基于益气活血利水法探讨二参真武汤改善心肾阳虚型慢性心力衰竭大鼠的作用机制

目的通过检测氧化应激损伤,研究二参真武汤改善心肾阳虚型慢性心力衰竭(CHF)大鼠心脏功能的作用机制。方法36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、二参真武汤治疗组(二参真武汤低、中、高剂量组)及阳性对照组(贝那普利),每组6只。通过甲状腺切除后0.02%阿霉素注射造模。造模成功后分别给予二参真武汤(3.96、7.92、15.84 g/kg)及贝那普利(0.5 mg/kg)灌胃4周。给药结束通过多普勒超声检测大鼠舒张期左室内径(left ventricular in⁃ner diameter,LVIDd),三尖瓣和二尖瓣血流频谱比值(E/A峰),ELISA法检测血清生化指标氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、血清总三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA),醛固酮(aldosterone,ALD),血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,Ang-Ⅱ)含量。结果造模后大鼠血清NT-proBNP含量显著升高(P<0.01),T3、T4含量显著降低(P<0.001),提示模型建立成功;模型组LVIDd显著增加(P<0.01),E/A值显著降低(P<0.01);血清ALD(P<0.001),Ang-Ⅱ含量(P<0.001),ROS(P<0.001),MDA(P<0.001)显著升高,SOD(P<0.001)显著降低;二参真武汤显著降低NT-proBNP、ALD、Ang-Ⅱ、ROS、MDA含量和LVIDd显著升高E/A值,二参真武汤中剂量显著升高SOD含量。结论二参真武汤可通过温阳活血利水之功效,纠正大鼠RASS系统异常,降低氧化应激,改善心肾阳虚型CHF大鼠心脏功能。

二参真武汤调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制心肌纤维化的体外实验研究

目的 探究二参真武汤抑制心肌细胞纤维化的作用机制。方法 采用灌胃给予SPF大鼠二参真武汤、贝那普利7 d的方法制备含药血清,从出生3 d内的乳鼠心脏中提取原代心肌成纤维细胞,采用免疫荧光和台盼蓝染色法鉴定细胞纯度与成活率,采用CCK-8法确定二参真武汤含药血清的最佳给药浓度与给药时间,采用血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激原代心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型,将原代心肌成纤维细胞分为正常组、模型组、二参真武汤组、贝那普利组,采用ELISA法检测胶原蛋白(collagenase,Col)-Ⅰ和Col-Ⅲ含量,采用Western blot法检测平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平,qRT-PCR法检测α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平。结果 提取的原代心肌成纤维细胞纯度与成活率均达到95%以上。与正常组比较,模型组、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量显著升高(P<0.05),α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,二参真武汤组原代心肌成纤维细胞中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 二参真武汤抑制心肌纤维化的机制与调节PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。