提高维生素C二步发酵种子质量的方法

通过在维生素C二步种液培养基中添加半胱氨酸或(和)氯化钙的方法,研究了这2种物质对二步菌种生长和产2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)的影响。结果表明,在二步种子培养基中加入适量的半胱氨酸和(或)氯化钙能够促进普通生酮基古龙酸菌生长,提高菌体密度,协调混菌比例,提高种子质量,并提高后续发酵2-酮基-L-古龙酸生成速率,缩短发酵周期。在种子培养基中同时加入0.3 g/L半胱氨酸和0.6 g/L氯化钙培养效果最显著:种液中普通生酮基古龙酸菌浓度提高30.77%,发酵周期缩短8.33%,2-酮基-L-古龙酸生成速率提高9.31%。

Vc二步发酵中的微生物生态调控

研究了Vc二步混合菌发酵中氧化葡萄糖酸杆菌与巨大芽孢杆菌的生长和相互作用 .结果表明 ,2株混合菌在发酵中可形成一种协同共生 ,促进 2 酮基 L 古龙酸产生 ;二菌协同共生的过程及条件不同 ,促进产酸能力亦不同 .环境因子影响二菌协同共生 .优化环境因子可显著改善二菌协同共生效率 ,并提高醇酸发酵转化率 .

Vc二步发酵伴生菌巨大芽孢杆菌的选育

巨大芽孢杆菌经紫外线诱变，获得2株耐低pH、抗KGA的菌株：Bn，B5。在pH6.7～7．0的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌发酵，Bn和B5的平均糖酸转化率分别提高3.5％，3．3％.在pH6．2的发酵培养基中，平均糖酸转化率提高11．4％，12．3％。在pH6．2和pH7．0含3％KGA的培养基中，2菌提前3～6h到达对数生长期，稳定期延长3～6h.经连续30代转接，特性稳定。

Vc二步发酵中伴生菌的作用机制

应用细胞培养和膜分离技术研究了Vc两步发酵中伴生菌巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegaterium)对氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacteroxydans)产酸作用机制。结果表明 :巨大芽孢杆菌培养液中分子量在 30～ 5 0kD及大于 1 0 0kD组分明显促进产酸 :其组分通过凝胶层析分离纯化 ,自动紫外检测仪检测 ( 2 80nm) ,聚丙烯酰胺凝胶电泳及考马斯亮兰G2 5 0特异染色 ,初步证实为蛋白质 ,且至少是两种以上蛋白质 。

Bacillus Megaterium在Vc二步发酵中伴生活性初步研究

在维生素C二步发酵中,Bacillusmegaterium作为伴生菌能有效促进Gluconobacteroxydans的生长和产VitaminC的前体 2 酮基 L 古龙酸(简称 2 KLG)。实验室利用低能离子对出发菌BP5 2进行诱变选育,获得一株B.megaterium突变体GB82,此突变体与G.oxydans组成的混合体系GAB,比原始混合体系 2 980产酸水平高 1 0个百分点以上。比较研究了GB82与原始B.megateriumBP5 2分泌的生物活性物质对产酸菌G.oxydans产 2 KLG的影响,据此提出此活性物质可能是某种蛋白,且此蛋白在极端条件下会部分失活的观点;并且通过RandomAmplifiedPolymorphicDNA(RAPD)分析揭示了低能离子注入造成的二者基因水平上的差异。

巨大芽孢杆菌在维生素C二步发酵中的作用

巨大芽孢杆菌培养时期不同其上清液对促进氧化葡萄糖酸杆菌生长和产酸能力不同 ,在稳定期及衰亡初期显著促进氧化葡萄糖酸杆菌生长与产酸。pH、温度可改变上清液对氧化葡萄糖酸杆菌生长与产酸的影响。上清液中含活性物质具有蛋白质的部分性质 ,对酸、碱。

二步发酵对麻疯树废弃饼粕营养价值的影响

以麻疯树废弃饼粕为培养基,先采用黄孢原毛平革菌和康宁木霉进行单菌种固态发酵,将饼粕中的粗纤维转化成还原糖,再利用产朊假丝酵母和白地霉进行二步发酵,生产菌体蛋白。控制培养基湿度为150%,添加10%(wt)麸皮,于30℃下经黄孢原毛平革菌发酵6 d后,饼粕中还原糖含量达到最大值93.46mg/g,比未发酵饼粕提高了1.93倍;再经白地霉二步发酵3 d后,粗蛋白含量和粗蛋白体外消化率分别达到33.13%(wt)和48.87%,比未发酵饼粕提高了49.23%和14.5倍。麻疯树废弃饼粕经二步发酵后,其营养价值明显提高。

