二氢卟吩e6声动力对乳腺癌细胞生长的作用

目的：应用二氢卟吩e6作为声敏剂,通过超声波激活,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用。方法：超声与二氢卟吩e6单独及联合处理MDA-MB-231细胞和正常人外周血单核细胞（peripheral mononuclear cell,PMNC）45 min后,采用MTT比色法检测细胞生长,荧光倒置显微镜下观察细胞形态。结果：频率1.0 MHz、超声强度1.0～2.0 W/cm^2作用60 s呈强度依赖性抑制PMNC和MDA-MB-231细胞的生长,其抑制50%PMNC和MDA-MB-231细胞生长的超声强度分别为1.23 W/cm^2和1.25 W/cm^2,差异无统计学意义（P〉0.05）;0.10～1.60 mg/mL二氢卟吩e6呈浓度依赖性地抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长,其抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长的IC50值分别为0.77 mg/mL和0.38 mg/mL,差异有统计学意义（P〈0.05）。频率1.0 MHz和超声强度0.5 W/cm^2作用60 s以及0.05～0.20 mg/mL二氢卟吩e6作用两者联合未明显抑制PMNC细胞的生长（P〈0.05）,但明显抑制MDA-MB-231细胞的生长（P〈0.05）。细胞形态学观察结果显示,与单纯超声（1.0 MHz频率、0.5 W/cm^2声强作用60 s）及单纯二氢卟吩e6（0.20 mg/mL）作用相比,超声联合二氢卟吩e6组的MDA-MB-231细胞死亡率显著增加（P〈0.05）。结论：超声联合二氢卟吩e6声动力能够特异性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,二氢卟吩e6有望成为一种新型声敏剂应用于乳腺癌的声动力治疗。

二氢卟吩e6在艾氏荷瘤小鼠体内的分布

目的研究二氢卟吩e6(Ce6)在移植瘤小鼠体内吸收、分布及代谢的动态变化,以期为声动力疗法处理不同部位肿瘤的时间点提供科学依据。方法艾氏移植瘤小鼠尾静脉注射Ce6后,利用荧光分光光度法和小动物活体成像技术测定Ce6在小鼠不同组织的富集分布变化规律。结果小鼠尾静脉给药后,Ce6迅速分布于全身各组织,在2 h内,各组织药物浓度均达到峰值,其中以肝含量最高。随后各组织中药物浓度均开始下降,以肝中清除速度最快。肿瘤组织中的Ce6含量在注射后不断上升,2 h时达到最高,随后开始下降,2～10 h代谢比较缓慢,24 h时浓度降至最低,但仍高于其他组织。结论 Ce6在艾氏移植瘤中具有肿瘤组织选择性好、潴留时间长并可迅速从体内排出等优点,有着很好的临床应用前景,同时提出了不同组织类型不同部位的肿瘤应根据各自适当的时间点进行处理。

阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长体外增敏作用

目的声动力治疗(SDT)是通过超声波激活聚集在肿瘤细胞内声敏剂治疗肿瘤的一种新方法。本文研究观测阿霉素对二氢卟吩e6为声敏剂声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用,旨在探讨阿霉素对二氢卟吩e6声动力是否具增敏作用。方法二氢卟吩e6声动力单独及联合阿霉素处理MDA-MB-231细胞,45min后四甲基偶氮唑盐(MTT)显色分光光度法检测细胞增殖。结果 1.1.0MHz频率超声强度0.5～2.0W/cm2范围作用60s呈强度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长;二氢卟吩e6和阿霉素分别在0.05及0.1μg/ml～0.4μg/ml范围内浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长。2.与超声(0.5W/cm2×1.0 MHz×60s)和二氢卟吩e6(0.05～0.2mg/ml)单独作用相比,超声和二氢卟吩e6两者联合作用抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P<0.05)。3.与二氢卟吩e6声动力(超声:0.5W/cm2×1.0MHz×60s;二氢卟吩e6:0.1mg/ml)和阿霉素(0.1～0.4g/ml)单独作用相比,声动力联合阿霉素抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P<0.05),其抑制作用与联合时序相关,声动力作用后用阿霉素比先用阿霉素后进行声动力更显著抑制乳腺癌细胞的生长(P<0.05)。结论阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具增敏作用。

