基于HPLC-Q-TOF/MS多成分含量和指纹图谱的加味二妙颗粒质量评价

目的 建立加味二妙颗粒指纹图谱以及多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法 采用HPLC-Q-TOF/MS分析加味二妙颗粒中的化学成分。色谱柱为Wondasil C18Superb(250 mm×4.6 mm, 5μm)柱,流动相为乙腈-体积分数0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,对10批加味二妙颗粒进行指纹图谱和4种指标性成分含量测定。结果 HPLC-Q-TOF/MS技术共鉴定出加味二妙颗粒中144个化合物,指纹图谱中标定了15个共有峰,并通过对照品比对指认出(R,S)-告依春、去乙酰车叶草苷酸甲酯、盐酸黄柏碱、橙皮苷等9个峰,加味二妙颗粒指纹图谱的相似度均>0.95;测定(R,S)-告依春、落新妇苷、橙皮苷和小檗碱4个指标性成分含量,质量分数分别为0.021 1~0.056 8 mg·g^(-1)、0.200 9~0.552 3 mg·g^(-1)、0.274 1~0.719 1 mg·g^(-1)、0.237 1~0.704 9 mg·g^(-1)。结论 建立的加味二妙颗粒指纹图谱和多成分含量测定方法能够全面反映加味二妙颗粒的质量特征,亦为建立其制剂质量标准提供了依据。

HPLC法同时测定加味二妙颗粒中7种成分及指纹图谱建立

目的建立HPLC法同时测定加味二妙颗粒(黄柏、苍术、土茯苓等)中黄柏碱、盐酸小檗碱、盐酸药根碱、(R,S)-告依春、落新妇苷、橙皮苷、白术内酯Ⅲ的含有量,并建立指纹图谱。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Amethyst C18-H色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以0.05 mol/L磷酸二氢钾-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长237、291 nm;柱温35℃。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r=1),平均加样回收率95.77%~110.36%,RSD 0.06%~2.94%。14批样品指纹图谱中有20个共有峰,相似度均大于0.990,有5个被鉴定出(5-羟甲基糠醛、黄柏碱、落新妇苷、橙皮苷、盐酸小檗碱)。结论该方法稳定可靠,重复性好,可用于加味二妙颗粒的质量控制。

“加味二妙颗粒”治疗CIN合并HPV感染探析

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈上皮内瘤变(CIN)以及宫颈癌发生的必要因素。因此对病毒感染进行有效干预具有重要意义。根据本病多见湿热下注证,在祛湿名方"二妙丸"的基础上随症加减组成"加味二妙颗粒",治疗CIN合并HPV感染,临床收效满意。附验案1则以佐证。

加味二妙颗粒联合尤靖安治疗人乳头瘤病毒持续感染伴CINⅠ临床研究

目的:观察加味二妙颗粒联合尤靖安治疗HPV伴CINⅠ持续感染临床疗效。方法:将60例HPV持续感染伴CINⅠ的患者随机分为治疗组、对照组,每组30例。治疗组采用加味二妙颗粒联合尤靖安治疗,对照组仅予尤靖安。以3个月为1个疗程,两组均治疗2个疗程,观察HPV转阴率、CINⅠ逆转率、中医证候积分变化及临床疗效情况。结果:(1)治疗组HPV转阴26例,对照组HPV转阴19例,两组HPV转阴率比较有显著的统计学差异,治疗组的HPV转阴率明显高于对照组。(2)治疗组CINⅠ逆转27例,对照组CINⅠ逆转20例,治疗组CINⅠ的逆转率明显高于对照组。(3)按中医证候积分比较:两组治疗前后积分均明显减少,治疗后组间比较,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。(4)治疗组、对照组总有效率为93.33%、73.33%,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。结论:加味二妙颗粒联合尤靖安对于治疗湿热下注型HPV伴CINⅠ持续感染的患者有较好临床疗效,能有效清除持续感染的HPV并且有效逆转CINⅠ,在改善中医临床证候方面有一定优势。