维生素C二步发酵中离子注入诱变巨大芽孢杆菌的生物学效应

巨大芽孢杆菌BM279是经低能N+离子注入诱变原始菌株BM80而得到的维生素C高转化率伴生菌株。通过对离子注入前后出发菌和突变株的生理、生化等生物学特点比较,探讨了离子注入巨大芽孢杆菌对2-酮基-L-古龙酸(2KGA)高转化率的促进机理。离子注入对巨大芽孢杆菌自身的生长无明显影响,BM279呈现出与BM80基本一致的生长曲线;但BM279对混菌发酵体系中产酸菌GO29的细胞增殖有显著促进作用。BM279在混菌发酵过程中分泌较多的碱性物,有利于维持GO29生长、代谢的pH环境。BM279培养42 h,其胞外活性物质对GO29的糖酸转化活力较BM80有显著提高,且分泌时间较BM80推迟6 h。利用层析技术分别从BM80、BM279胞外液中纯化了L-山梨糖脱氢酶(L-sorbose dehydrogenase,SDH)激活蛋白(SSPBM80和SSPBM279),后者比活较前者高出50%,对GO29中的SDH酶活有更强促进作用。

黄嘌呤氧化酶产生菌的离子注入诱变及其二步发酵的研究

采用剂量 1.0× 10 1 2 ～ 1.0× 10 1 6ions cm2 的N+注入产黄嘌呤氧化酶的球形节杆菌ATCC80 10 ,研究其诱变效果。结果表明 :细菌的存活曲线呈现特殊的“马鞍形” ,菌落形态和颜色发生了变化 ,且变化与产酶量有关 ,经过筛选获得了遗传性能稳定的高酶活突变株 ,使酶活较出发菌提高了 43.0 %。改进发酵工艺 ,采用二步发酵其酶得率是一步发酵的 4.75倍。

Vc二步发酵新菌系生长代谢的调节

研究了培养基和培养条件对新菌系大、小菌生长地代谢的影响 .结果表明 :培养基的碳源、葡萄糖 /山梨糖浓度比、氮源、生长因子以及起始 pH值、通气量等 ,可以有效地调节 2 酮基 L 古龙酸的代谢产生数量 ,规范新菌系B5 2 9-Go .V .6的行为、生理状态 ,促进大小菌之间的协调 ,使其达到最佳状态 .图 2表 6参

Vc二步发酵离体实验系统的建立

以氧化葡萄糖酸杆菌和巨大芽孢杆菌混合培养物的无细胞抽提液为基本反应液 ,在试管中建立了Vc二步发酵离体实验系统 .将底物山梨糖加入反应体系后在pH 7.0 ,35℃下保温 2 4h,2 酮基 L 古龙酸生成 .加入巨大芽孢杆菌胞外活性物质对离体系统的产酸没有影响 ,一定量的L 山梨糖脱氢酶可促进产酸 .试验了pH、θ/℃、金属离子、电子受体、去污剂等对该系统产酸的影响 ,并就其作用机理进行了探讨 ,结果表明离体系统产酸的最适pH和θ/℃分别是 8和 40℃ ,Fe3+促进产酸 ,Co2 +抑制产酸 ,2 ,6 二氯酚定酚作为电子受体促进细胞膜组分产酸 ,但对细胞质组分没有影响 ,TritonX 10 0和Tween 80抑制产酸 .图 8参

维生素C二步发酵中L-山梨糖脱氢酶的性质及作用

从氧化葡萄糖酸杆菌细胞质中分离纯化出L 山梨糖脱氢酶 (SDH) ,其分子量为 46× 10 3 ,表观分子量为 190× 10 3 ;在测试范围内 ,最适pH是 7.4,温度为 5 5℃ ,最稳定的 pH是 7.0 ,温度为 30℃以下 ;FeCl3 促进酶活 ,CoCl2 抑制酶活 .该酶活力与发酵产物 2 酮基 L 古龙酸的合成呈正相关 ;伴生菌促进产酸菌生长和代谢 ,并使该酶比活力增加 ,从而提高发酵系统中该酶的总活力 .图 11表 5参

巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)突变株Bn,B5的生物学特性及在Vc二步发酵中的伴生作用

