襁褓体位对大鼠髋关节软骨中二型胶原、蛋白聚糖及金属基质蛋白酶-13表达的影响

目的：探索襁褓体位固定对大鼠髋关节发育及髋关节软骨中特异性基质二型胶原（ Colla-gen-Ⅱ）、蛋白聚糖（ Aggrecan ）及金属基质蛋白酶-13（ MMP-13）表达的影响。方法：将64只新生Wistar大鼠编号后随机分为实验组（33只）和对照组（31只）。实验组采用医用布胶带将新生大鼠双髋、双下肢伸直捆绑1周，对照组大鼠不做干预。相同条件下饲养至第8周时，拍摄两组大鼠骨盆正位X线片，解剖髋关节并测量股骨头横径、髋臼横径及股骨头高度、髋臼窝深度并进行比较，用Real-time PCR检测两组大鼠股骨头软骨、髋臼侧软骨中Collagen-Ⅱ、MMP-13、Aggrecan mRNA的表达。结果：造模至第8周时，影像学及髋关节解剖大体形态学显示，实验组大鼠股骨头、髋臼侧发育呈髋关节发育不良及关节退变表现；同对照组相比，实验组大鼠髋关节股骨头横径、髋臼横径及髋臼窝深度均明显短缩，差异均有统计学意义（P＜0．05）。 Real-time PCR结果显示，实验组大鼠股骨头软骨中Collagen-Ⅱ、Ag-grecanm RNA表达量较对照组明显降低，MMP-13 mRNA表达量较对照组明显升高（P＜0．05）；实验组髋臼侧软骨中Collagen-Ⅱ、MMP-13和Aggrecan mRNA的表达均较对照组显著升高（ P＜0．05）。结论：双下肢伸直襁褓体位捆绑可诱导新生大鼠髋关节发育不良并可继发髋关节退变，该退变机制可能由于在应力环境下关节软骨中具有软骨破坏作用的MMP-13 mRNA的表达上调，从而导致股骨头软骨基质中Collagen-Ⅱ、Aggrecan mRNA的合成降低所致。

针刀松解法对膝骨性关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-3和Ⅱ型胶原蛋白表达的影响

目的：观察针刀松解法对膝骨关节炎（KOA）兔软骨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）的影响,探讨针刀治疗KOA的机制。方法将40只清洁级6月龄健康新西兰兔随机取10只为空白组,剩余30只统一造模,关节制动方法制造KOA模型,造模成功后将30只兔随机分为模型组、针刀组和电针组,每组10只。针刀组以膝关节内外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏、横剥法进行针刀松解,每星期1次,共治疗3次；电针组取阴陵泉、阳陵泉、内膝眼、犊鼻穴,电针频率2-100 Hz,强度为3 mA,每次电针20 min,每星期治疗3次,共治疗3星期。光镜观察软骨形态改变,Western blot法检测膝关节软骨Col-Ⅱ、MMP-3蛋白表达水平。结果 HE染色模型组家兔膝关节滑膜存在不同程度增生、水肿,光镜下见模型组关节软骨呈明显退行性变。电针组和针刀组软骨组织损伤减轻,且有修复趋势。针刀组兔膝关节软骨破坏程度明显减轻。针刀组Col-Ⅱ蛋白表达较模型组明显升高（P＜0.01）；针刀组 Col-Ⅱ蛋白表达与电针组比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）；模型组 Col-Ⅱ蛋白表达水平降低,与其他各组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。模型组 MMP-3蛋白表达较空白组明显升高（P＜0.01）；针刀组MMP-3蛋白表达较空白组降低,但无统计学意义（P＞0.05）；针刀组MMP-3蛋白表达与模型组和电针组比较,差异均具有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）。结论针刀松解治疗KOA兔,能够使软骨MMP-3水平下降,Col-Ⅱ表达水平升高,从而阻抑软骨退变,起到治疗作用。

间接炙与青霉胺在Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型中的病理观察

目的 :观察实验模型处理后的病理变化 ,探讨间接炙对类风湿性关节炎的疗效。方法 :将牛 型胶原复制成功的大鼠关节炎模型 ,分成间接炙、青霉胺、病理组等三组动物。观察各组动物实验前后的关节指数变化 ,处死后各组踝关节以上关节的滑膜炎症、关节软骨及骨损害等病理变化。结果 :关节指数 ,间接炙组与病理组有显著差异(P<0 .0 5) ;关节炎 ,在 、 级中 ,间接炙组与病理组有显著差异 (P<0 .0 5)。结论 :间接炙与青霉胺对牛 型胶原复制的大鼠关节炎模型有相同的作用 ,能控制滑膜炎症 ,减轻关节软骨和骨的损害。