加味二妙颗粒提取工艺研究

目的考察和优选加味二妙颗粒最佳提取工艺。方法采用Agilent 1100高效液相色谱仪测定盐酸小檗碱、黄柏碱、橙皮苷的含量,以水提取得膏率,盐酸小檗碱、黄柏碱、橙皮苷转移率的综合评分为指标,在单因素试验的基础上进行正交试验,优选加味二妙颗粒最佳提取工艺。结果加味二妙颗粒最佳提取工艺为:物料比15 ml/g,提取4次,每次60 min,其中提取次数有显著性影响。结论验证试验结果表明,优选的工艺有效成分转移率相对较高,稳定、可行,为加味二妙颗粒的工业化生产提供参考依据。

加味二妙颗粒联合辛复宁治疗慢性宫颈炎伴高危型HPV持续感染的临床研究

目的:观察加味二妙颗粒联合辛复宁治疗慢性宫颈炎伴高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染的疗效。方法:将92例慢性宫颈炎伴HR-HPV持续感染的患者随机分为中药组、西药组、联合用药组,中药组30例仅采用加味二妙颗粒治疗,西药组31例仅采用辛复宁治疗,联合用药组31例采用加味二妙颗粒联合辛复宁治疗。以3个月为1个疗程,3组均使用2个疗程,比较3组临床疗效、HR-HPV转阴率以及中医证候积分变化情况。结果:(1)联合用药组HR-HPV转阴27例,中药组HR-HPV转阴19例,西药组HR-HPV转阴18例,3组HPV转阴率比较,联合用组显著高于中药组、西药组,差异均有统计学意义(P<0.05),中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)3组治疗后中医证候积分均减少,治疗后组间比较,联合用药组积分明显低于中药组、西药组(P<0.05)。(3)联合用药组、中药组、西药组的总有效率分别为93.55%、73.33%、67.74%,联合用药组临床疗效优于中药组、西药组(P<0.05),中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:加味二妙颗粒联合辛复宁治疗脾虚湿热型慢性宫颈炎伴HR-HPV持续感染的患者有较好临床疗效,可有效清除持续感染的高危型HPV,改善中医临床证候。

加味二妙颗粒联合重组人干扰素α2b阴道泡腾胶囊治疗高危型人乳头瘤病毒感染患者的效果及对阴道微生态的影响

目的探讨加味二妙颗粒联合重组人干扰素α2b阴道泡腾胶囊治疗高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染患者的效果及对阴道微生态的影响。方法选择HR-HPV感染患者60例为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与研究组,每组30例。两组均给予重组人干扰素α2b阴道泡腾胶囊治疗,研究组联合加味二妙颗粒治疗,比较两组的治疗总有效率、HPV转阴率及复发率、阴道微生态变化情况及药物不良反应。结果研究组治疗总有效率为93.33%,高于对照组的73.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组中医证候积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组中医证候积分均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组HPV转阴率为80.00%,高于对照组的53.33%;疾病复发率为3.33%低于对照组20.00%,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组阴道微生态情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组阴道清洁度正常率高于对照组,过氧化氢(H_(2)O_(2))及白细胞酯酶(LE)阳性表达率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论加味二妙颗粒联合重组人干扰素α2b阴道泡腾胶囊治疗HR-HPV病毒感染的疗效显著,有助于提高患者机体免疫力,改善临床症状,调节阴道微生态的稳定,进而清除HPV病毒,且安全有效,无明显不良反应发生,值得进一步在临床中推广应用。