对选出的巨大芽孢杆菌突变株Bn ,B5进行了生物学特性及发酵条件的研究 ,发现它们具耐低 pH和抗高浓 2KGA特性。可促进氧化葡萄糖酸杆菌生长 ,使其延迟期缩短 ,产酸增加。适宜的通气量下 ,摇瓶糖酸转化率提高 10 %～ 14% ;当发酵 pH为 6 .2～ 6 .6时 ,转化率提高 2 0 %～ 30 %

维生素C二步发酵的新组合菌系

以掷孢酵母作为伴生菌与氧化葡萄糖酸杆菌组成新混菌体系 ,对其产酸性能和特点进行了研究。实验室摇瓶结果显示 :新菌系混菌状态不同 ,产酸不同 ,以KGA含量为 4 8,小菌 /掷孢酵母为 31∶1种液接种时 ,最有利于产酸 ,增加接种生物量可提高产酸速度 ,缩短发酵周期 ,但不影响最终产酸量。相同条件下 ,新菌系产酸能力高于现有菌系 ,酸量增加 5mg/ml～ 7mg/ml,发酵周期缩短 6h～ 8h ,酸转化率提高 3%～ 4 % ,最高产酸点pH值下降约 0 5。

VC二步发酵新组合菌系的研究

选用苏云金芽孢杆菌与氧化葡萄糖酸杆菌组成一新组合菌系 ,其摇瓶发酵转化率较原菌系提高 4 .83% ,且具有耐受高浓度 (10 % )山梨糖的特性。在 4m3 发酵罐中 ,连续 4批发酵平均转化率较对照菌系提高 8.16 % ,周期缩短 2 3.7%。新菌组合系的发酵转化率与玉米浆浓度成正相关性 ,尿素浓度x2 =1.4 5 % (g/ 10 0mL)时 ,转化率达最大。

Vc二步发酵新组合菌系B_(15-14)的筛选及其条件优化

筛选出了一组Vc二步发酵的新组合菌系（命名为B15-14），研究了环境因子对新菌系产酸的影响。结果显示：新组合菌系的最适底糖浓度为7％；温度为29～33℃，31℃为最适；适当增加通气量（20-30mL装液量，250mL三角瓶）有利于产酸；起始pH值范围为6．0—7．5；以Bt菌做伴生菌时，发酵40h就已达到终点。明显缩短了发酵时间。

维生素C“二步发酵法”第二步发酵混合菌关系的研究

维生素Ｃ“二步发酵法”第二步发酵混合菌关系的研究马成新，杨凤玫，焦鹏，薛德林，王书锦（中国科学院沈阳应用生态研究所，１１００１５）维生素Ｃ作为一种重要的医药产品，不但用于治疗多种疾病，而且已被广泛用于食品、化妆品、饲料产品中，随着维生素Ｃ应用范围的增...

维生素C二步发酵合成法的研究进展

维生素C是生命的必需营养元素,具有多种生理功能,因而改进维生素C生产工艺、提高产品产量和质量成为目前维生素C研究的热点。目前,国内维生素C最主要的生产方式是二步发酵法。本文对维生素C二步发酵法的生产过程及目前对这一生产工艺改进的主要技术措施和研究方向作一介绍。

黏质沙雷氏菌产几丁质酶二步发酵工艺的优化

采用二步发酵法,研究黏质沙雷氏菌的产几丁质酶发酵条件.在二步发酵产酶的过程中,通过单因素法优化得到二步发酵培养基中最适碳源、氮源的质量分数和菌龄,同时选取发酵时间、初始pH值、接种菌体量和装液量4个因子进行正交试验.最终得到的最优条件:胶体几丁质质量分数为0.8%,酵母粉质量分数为1.0%,菌龄为12h,发酵时间为72h,初始pH值为8.5,菌体干质量为90mg,装液量为20mL.在此条件下,酶活力可达17.020μkat.L-1.另外,在二步发酵工艺中添加0.1%纤维素,酶活力可提高至18.804μkat.L-1,比一步发酵提高1.27倍.

VC二步发酵产酸菌氧化葡萄糖酸杆菌的选育

实验通过紫外线两轮诱变的方法诱变选育氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacteroxydans),以实现提高2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)产量的目的,获得1株高产2-KLG的菌株G5。结果证明该突变菌株在pH6.5-6.7的发酵培养基中与蜡质芽孢杆菌(Bcilluscereus)混合发酵,G5的平均糖酸转化率提高了13.49%,酸量达到83.6mgmL,发酵周期缩短了2-3h。经连续10代转接发酵实验,证明其产酸稳定性较好。结论:氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacteroxydans)的突变体G5提高了糖酸转化率,缩短了发酵周期。