兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究

目的 从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法 兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果 获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论 从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。

两种兔源内毒素结合蛋白的分离、纯化及其体外生物学活性的对比研究

目的 从烧伤合并内毒素血症致多器官损害家兔血清中分离纯化内毒素结合蛋白 ,并初步对比研究它们的生物学活性。方法 兔血清蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将所获蛋白质作用于体外培养的人单核细胞 (U937) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的生物效应。结果 获得两种具有促进内毒素 (LPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合的蛋白质 ,其中一种相对分子质量为 6 0× 10 4 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,证实为兔内毒素结合蛋白 (LBP) ;另一种蛋白质相对分子质量为 4 8× 10 4 ,其N端 10个氨基酸序列为GSQGTFTSEE ,与NCBI蛋白质库中的氨基酸序列进行比较 ,未发现相同序列 ,命名为p48。结论 p48与LBP具有相似的生物学功能 ,p48的生物学活性稍弱于LBP。提示体内除LBP外 ,p48也同样起着介导LPS的毒性作用。这可能是近年国外研究中阻断LBP的活性后 ,机体毒性反应并无明显减轻的原因之一。