二氢卟吩e6和5-氨基酮戊酸对恶性黑素瘤裸鼠移植瘤的PDT疗效观察

目的在恶性黑素瘤动物模型上观察二氢卟吩e6(Ce6)和5-氨基酮戊酸(5-ALA)的光动力学治疗(PDT)效应。方法于裸鼠的右后肢腋下注射A-375恶性黑素瘤细胞悬液0.1ml(约2×106个细胞),接种部位出现黄白色结节表明动物模型建立成功。共有27只荷瘤裸鼠接受半导体激光(波长652nm)照射,每部位光照剂量均为100J/cm2。实验裸鼠照射前分别用10%5-ALA外敷肿瘤部位2h、Ce6腹腔内给药(7.5mg/kg)1h或5-ALA外敷联合Ce6腹腔内注射进行处理。1周后处死裸鼠,观察各组织器官肿瘤转移情况,剥离肿瘤组织并称量,将各裸鼠的瘤体、肝、脾、肺、肾做组织病理学检查。结果各治疗组肿瘤重量与对照组之间均有显著性差异(P<0.01),而各治疗组之间组间比较无显著性差异(P>0.05)。组织病理学检查显示PDT后1周肿瘤部位出现干燥、结痂、组织坏死,镜下见细胞坏死、崩解、皮下血栓、细胞轮廓模糊。各治疗组中发现有肿瘤转移情况。结论动物实验表明应用Ce6和5-ALA产生的PDT效应能有效杀伤恶性黑素瘤,但不能抑制恶性黑素瘤的转移。

二氢卟吩e6光动力学疗法对人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用。方法将体外培养的人黑素瘤A-375细胞加入Ce6,浓度分别为2、4、7·5、15、30和60μmol/L,孵育12h,予波长652nm半导体激光照射,照射的功率密度为15·6mW/cm2,能量密度分别为2、5、10和20J/cm2,继续孵育12h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果(1)Ce6与细胞共同培养而不受光照的条件下对细胞的毒性较小,其浓度小于15μmol/L时各浓度组间细胞存活率差异无显著意义(P>0·05);浓度较高(>15μmol/L)对细胞的存活率影响较大(P<0·01)。(2)Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量成正相关(P<0·01)。结论Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性。

二氢卟吩e6光动力对人结肠癌SW620细胞周期和凋亡的影响

目的研究二氢卟吩e6光动力疗法(Ce6-PDT)对人结肠癌SW620细胞周期和凋亡的影响,为阐明Ce6-PDT杀伤结肠癌细胞的机制提供资料。方法激光共聚焦显微镜观察Ce6在SW620细胞中的亚定位。不同浓度Ce6-PDT(0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0及8.0μg/ml)处理SW620细胞后,荧光显微镜观察活性氧的产生,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞Caspase-3、Bcl-2、Beclin 1及LC3B蛋白表达。结果 Ce6主要定位于内质网中,其次位于线粒体中,细胞核和溶酶体中几乎无分布。Ce6-PDT可诱导活性氧的产生。随着Ce6浓度的增加,Ce6-PDT能引起细胞G0/G1期阻滞、S期细胞比例减少和细胞凋亡率增加(P<0.05)。Western blot结果显示,不同浓度Ce6-PDT处理细胞后,Caspase-3和Bcl-2蛋白表达各组差异有统计学意义(P<0.05)。LC3B蛋白表达随着Ce6浓度的增加先下调后上调(P<0.05)。结论 Ce6-PDT通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制SW620细胞增殖、引起细胞死亡,Caspase-3、Bcl-2及LC3B可能参与了其光动力杀伤细胞的过程。

二氢卟吩e6在小鼠S180肉瘤中的代谢分布

探讨二氢卟吩e6在肿瘤组织中的富集情况,以便在给药后选择合适的超声辐照时间进行处理,达到最佳杀伤肿瘤细胞的效应.在S180荷瘤小鼠尾静脉注射二氢卟吩e6后不同时间点取材,采用荧光分光光度法测定不同组织提取液中二氢卟吩e6的荧光强度,研究其在不同组织中的分布以及代谢变化.实验表明,给药后0.5h内血浆、肝、肾、皮肤、肌肉和肿瘤组织内二氢卟吩e6含量均达含量较高的水平,之后逐渐下降;肿瘤组织中二氢卟吩e6含量在注射后4h内都在一个相对较高的水平,随后开始下降.不同组织对二氢卟吩e6的代谢能力有所区别,二氢卟吩e6在S180肉瘤中有一定的滞留作用,不同肿瘤在给药后应选择适当的时间点进行声照处理.