加味二妙颗粒安慰剂的制备工艺及模拟效果评价研究

探索加味二妙颗粒安慰剂的制备工艺并开展模拟效果评价,为加味二妙颗粒临床试验提供合格的安慰剂样品,也为中药颗粒剂型安慰剂的制备与质量评价提供参考。在加味二妙颗粒综合分析结果的基础上利用正交试验进行其安慰剂制备的味道模拟和颜色模拟小试,并通过初步人工评价确定安慰剂处方:糊精10 g,党参浸膏5.0 g,苦瓜提取物1.6 g,乌梅提取物0.3 g,甜菊糖苷0.1 g,蔗糖八乙酸酯0.004 g,靛蓝0.004 g,柠檬黄0.003 1 g,日落黄0.001 8 g,乔木苦茶粉0.001 8 g,焦糖0.001 3 g。根据安慰剂处方进行中试。对安慰剂的模拟效果进行独立性、对比性人工评价及电子鼻、电子舌客观化检测,结果显示此安慰剂处方在独立性人工评价中错误率较高,在对比性人工评价中与加味二妙颗粒得分差距不大,相似度为99.61%;电子鼻检测安慰剂处方与加味二妙颗粒气味相似度为99.19%,电子舌检测结果显示两者口味差距不大,相似性较高。因此,加味二妙颗粒安慰剂模拟效果较好,与加味二妙颗粒相似度高,应用于临床试验时不易破盲。此研究为中药颗粒剂型安慰剂的制备及质量评价提供了参考,对促进中药颗粒剂型安慰剂生产的规模化,推动中药安慰剂的临床应用,提高中药疗效的说服力及认可度起到一定的积极作用。

二妙颗粒的制备与质量标准研究

目的：制备二妙颗粒并建立其质量标准.方法：采用蒸馏法提取苍术中的挥发油;采用水煎煮法提取黄柏药液;采用薄层色谱法对中药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对制剂中的盐酸小檗碱进行含量测定.结果：盐酸小檗碱检测浓度在2.0～20.0 μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.999 8）;平均回收率为100.1%（RSD=1.21%）.结论：该制剂制备工艺合理,质量标准可行、可靠.

加味二妙颗粒联合干扰素调节宫颈阴道微生态清除HR-HPV感染临床研究

目的观察加味二妙颗粒联合干扰素清除慢性宫颈炎伴HR-HPV持续感染的临床疗效,初步探讨加味二妙颗粒与干扰素联合用药对阴道微生态的影响及阴道微生态改变与HR-HPV转归的相关性。方法将57例慢性宫颈炎伴HR-HPV持续感染患者随机分为联合用药组(加味二妙颗粒联合干扰素治疗)29例、干扰素组28例,1个疗程为3个月,2个疗程为观察终点,比较两组HR-HPV转阴率、中医证候积分及临床疗效,并观察两组治疗前后阴道分泌物清洁度、过氧化氢及白细胞酯酶变化以评价阴道微生态改善情况。结果①HR-HPV联合用药组HR-HPV转阴率68.97%高于干扰素组42.86%,差异有统计学意义(P<0.05)。②治疗后两组中医证候积分均明显减少,且联合用药组低于干扰素组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。③联合用药组、干扰素组总有效率分别为93.10%、71.43%,联合用药组临床疗效优于干扰素组(P<0.05)。④阴道微生态指标:治疗后两组清洁度异常检出率、过氧化氢及白细胞酯酶阳性表达率均下降,联合用药组清洁度、过氧化氢、白细胞酯与HR-HPV转阴的相关系数分别为0.316、0.500、0.516,经检验差异均有统计学意义(P<0.05)。结论①加味二妙颗粒联合干扰素治疗湿热下注型慢性宫颈炎伴HR-HPV持续感染的临床疗效显著,在清除HR-HPV感染、改善患者阴道微生态及中医证候方面明显优于单用干扰素,值得进一步在临床中推广应用。②阴道微生态的改善可促进HR-HPV转阴。

加味二妙颗粒联合重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊治疗宫颈上皮内瘤变的疗效及对患者免疫功能的影响

