LPS不能诱导原代培养肺泡二型上皮细胞分泌HMGB1

目的观察脂多糖(LPS)刺激对原代培养大鼠肺泡二型上皮细胞(AT-Ⅱ)分泌高迁移族蛋白1(HMGB1)的影响。方法以终浓度为1、2、10和20μg/mL的LPS刺激原代培养的AT-Ⅱ分别在6h、24h,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α、HMGB1的含量。结果 ELISA结果显示,与空白对照组相比,各处理组给予LPS(1-20)μg/mL刺激后诱导AT-Ⅱ的炎症因子TNF-α在6和24h后分泌均显著增多,差异有显著性(P<0.05),并有剂量依赖性,而HMGB1的分泌均未见明显改变,差异无显著性(P>0.05)。结论 LPS诱导AT-II可复制急性肺损伤(ALI)细胞模型,促进炎症因子TNF-α分泌增多,但不能诱导HMGB1的分泌。

新生鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化与鉴定

目的从新生SD大鼠体内分离提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,为肺部相关疾病提供体外模型方法胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ消化分离细胞,差速贴壁法和大鼠IgG免疫黏附法纯化。采用倒置显微镜、透射电镜、共聚焦显微镜以及BCIP/NBT碱性磷酸试剂盒对细胞进行观察和鉴定。结果采取胰蛋白酶、胶原酶消化得到细胞,活力为(94.82±1.64)%,纯度为(95.96±0.90)%。倒置显微镜观察细胞内呈立方形,岛状生长,胞浆内有黑色颗粒;透射电镜下观察到特异性板层小体;共聚焦显微镜下可看到表面活性蛋白C表达;BCIP/NBT碱性磷酸试剂盒鉴定后可观察到细胞胞浆内有深蓝色颗粒。结论用胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ消化可得到高纯度的肺泡Ⅱ型上皮细胞,可满足体外实验的需要。

非编码RNA与特发性肺纤维化进程中的干细胞异常

背景:非编码RNA随着高通量技术的发展而逐渐引发关注,其广泛参与呼吸系统各疾病病程。特发性肺纤维化进程伴随着干细胞功能异常,近来研究表明非编码RNA与干细胞功能异常存在联系,进而影响肺纤维化进展。以非编码RNA为靶点的基因疗法暗示了阻断纤维化过程的可能性。目的:总结非编码RNA在特发性肺纤维化干细胞功能异常和治疗中的研究进展。方法:以“IPF,Stem cells,miRNA,lncRNA,circRNA,treatment”为英文检索词,以“特发性肺纤维化、干细胞、miRNA、lncRNA、circRNA、治疗”为中文检索词,检索PubMed、Wiley InterScience、中国知网和万方数据库,范围囊括近10年的文献,然后依据纳入和排除标准进行筛选,最终纳入82篇文献进行分析。结果与结论:①文章首次总结了近年来非编码RNA在特发性肺纤维化的干细胞异常机制中的相关性研究,揭示了miRNA,lncRNA及circRNA共同调控了干细胞的异常激活、分化等活动,并且miRNA常作为后两者作用的中心环节。②现有的临床试验一定程度上肯定了干细胞移植疗法治疗特发性肺纤维化的安全性,但在疗效方面,仅稍改善了患者弥散功能却未能明确缓解纤维化病变的程度,其结果还需要更多设立安慰剂对照的随机试验来验证。③靶向非编码RNA的基因治疗优势在于具有多基因调控特性,可以从上游干预干细胞异常,目前其在体内外实验已取得突破性进展,并被证实与部分药物的作用靶点相关。④然而,特发性肺纤维化基因疗法的缺点是只能产生短期效应,同时其面临着有效剂量、体内稳定性及输送等问题,这些问题还需未来研究进一步解决。⑤总之,虽然非编码RNA疗法自身存在缺陷,但也不失为一种改善肺纤维化干细胞功能异常的新途径,将其与干细胞移植结合,取长补短,可能发挥更好的疗效。