳香族残基的微环境,使其极性增加;DHA通过疏水作用力与β-LG结合形成稳定复合物,且结合后,β-LG的二级结构发生改变,蛋白质骨架发生折叠,随着DHA浓度的增加,β-折叠相对含量先增加后减少,α-螺旋相对含量的变化与β-折叠相反,β-转角、无规卷曲相对含量变化没有明显规律;此外,在两者结合后,β-LG的抗原性降低,DHA浓度为3 mmol/L时,免疫球蛋白E结合能力抑制率约为29%。

甘油-卵黄-柠檬酸盐冷冻保护剂中添加二十二碳六烯酸对人精子冷冻前后运动学参数的影响

目的研究甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护剂中添加不同摩尔浓度二十二碳六烯酸(DHA)对人精子冷冻前后运动学参数的影响,探索n-3多不饱和脂肪酸在人精子冷冻中的应用价值。方法选取2016年3月~2017年4月广东省计划生育专科医院人类精子库的筛查期供精者的33例精液标本,以GEYC冷冻保护剂为基础,外源性DHA在精液-GEYC混合液中的终浓度分别为对照组0 mmol/L、DHA 1组0.317 mmol/L、DHA 2组0.634 mmol/L、DHA 3组1.268 mmol/L。采用SCA 5.2计算机辅助精子分析系统分别检测添加冷冻保护剂后以及冷冻复苏后0~8 h的精子运动学参数。结果冷冻前精液加入各组保护剂后,仅DHA 3组的VCL和VAP显著低于对照组(P<0.05),其他各组间的各项运动学参数差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻复苏后0、4、5、6、8 h,仅见DHA 3组偶有运动学参数下降,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05),冻后0~8 h大部分运动学参数各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论甘油-卵黄-柠檬酸盐冷冻保护剂中添加DHA未见冷冻前后人精子运动学参数的提高,适量添加DHA可能通过其他途径对冷冻精子产生影响,大量添加DHA可能对冷冻前后部分运动学参数有负面影响。

从深海鱼油中制备提纯二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)乙酯的研究

用尿素沉淀法和分子蒸馏法研究了二十碳五烯酸（ 简称 Ｅ Ｐ Ａ） 、二十二碳六烯酸（ 简称 Ｄ Ｈ Ａ） 乙酯的分离提纯。实验表明，尿素沉淀法能够将 Ｅ Ｐ Ａ、 Ｄ Ｈ Ａ 乙酯提纯到９０ ％ ，分子蒸馏法能提纯到７０ ％ 以上。两种方法对比，分子蒸馏法提纯工序简单，效率高，尿素沉淀法工序繁杂，效率低。

超临界流体色谱法分离二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸

以二氧化碳单一作流动相,ODS柱为固定相,用超临界流体色谱法分离了二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),考察了操作温度和压力对容量因子(k′)和分离度(R)的影响，并根据EPA和DHA在超临界二氧化碳中溶解度的变化规律,对实验结果做了定性的解释。

二十二碳六烯酸和花生四烯酸在婴儿配方奶粉中的应用

介绍了母乳中天然存在的两种多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(AA)在婴儿生长发育中的作用及其在配方奶粉中强化对非母乳喂养婴儿营养的重要性,并介绍了各专家组织对DHA和AA在婴儿配方奶粉中补充的推荐及目前的应用情况。探讨了DHA和AA的两种来源,即天然来源和利用生物技术发酵生产。DHA和AA的天然来源主要是鱼油和蛋黄,而目前商业上大都利用生物技术以微藻和真菌发酵生产DHA和AA。介绍了生物技术发酵生产DHA和AA的工艺,并讨论了发酵产品在婴儿配方奶粉中应用的安全性。

