二氢卟吩e_6酰胺衍生物的光敏效应及肿瘤光生物活性

目的 寻找新型的光动力治疗肿瘤新药。方法 以蚕沙叶绿素粗提物为原料合成 4种二氢卟吩e6酰胺衍生物 (Ⅰ1～Ⅰ4 ) ,并测定其光敏效应和肿瘤光生物活性。结果 Ⅰ1～Ⅰ4 表现出较强的光敏效应 ,且强于参比药物血卟啉衍生物(hematoporphyrinderivative ,HPD) ;Ⅰ1～Ⅰ4 对小鼠S180 肉瘤有较好的光动力损伤作用 ,其中Ⅰ3 的光动力损伤作用要好于HPD。结论 提示二氢卟吩e6酰胺衍生物是一类具有发展前途的光动力抗肿瘤新药。

二氢卟吩e_6-6-酰胺衍生物的合成

首次报道了以蚕沙叶绿素初提物为基础原料,经酸降解得到含焦脱镁叶绿酸a和脱镁叶绿酸a的混合物,不经分离直接与胺类反应使脱镁叶绿酸a的戊酮环(V)裂开,合成得11种二氢卟吩e_6-6-酰胺衍生物。提供了一种合成二氢卟吩酰胺的新方法。

蚕沙叶绿素的降解及二氢卟吩P6酰胺衍生物的合成

以蚕沙粗品叶绿素为原料，经降解、氧化反应制得紫红素－１８（３），并以３ 为关键中间体合成了１０ 个二氢卟吩Ｐ６ 酰胺衍生物。

蚕沙叶绿素的降解及二氢卟吩e_6醚衍生物的合成

研究了蚕沙叶绿素降解为二氢卟吩ｅ６的化学过程，并以二氢卟吩ｅ６单甲酯为原料合成了九种二氢卟吩ｅ６醚衍生物，用ＵＶ／Ｖｉｓ，ＩＲ，Ｈ ＮＭＲ及ＦＡＢ－ＭＳ谱分别确定了它们的结构。

二氢卟吩e_6衍生物的简便制备

蚕沙叶绿素粗提物经酸降解得到脱镁叶绿酸 a粗品 ,不经分离 ,直接与亲核试剂如甲醇、乙胺发生开环反应 ,一步得到二氢卟吩 e6 衍生物。

二氢卟吩P6醚类衍生物的合成

以蚕沙糊状叶绿素经酸碱降解制得的二氢卟吩P6三甲酯(2)为关键中间体,设计合成了9个二氢卟吩P6醚类衍生物3a～3e和4b～4e,用UV、IR、1H NMR、FAB-MS和元素分析确证了它们的结构.

二氢卟吩e6衍生物的合成

由蚕沙叶绿素粗品,经碱降解反应制取二氢卟吩e6,之后将二氢卟吩e6与乙二醇反应二酯化制得最终产物。

二氢卟吩e6光动力疗法对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学功能的影响

目的研究二氢卟吩e6光动力疗法(Ce6-PDT)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学功能的影响,为阐明Ce6-PDT治疗甲状腺乳头状癌提供理论依据。方法激光共聚焦显微镜观察Ce6在TPC-1细胞中的定位。不同浓度Ce6-PDT处理TPC-1细胞后,CCK8检测法检测对细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对细胞周期的变化。结果Ce6主要定位在TPC-1细胞的胞质内。Ce6-PDT可抑制TPC-1细胞的增殖活性,且呈浓度依赖性。Ce6-PDT能引起TPC-1细胞出现G0/G1期阻滞。结论Ce6-PDT可通过诱导细胞周期阻滞抑制TPC-1细胞增殖。

二氢卟吩e_6的合成及其光敏化力和肿瘤光生物活性

由蚕沙叶绿素粗品 ,经酸碱降解反应制得二氢卟吩 e6 (1) ;并测定了 1在 D2 O中对 NADPH光氧化作用的敏化效应和对小鼠 S1 80 肉瘤的光动力损伤作用。初步试验结果表明 :1在非细胞体系内的光敏化力和对小鼠 S1 80 肉瘤的光动力疗效均优于参比药物血卟啉衍生物 (HPD)