二氢卟吩e6对小鼠艾氏移植瘤的声动力杀伤作用

目的通过研究聚焦超声结合二氢卟吩e6(chlorine e6,Ce6)对小鼠艾氏移植瘤的抑制效果,初步探讨其杀伤艾氏移植瘤的生物学机制。方法 测定不同处理对艾氏移植瘤小鼠肿瘤组织的生长抑制作用;利用酶化学方法检测处理后肿瘤组织内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-PX)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性的变化,利用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)活力。结果单纯Ce6处理没有抑瘤效应;单纯超声处理对肿瘤有一定程度的抑制作用,且具有强度依赖性;强度为4、6 W/cm2的超声结合浓度为10 mg/kg的Ce6具有显著抑瘤效应。肿瘤组织内SOD、GSH-PX、CAT 3种酶活性均有不同程度下降,肿瘤组织内MDA水平显著性升高。结论超声结合Ce6对小鼠艾氏移植瘤的杀伤作用可能与移植瘤组织中抗氧化物酶活性降低、丙二醛水平升高有关。

二氢卟吩e6光动力对人结肠癌细胞SW620生物学行为的影响

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(PDT)对人结肠癌SW620细胞增殖、迁移及克隆形成能力等生物学行为的影响。方法 Ce6光动力处理SW620细胞,采用MTT法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果 Ce6浓度和光照剂量增加时,Ce6-PDT对SW620细胞生长抑制作用逐渐增加,呈现浓度依赖、光照剂量依赖关系。划痕实验结果显示Ce6-PDT能够抑制细胞的迁移。Ce6-PDT能够减弱SW620细胞克隆形成能力。结论 Ce6-PDT能够抑制SW620细胞增殖、迁移及克隆形成能力。

二氢卟吩e6光动力学疗法对食管癌Eca—109细胞增殖迁移的影响

研究了二氢卟吩e6(Ce6)介导的光动力学疗法(PDT)对体外食管癌Eca—109细胞增殖迁移的影响.通过MTT法检测了Ce6-PDT对食管癌Eca—109细胞增殖的作用,采用划痕实验探究了Ce6-PDT对Eca—109迁移的影响.结果表明:无光照条件下,低浓度Ce6各组与对照组相比无显著性差异(P>0.05),但Ce6质量浓度为1.0μg/mL时与对照组相比有显著性差异(P<0.05);Ce6-PDT对Eca—109细胞增殖的抑制作用在一定范围内与Ce6浓度、光照剂量、作用时间和孵育时间成正相关(P<0.05);Ce6-PDT对Eca—109细胞迁移能力的影响与未经处理的对照组比较作用不显著.可见Ce6-PDT能有效抑制Eca—109细胞的增殖,但Ce6-PDT对Eca—109迁移的作用不明显.

二氢卟吩e6光动力学疗法对人舌鳞癌细胞株Tca8113的杀伤作用

目的:探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法:向体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞中加入Ce6,浓度分别为5、10、20、50和100μg/ml,孵育1.5h,予波长630 nm半导体激光照射,照射的功率密度为100mW/cm2,能量密度分别为0.5、1、2、5、10和15J/cm2,继续孵育6h,用MTS比色法测定细胞存活率。结果:(1)不受光照的条件下,较低浓度Ce6(<10μg/ml)与细胞共同培养而对细胞的毒性较小,Ce6浓度为20μg/ml时对细胞的杀伤率约为10%。(2)光照条件下,Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量正相关,呈浓度/剂量依赖性(P<0.01)。结论:Ce62PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性。

荧光光谱法研究二氢卟吩e6和锌二氢卟吩e6与牛血清白蛋白的相互作用

应用紫外光谱和荧光光谱法研究二氢卟吩e6(Ce6)和锌二氢卟吩e6(ZnCe6)分别与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。通过紫外光谱、荧光光谱、光照实验,探讨了两种物质与BSA相互作用的荧光猝灭光谱特征、猝灭机理、与BSA结合反应及光照的影响。结果表明,Ce6和ZnCe6都可与BSA发生相互作用,Ce6和ZnCe6浓度的变化会引起Ce6、ZnCe6与BSA之间能量转移的变化,Ce6的猝灭程度要比ZnCe6强,猝灭机制是由静态猝灭引起的。Ce6与BSA的结合能力强于锌二氢卟吩e6,结合位点数均接近1,结合的作用力类型主要为范德华力和氢键作用力。Ce6-BSA和ZnCe6-BSA复合物均有光漂白特性,光漂白机制均为光学修饰型引起的,这种机制有利于提高光动力治疗(PDT)效果。