孕妇、乳母二十二碳六烯酸摄入水平对婴儿早期运动发育和视功能的影响

【目的】 追踪观察孕妇、乳母膳食不同二十二碳六烯酸 (DHA)摄入水平对婴儿早期运动发育和视功能的影响。 【方法】 选取孕 2 4周前妇女 14 6名 ,在孕 ( 2 2± 2 )周、孕 ( 3 8± 2 )周、产后 3月± 2周进行膳食调查。再随机抽取其中 48名母乳喂养婴儿于 2、3个月龄时用中国儿童发展中心 (CDCC)制定的 0～ 3岁婴幼儿智能发育量表进行评价 ,得出智力和运动发育指数 (MDI和PDI) ,婴儿 3个月时测双眼视网膜电图 (electroretinograph ,ERG)。按 3次平均膳食DHA摄入量将孕妇、乳母分成三组 :A组DHA <80mg/d ,14例 ;B组为DHA平均摄入量 80～ 15 9mg/d组 ,2 2例 ;C组为DHA≥ 160mg/d组 ,12例。 【结果】 孕妇、乳母日均DHA摄入量为 ( 10 3 .17± 5 1.43 )mg/d。C组婴儿PDI在 2、3月龄时均显著高于A组 (P <0 .0 5 )。A组婴儿视网膜电图多项指标显著低于其它两组 (P <0 .0 5 )。 【结论】 孕妇、乳母摄入DHA≥

二十二碳六烯酸对老年大鼠脑组织抗氧化和脂肪酸的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)改善老年大鼠抗氧化的可能机制。方法:动物分为青年组(7月龄青年雄性大鼠)、老年组(20月龄雄性大鼠)、DHA低剂量组(灌喂20月龄雄性大鼠DHA 180mg/(kg.d)42d)、DHA高剂量组(灌喂20月龄雄性大鼠360mg/(kg.d)42d),处死大鼠后测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量,然后用气相色谱-质谱联用分析法分析脑脂肪酸组成及含量,最后用薄层层析和磷钼酸法分析磷脂构成。结果:与老年大鼠相比,灌喂DHA的各组大鼠的脑中SOD、GSH-Px、CAT活性显著提高,同时灌喂DHA减少MDA的含量;对脑脂肪酸和磷脂的分析,表明灌喂DHA显著提高脑DHA含量,增加总n-3脂肪酸/总n-6脂肪酸和DHA/AA(二十碳四烯酸)的比率,显著降低AA含量,还能显著提高磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸及神经鞘磷脂的含量。结论:DHA显著提高自然衰老大鼠的脑组织抗氧化能力,其机制可能与改变脑脂肪酸组成有关。

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的生理功能

综述了二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的来源及生理功能的研究新进展,指出了二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸应用中存在的问题及今后的发展方向,为其进一步的开发利用提供信息。

二十二碳六烯酸与氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞株MGC803的影响

目的评估二十二碳六烯酸(DHA)联合氟尿嘧啶(FU)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测DHA、FU单用和联合应用对细胞增殖的影响,Chou-Talalay联合指数原理计算药物单用和合用时的中效浓度(Dm)及合用指数(CI),流式细胞仪检测药物对细胞周期及凋亡的影响,Western blot检测bcl-2和caspase-3蛋白的表达。结果DHA可抑制MGC803细胞生长,低浓度DHA可促进正常细胞生长(P<0.05)。DHA能显著增强FU对胃癌细胞生长的抑制作用,将FU的Dm减少3.6～2.5倍;两者合用抑制效率达30%时呈协同作用(CI<1),并表现为显著的G_0/G_1期阻滞作用(P<0.05)。DHA能提高FU的诱发凋亡作用,促进剪切型caspase-3蛋白表达。结论DHA可抑制胃癌细胞株MGC803生长,与FU对胃癌细胞的抑制具有协同作用,可减少FU用量。

从鱼油中提取分离高纯度二十二碳六烯酸的试验研究

研究了用超临界ＣＯ２萃取技术与硝酸银络合相结合的方法，从鱼油提取分离高纯度二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）的试验工艺。结果表明：单独用超临界ＣＯ２只能将ＤＨＡ浓缩到７５％左右；而用两步法则可获得纯度为９５％以上的ＤＨＡ。