高强度炎症反应诱导关节软骨特异性瓜氨酸化抗原表达

目的探讨关节软骨蛋白瓜氨酸表位的表达情况,以及瓜氨酸化表位对抗瓜氨酸蛋白抗体(ACPAs)的免疫应答的影响。方法体外诱导实验:实验组加不同浓度梯度的脂多糖、热灭活细菌(大肠杆菌、金色葡萄球菌)或二型胶原(CII)特异性单克隆抗体等不同刺激物诱导体外培养关节软骨蛋白瓜氨酸化,等量PBS作为对照组,利用特异性结合瓜氨酸化表位的单克隆抗体ACC4(IgG1)进行免疫组织化学染色,ACC1(IgG2a)作为阳性对照,Hy2.15(IgG1)和L243(IgG2a)分别作为同型阴性对照,显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达;体内诱导实验:SD大鼠右膝关节内注射不同浓度脂多糖作为实验组,左膝关节内注射等量PBS为对照组,3 d后取膝关节组织,制成冰冻切片,利用上述抗体进行免疫组化染色,显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达;建立不同种系的胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠模型,评价其疾病发生率和严重程度,同时收集小鼠血清与高滴度抗瓜氨酸化抗体的类风湿性关节炎患者血清,采用液相芯片技术检测小鼠及类风湿患者血清中抗瓜氨酸化蛋白抗体水平,并用免疫组织化学检测关节炎小鼠关节软骨瓜氨酸化蛋白的表达水平。结果特异性结合瓜氨酸化CII表位的ACC4抗体未能结合至经不同诱导的关节软骨组织;与健康对照组相比,ACC4抗体和含高滴度的抗瓜氨酸化蛋白抗体的类风湿性关节炎患者血清中的抗体均能结合至CIA小鼠关节炎症关节软骨周围的滑膜组织;成功构建不同种系小鼠类风湿性关节炎模型,其发病率和疾病严重程度无统计学差异(P>0.05);液相芯片技术分析结果显示,小鼠血清中的抗瓜氨酸化抗体低表达或几乎不表达,但抗CII三螺旋结构多肽的抗体反应性较强。结论轻度急性炎症反应不足以引起关节软骨蛋白瓜氨酸化,其特异性抗原表位的表达需要高强度的炎症反应。二型胶原诱导的小鼠关节炎模型中炎症关节软骨蛋白可表达瓜氨酸化抗原表位,但瓜氨酸化抗原表位的表达不足以引起小鼠体内抗瓜氨酸化抗体的免疫应答,其免疫应答需要更多的刺激信号来诱导。

苦参碱衍生物抗关节炎作用研究

目的研究苦参碱衍生物M19对二型胶原诱导性大鼠关节炎(CIA)的治疗作用。方法将60只大鼠随机分为6组,分别为空白组,模型组,吲哚美辛治疗组,M19低、中、高剂量(2.5、5、10 mg/kg)组。采用二型胶原诱导建立关节炎模型,分别对大鼠足趾肿胀和体重进行测定并对关节炎进行评分,HE染色观察大鼠关节软骨及滑膜组织病理变化,Micro-CT观察大鼠骨关节组织损伤情况。结果苦参碱衍生物M19各剂量组均能不同程度降低大鼠关节炎足趾肿胀程度,增加体重,抑制大鼠关节炎性细胞浸润和滑膜增生,并对骨组织具有一定的保护作用。结论苦参碱衍生物M19对二型胶原诱导的关节炎具有一定的治疗作用。

低频脉冲电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞软骨样细胞分化

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一类具有多向分化潜能的细胞。低频脉冲电磁场(LEPEMFs)治疗可导致哺乳动物细胞水平的生物化学变化,加速组织修复。因此,我们假设LFPEMFs可以促进体外大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向软骨样细胞分化。实验分为3组:1)LFPEMFs组,rBMSCs暴露于50Hz、1mT低频脉冲电磁场,30min/d;2)成软骨诱导组,采用软骨诱导介质培养rBMSCs;3)对照组,采用完全培养介质培养rBMSCs。通过倒置相差显微镜逐日连续观察rBMSCs的生长状况和形态特征。分别于实验第10、15和20d收集各组rBMSCs标本,采用实时荧光定量PCR方法检测Ⅱ型胶原(ColⅡ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA表达,采用组织化学与免疫组化方法检测aggrecan和ColⅡ的蛋白表达。结果表明:在各时间点,LFPEMFs组与成软骨诱导组的ColⅡ、ag-grecan mRNA表达和蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。本实验提示,LFPEMFs可以促进rBMSCs向软骨样细胞分化。