目的:探讨加味二妙颗粒联合重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊治疗宫颈上皮内瘤变的疗效及对患者免疫功能的影响。方法:将西北妇女儿童医院妇科门诊自2018年1月至2019年1月收治的确诊为宫颈上皮内瘤变患者300例作为研究对象,将其随机的分为研究组和对照组,每组各150例。研究组患者给予加味二妙颗粒联合重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊进行治疗,对照组患者给予重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊进行治疗,比较两组患者治疗后的临床总有效率,治疗前后CD3^+、CD4^+、CD8^+、NK细胞水平和中医证候评分的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,研究组临床总有效率为91.33%,明显高于对照组(74.67%,P<0.05)。两组治疗后CD3^+、CD4^+、CD8^+、NK细胞水平均较治疗前明显升高,且研究组以上指标显著高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后中医证候评分降低程度明显优于对照组,其不良反应发生率为10.00%,明显低于对照组(28.67%,P<0.05)。结论:与单用重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊治疗相比,加味二妙颗粒联合使用重组人干扰素a2b阴道泡腾胶囊治疗宫颈上皮内瘤变患者可显著提高患者的免疫功能,缓解症状,提高治疗效果,且安全性更高。

任青玲从湿邪论治宫颈持续性人乳头瘤病毒感染经验

我国宫颈癌每年的新发病例和死亡病例仍在上升,人乳头瘤病毒的持续感染是其发生发展的重要危险因素,且临床目前没有治疗人乳头瘤病毒的特效药。近年来,中药制剂对子宫颈人乳头瘤病毒感染及其相关癌前病变的治疗成为研究热点。任青玲教授以湿邪为切入点,阐述持续性人乳头瘤病毒感染多因脾虚失运,湿邪内停,久而酿毒所致,治法以健脾除湿为基础,兼以祛湿解毒,辅以雷火灸外治,因势利导,使邪祛则正安。现将任师临证经验总结如下,并附医案一则,为治疗持续性人乳头瘤病毒感染提供中医药思路。

任青玲“经后扶正,经前祛邪”治疗人乳头瘤病毒感染经验

高危型人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)的持续感染是导致宫颈癌的首要因素之一,预防及清除HPV感染对宫颈癌的防治意义重大。任青玲教授临证治疗HPV感染,认为本病病机一方面责之于正气不足,气血阴阳失衡,正气无力抗邪或驱邪外出;另一方面湿热邪毒是致病的祸根,毒邪伤及任带二脉并损耗正气。根据发病机理,将调周法创新性地融入HPV感染的防治,采取“经后扶正,经前祛邪”治法,调节脏腑功能及阴阳平衡,增强患者的免疫力,促进病毒的清除,临床疗效显著,为中医药防治宫颈HPV感染提供了新思路。

盐酸药根碱对HPV16 E6/E7-HaCaT细胞中NF-κB及C2TA蛋白的影响

目的:探究加味二妙颗粒有效成分盐酸药根碱清除人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的分子作用机制。方法:利用生物信息学数据库筛查宫颈鳞状细胞癌组织中差异表达基因并对其进行生存分析。体外验证实验利用慢病毒载体构建稳定过表达HPV16 E6/E7蛋白的人角质形成细胞系HaCaT,用盐酸药根碱0.001、0.05、0.2、1、5μmol/L处理HaCaT-HPV16E6/E7细胞系,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测盐酸药根碱对HaCaT-HPV16 E6/E7细胞的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测盐酸药根碱对HaCaT-HPV16 E6/E7细胞中相关细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测C2TA蛋白及NF-κB通路相关蛋白的表达,探讨盐酸药根碱在人乳头瘤病毒蛋白E6、E7逃避免疫识别的作用机制。结果:通过数据库筛查得知C2TA与宫颈鳞状细胞癌密切相关,其低表达影响患者的生存情况。体外实验验证得知,与对照组比较,盐酸药根碱给药组能够显著抑制HaCaT-HPV16 E6/E7组中的细胞增殖能力(P <0.01)。盐酸药根碱能恢复HaCaT-HPV16 E6/E7细胞中C2TA的蛋白表达,并参与NF-κB通路激活及下游促炎细胞因子释放(P <0.01)。结论:加味二妙颗粒的有效成分盐酸药根碱可有效增强上皮细胞对人乳头瘤病毒的敏感性,其作用机制可能C2TA表达及NF-κB通路激活导致的细胞因子释放有关。