替拉扎明联合二氢卟吩e6介导的光动力学疗法对人乳腺癌细胞的抑制作用

目的探讨替拉扎明(TPZ)联合二氢卟吩e6(Ce6)介导的光动力学疗法(PDT)对人乳腺癌的治疗作用。方法将人乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、空白激光组、Ce6组、TPZ组、Ce6+激光组、TPZ+激光组、Ce6+TPZ组和Ce6+TPZ+激光组。空白对照组、空白激光组细胞不给予药物处理,Ce6组、Ce6+激光组细胞均加入15 mg·L^(-1)Ce6,TPZ组、TPZ+激光组细胞均加入6 mg·L^(-1)TPZ,Ce6+TPZ组、Ce6+TPZ+激光组细胞均加入15 mg·L^(-1)Ce6和6 mg·L^(-1)TPZ;给药一定时间后,空白激光组、Ce6+激光组、TPZ+激光组、Ce6+TPZ+激光组细胞用650 nm激光以1.5 W·cm^(-2)照射2 min,空白对照组、Ce6组、TPZ组和Ce6+TPZ组细胞不做激光处理。采用二氯荧光黄双乙酸盐法检测MCF-7细胞内活性氧(ROS)水平,单细胞凝胶电泳法检测细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡情况,Western blot法检测MCF-7细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果 Ce6+TPZ+激光组MCF-7细胞存活率低于Ce6组、Ce6+激光组、TPZ组、TPZ+激光组和Ce6+TPZ组(P<0.05)。与空白对照组、空白激光组、TPZ组和TPZ+激光组比较,Ce6组和Ce6+TPZ组细胞中出现少量绿色荧光,而Ce6+激光组和Ce6+TPZ+激光组细胞中呈现大范围的绿色荧光,且荧光强度较强,表明ROS大量生成。Ce6+TPZ+激光组细胞DNA拖尾百分比显著高于Ce6+TPZ组、Ce6+激光组和TPZ+激光组(P<0.05)。Ce6+TPZ+激光组细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值高于Ce6+TPZ组、Ce6+激光组和TPZ+激光组(P<0.05)。结论 TPZ联合Ce6介导的PDT可以有效抑制人乳腺癌细胞增殖,为乏氧肿瘤的PDT联合治疗提供了新的思路。

二氢卟吩e6赖氨酸酰胺稳定性及电子光谱

采用密度泛函理论在B3LYP/6-31G*水平上对二氢卟吩e6(简称e6)及设计的6个e6赖氨酸酰胺进行几何优化,对优化构型用B3LYP/6-31G**法进行单点计算,并用含时密度泛函理论LSDA/6-31G**方法计算电子吸收光谱.结果表明,赖氨酸的ε-NH2与e6连接的酰胺更稳定,其中,15位的乙酰胺Yε最稳定.形成赖氨酸酰胺改善了e6的水溶性,有利于药物吸收.各e6赖氨酸酰胺的前线轨道集中于二氢卟吩环,由于连接酰胺基侧链的二氢卟吩环平面性有所下降,前线轨道能隙略为升高,最大电子吸收波长相对于e6蓝移16-39nm,但仍处于光动力治疗窗口"600-900nm".酰胺链的构象对吸收波长影响较大,Yε三个较稳定构象中,酰胺链垂直于二氢卟吩环的Yε1和Yε2的二氢卟吩环平面性较好,最大吸收波长比酰胺链与二氢卟吩环近似平面的Yε红移53、50nm,三者平均值较e6红移18nm.

金纳米星负载二氢卟吩e6对肺癌A549细胞的光动力效应

目的:制备负载光敏剂二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)的金纳米星(gold nanostars,GNS),研究其对肺癌A549细胞的光动力作用效果。方法:GNS经巯基聚乙二醇(SH-PEG-NH2)修饰后与光敏剂Ce6振荡过夜,制备出具有光动力治疗效应的探针GNS-PEG@Ce6,检测其表征、形态和包封率,通过激光共聚焦显微镜比较A549细胞对探针GNS-PEG@Ce6与Ce6的吞噬作用。应用MTT法检测探针GNS-PEG@Ce6对A549细胞增殖的抑制效果,通过流式细胞仪检测探针GNS-PEG@Ce6与Ce6对A549细胞凋亡的影响。结果:探针GNS-PEG@Ce6的粒径为100 nm左右,具有良好的分散性和稳定性,Ce6的包封率为50%左右。探针GNS-PEG@Ce6以胞吞方式进入细胞,主要分布于细胞质内,且较Ce6能更有效地进入细胞。探针GNS-PEG@Ce6对A549细胞的增殖抑制作用强于Ce6(P<0.05),流式细胞仪检测证明了探针对细胞有极为明显的致凋亡效果。结论:以GNS作为载体能有效地增加肺癌A549细胞对Ce6的摄取,从而进一步增强Ce6对肺癌A549细胞的杀伤效果。