二氢卟吩e6光动力对人结肠癌细胞SW620生物学行为的影响

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(PDT)对人结肠癌SW620细胞增殖、迁移及克隆形成能力等生物学行为的影响。方法 Ce6光动力处理SW620细胞,采用MTT法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果 Ce6浓度和光照剂量增加时,Ce6-PDT对SW620细胞生长抑制作用逐渐增加,呈现浓度依赖、光照剂量依赖关系。划痕实验结果显示Ce6-PDT能够抑制细胞的迁移。Ce6-PDT能够减弱SW620细胞克隆形成能力。结论 Ce6-PDT能够抑制SW620细胞增殖、迁移及克隆形成能力。

二氢卟吩e_6-6-酰胺化合物在重水中对NADPH氧化作用的光动力敏化效应

目的 测定二氢卟吩ｅ６６酰胺衍生物（ＣＥＡＤ） 的光动力敏化作用，为发展新的光动力药物提供依据。方法 用紫外分光光度法测定１２ 种二氢卟吩ｅ６６酰胺衍生物（ＣＥＡＤ） 在重水中对ＮＡＤＰＨ 氧化作用的光动力敏化效应，并测定了不同的有机介质（如甲醇、乙醇、四氢呋喃、二甲亚砜） 对光动力敏化效应的影响。结果 ＣＥＡＤ在重水中对ＮＡＤＰＨ氧化作用的光动力敏化效应明显高于血卟啉衍生物（Ｐ＜ ０－０５） ，且不同有机介质对光动力敏化效应的影响是不同的，其中二甲亚砜（ＤＭＳＯ） 对光动力敏化效应的影响最大（Ｐ＜０－０５）。结论 ＣＥＡＤ有可能是一类具有良好开发潜力的光动力治癌新药。

二氢卟吩e6赖氨酸酰胺稳定性及电子光谱

采用密度泛函理论在B3LYP/6-31G*水平上对二氢卟吩e6(简称e6)及设计的6个e6赖氨酸酰胺进行几何优化,对优化构型用B3LYP/6-31G**法进行单点计算,并用含时密度泛函理论LSDA/6-31G**方法计算电子吸收光谱.结果表明,赖氨酸的ε-NH2与e6连接的酰胺更稳定,其中,15位的乙酰胺Yε最稳定.形成赖氨酸酰胺改善了e6的水溶性,有利于药物吸收.各e6赖氨酸酰胺的前线轨道集中于二氢卟吩环,由于连接酰胺基侧链的二氢卟吩环平面性有所下降,前线轨道能隙略为升高,最大电子吸收波长相对于e6蓝移16-39nm,但仍处于光动力治疗窗口"600-900nm".酰胺链的构象对吸收波长影响较大,Yε三个较稳定构象中,酰胺链垂直于二氢卟吩环的Yε1和Yε2的二氢卟吩环平面性较好,最大吸收波长比酰胺链与二氢卟吩环近似平面的Yε红移53、50nm,三者平均值较e6红移18nm.

二氢卟吩e_6锌的制备及对急性肝损伤的保护作用和实验性抗溃疡活性

蚕沙叶绿素粗品 ,经酸、碱降解及醋酸锌络合反应制得二氢卟吩 e6 锌 (1) ,并测定 1对吲哚美辛 (2 )诱发的大鼠胃溃疡的保护作用及对硫代乙酰胺 (3)、四氯化碳 (4 )所致小鼠急性肝损伤的防治作用。初步实验结果表明 ,ip110 0 mg/ kg,能显著降低 2诱发的大鼠胃溃疡指数 (P<0 .0 0 1)和溃疡个数 (P<0 .0 0 1) ;ip110 0 mg/ kg× 3,能显著降低小鼠 3(P<0 .0 0 5 )、4(P<0 .0 1)急性肝损伤后升高的 SGPT活性 ,提示

二氢卟吩e6声动力对乳腺癌细胞生长的作用

目的：应用二氢卟吩e6作为声敏剂,通过超声波激活,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用。方法：超声与二氢卟吩e6单独及联合处理MDA-MB-231细胞和正常人外周血单核细胞（peripheral mononuclear cell,PMNC）45 min后,采用MTT比色法检测细胞生长,荧光倒置显微镜下观察细胞形态。结果：频率1.0 MHz、超声强度1.0～2.0 W/cm^2作用60 s呈强度依赖性抑制PMNC和MDA-MB-231细胞的生长,其抑制50%PMNC和MDA-MB-231细胞生长的超声强度分别为1.23 W/cm^2和1.25 W/cm^2,差异无统计学意义（P〉0.05）;0.10～1.60 mg/mL二氢卟吩e6呈浓度依赖性地抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长,其抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长的IC50值分别为0.77 mg/mL和0.38 mg/mL,差异有统计学意义（P〈0.05）。频率1.0 MHz和超声强度0.5 W/cm^2作用60 s以及0.05～0.20 mg/mL二氢卟吩e6作用两者联合未明显抑制PMNC细胞的生长（P〈0.05）,但明显抑制MDA-MB-231细胞的生长（P〈0.05）。细胞形态学观察结果显示,与单纯超声（1.0 MHz频率、0.5 W/cm^2声强作用60 s）及单纯二氢卟吩e6（0.20 mg/mL）作用相比,超声联合二氢卟吩e6组的MDA-MB-231细胞死亡率显著增加（P〈0.05）。结论：超声联合二氢卟吩e6声动力能够特异性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,二氢卟吩e6有望成为一种新型声敏剂应用于乳腺癌的声动力治疗。

二氢卟吩e6在艾氏荷瘤小鼠体内的分布

目的研究二氢卟吩e6(Ce6)在移植瘤小鼠体内吸收、分布及代谢的动态变化,以期为声动力疗法处理不同部位肿瘤的时间点提供科学依据。方法艾氏移植瘤小鼠尾静脉注射Ce6后,利用荧光分光光度法和小动物活体成像技术测定Ce6在小鼠不同组织的富集分布变化规律。结果小鼠尾静脉给药后,Ce6迅速分布于全身各组织,在2 h内,各组织药物浓度均达到峰值,其中以肝含量最高。随后各组织中药物浓度均开始下降,以肝中清除速度最快。肿瘤组织中的Ce6含量在注射后不断上升,2 h时达到最高,随后开始下降,2～10 h代谢比较缓慢,24 h时浓度降至最低,但仍高于其他组织。结论 Ce6在艾氏移植瘤中具有肿瘤组织选择性好、潴留时间长并可迅速从体内排出等优点,有着很好的临床应用前景,同时提出了不同组织类型不同部位的肿瘤应根据各自适当的时间点进行处理。

阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长体外增敏作用

目的声动力治疗(SDT)是通过超声波激活聚集在肿瘤细胞内声敏剂治疗肿瘤的一种新方法。本文研究观测阿霉素对二氢卟吩e6为声敏剂声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用,旨在探讨阿霉素对二氢卟吩e6声动力是否具增敏作用。方法二氢卟吩e6声动力单独及联合阿霉素处理MDA-MB-231细胞,45min后四甲基偶氮唑盐(MTT)显色分光光度法检测细胞增殖。结果 1.1.0MHz频率超声强度0.5～2.0W/cm2范围作用60s呈强度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长;二氢卟吩e6和阿霉素分别在0.05及0.1μg/ml～0.4μg/ml范围内浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞生长。2.与超声(0.5W/cm2×1.0 MHz×60s)和二氢卟吩e6(0.05～0.2mg/ml)单独作用相比,超声和二氢卟吩e6两者联合作用抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P<0.05)。3.与二氢卟吩e6声动力(超声:0.5W/cm2×1.0MHz×60s;二氢卟吩e6:0.1mg/ml)和阿霉素(0.1～0.4g/ml)单独作用相比,声动力联合阿霉素抑制MDA-MB-231细胞生长作用显著增强(P<0.05),其抑制作用与联合时序相关,声动力作用后用阿霉素比先用阿霉素后进行声动力更显著抑制乳腺癌细胞的生长(P<0.05)。结论阿霉素对二氢卟吩e6声动力抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具增敏作用。