超声结合二氢卟吩e6对小鼠H-22肝癌肿瘤的氧化损伤效应

实验在研究聚焦超声结合二氢卟吩e6抑制小鼠肝癌H-22移植瘤增殖的基础上,通过酶化学方法检测不同处理后小鼠肝癌H-22移植瘤组织内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性的变化,利用硫代巴比妥酸法检测丙二醛活力变化.结果显示,超声结合二氢卟吩e6能有效抑制H-22肿瘤组织的生长,同时其处理后肿瘤组织内MDA的含量显著升高,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性均有不同程度的下降,提示超声激活二氢卟吩e6诱导的氧化损伤可能在抑制肿瘤组织生长过程中起主要作用.

呋咱及二氢卟吩e6缀合物的合成及光动力抗肿瘤活性评价

为了寻求光动力治疗效果更好的光敏剂,以苯丙烯醇为原料,合成3-羟甲基-4-苯基-1,2,5-二唑-2-氧化物,再与二氢卟吩e6通过酯化反应制得含有呋咱的二氢卟吩e6缀合物(Ⅳ)。通过HRMS、^(1)HNMR、^(13)CNMR、IR对目标化合物进行了结构表征。活性评价结果表明,相比于二氢卟吩e6,呋咱基团的引入使呋咱的二氢卟吩e6缀合物摄取率提高33倍,细胞内NO水平提高2.3倍,细胞内ROS数量增强1.3倍,细胞内GSH水平减少了26%,协同提高光动力抑制肿瘤细胞增殖活性约20倍。在化合物Ⅳ浓度为33μmol/L时,其对Hela细胞的增殖抑制率为96%。

二氢卟吩e6介导的光动力疗法对人胆管癌细胞活性和白细胞介素-6表达的影响

背景:胆管癌(CCA)预后较差,近来研究表明光动力疗法(PDT)在CCA治疗方面具有良好的应用前景。目的:研究二氢卟吩e6(Ce6)介导的PDT对人CCA细胞活性和白细胞介素(IL)-6表达的影响。方法:以不同强度光照和不同浓度Ce6干预人CCA细胞株QBC939,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测活性氧簇(ROS)含量,ELISA法检测细胞死亡,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,ELISA法检测IL-6表达水平。结果:在相同Ce6浓度下,不同光照强度对QBC939细胞活性的影响无明显差异(P>0.05)。在相同光照强度下,QBC939细胞活性随Ce6浓度增加而逐渐降低(P<0.05),ROS含量、细胞死亡、细胞凋亡率、IL-6表达水平随Ce6浓度增加而显著升高(P<0.05)。结论:Ce6介导的PDT对人CCA细胞有显著杀伤作用,该作用与Ce6浓度具有量效关系。IL-6参与了PDT抗CCA的过程。

多肽胶束负载二氢卟吩e6促进小鼠骨髓源性树突状细胞抗原呈递功能的研究

目的:制备基于多肽胶束(PM)负载光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)的PM@Ce6抗原载体,研究其对小鼠骨髓源性树所得的PEG-PLL-PLLeu共聚物溶解于超纯水,与光敏剂Ce6振荡过夜,自组装成具有光动力效应的PM@Ce6,检测其表征、形态和包封率。应用激光共聚焦及流式检测PM@Ce6对DC产生活性氧(ROS)的作用,并通过流式细胞仪检测PM@Ce6与Ce6对PM@Ce6显著促进DC产生ROS(P<0.05),流式细胞仪检测进一步证明了PM@Ce6明显增强DC中蛋白酶体活性(P<0.01)和MHCⅠ抗原呈递效果(P<0.01)。结论:以PM为载体负载Ce6能有效促进ROS产生,增强蛋白酶体活性,从而进一步增强DC抗原呈递效果。

二氢卟吩e6衍生物的合成

由蚕沙叶绿素粗品,经碱降解反应制取二氢卟吩e6,之后将二氢卟吩e6与乙二醇反应二酯化制得最终产物。