二氢卟吩e6和5-氨基酮戊酸对恶性黑素瘤裸鼠移植瘤的PDT疗效观察

目的在恶性黑素瘤动物模型上观察二氢卟吩e6(Ce6)和5-氨基酮戊酸(5-ALA)的光动力学治疗(PDT)效应。方法于裸鼠的右后肢腋下注射A-375恶性黑素瘤细胞悬液0.1ml(约2×106个细胞),接种部位出现黄白色结节表明动物模型建立成功。共有27只荷瘤裸鼠接受半导体激光(波长652nm)照射,每部位光照剂量均为100J/cm2。实验裸鼠照射前分别用10%5-ALA外敷肿瘤部位2h、Ce6腹腔内给药(7.5mg/kg)1h或5-ALA外敷联合Ce6腹腔内注射进行处理。1周后处死裸鼠,观察各组织器官肿瘤转移情况,剥离肿瘤组织并称量,将各裸鼠的瘤体、肝、脾、肺、肾做组织病理学检查。结果各治疗组肿瘤重量与对照组之间均有显著性差异(P<0.01),而各治疗组之间组间比较无显著性差异(P>0.05)。组织病理学检查显示PDT后1周肿瘤部位出现干燥、结痂、组织坏死,镜下见细胞坏死、崩解、皮下血栓、细胞轮廓模糊。各治疗组中发现有肿瘤转移情况。结论动物实验表明应用Ce6和5-ALA产生的PDT效应能有效杀伤恶性黑素瘤,但不能抑制恶性黑素瘤的转移。

二氢卟吩e6光动力学疗法对人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用。方法将体外培养的人黑素瘤A-375细胞加入Ce6,浓度分别为2、4、7·5、15、30和60μmol/L,孵育12h,予波长652nm半导体激光照射,照射的功率密度为15·6mW/cm2,能量密度分别为2、5、10和20J/cm2,继续孵育12h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率。结果(1)Ce6与细胞共同培养而不受光照的条件下对细胞的毒性较小,其浓度小于15μmol/L时各浓度组间细胞存活率差异无显著意义(P>0·05);浓度较高(>15μmol/L)对细胞的存活率影响较大(P<0·01)。(2)Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量成正相关(P<0·01)。结论Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性。

二氢卟吩e6光动力对人结肠癌SW620细胞周期和凋亡的影响

目的研究二氢卟吩e6光动力疗法(Ce6-PDT)对人结肠癌SW620细胞周期和凋亡的影响,为阐明Ce6-PDT杀伤结肠癌细胞的机制提供资料。方法激光共聚焦显微镜观察Ce6在SW620细胞中的亚定位。不同浓度Ce6-PDT(0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0及8.0μg/ml)处理SW620细胞后,荧光显微镜观察活性氧的产生,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞Caspase-3、Bcl-2、Beclin 1及LC3B蛋白表达。结果 Ce6主要定位于内质网中,其次位于线粒体中,细胞核和溶酶体中几乎无分布。Ce6-PDT可诱导活性氧的产生。随着Ce6浓度的增加,Ce6-PDT能引起细胞G0/G1期阻滞、S期细胞比例减少和细胞凋亡率增加(P<0.05)。Western blot结果显示,不同浓度Ce6-PDT处理细胞后,Caspase-3和Bcl-2蛋白表达各组差异有统计学意义(P<0.05)。LC3B蛋白表达随着Ce6浓度的增加先下调后上调(P<0.05)。结论 Ce6-PDT通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制SW620细胞增殖、引起细胞死亡,Caspase-3、Bcl-2及LC3B可能参与了其光动力杀伤细胞的过程。