二氢槲皮素和β-烟酰胺单核苷酸顺势和逆势给药对健康大鼠生长和生理的影响

目的:通过研究二氢槲皮素和β-烟酰胺单核苷酸顺势和逆势给药对健康大鼠生长和生理的影响,进一步验证中医阴阳分药分时服用方剂学理论。方法:48只无特定病原体级SD大鼠,随机分为顺势饲喂组、逆势饲喂组、混合饲喂组、对照组各12只,雌雄各半,顺势饲喂组早晨给予二氢槲皮素溶液,下午给予β-烟酰胺单核苷酸溶液,逆势饲喂组给药顺序与顺势饲喂组相反,混合饲喂组给予二氢槲皮素和β-烟酰胺单核苷酸混合溶液灌胃,分早晚两次给药,对照组早晚给予灌胃等量超纯水,四组均每周给药5 d,共给药6周。分别于饲喂第1天、第10天、第20天、第30天、第45天时观察各组大鼠的皮肤毛发、行为状态、兴奋程度、激怒反应、睡眠状态、大便状态。分别于饲喂后第2周、第4周、第6周的周一、周三、周五测定大鼠采食量和体重,饲喂第45天检测大鼠的血液常规和血生化指标,计算脏器系数。结果:实验期间,各组大鼠的皮肤毛发、行为状态、兴奋程度、激怒反应、睡眠状态、大便状态均未见明显改变。四组雌、雄性大鼠在各个阶段的日均采食量和体重比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药6周后,四组大鼠肝、脾、肺、肾、胃脏器系数、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、嗜酸性粒细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血清总蛋白、总胆红素、碱性磷酸酶、三酰甘油、血清总胆固醇、尿素、空腹血糖、肌酐、钾离子比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。雄性大鼠顺势饲喂组和逆势饲喂组心脏脏器系数低于对照组(P<0.05);雌性大鼠顺势饲喂组谷丙转氨酶高于对照组(P<0.05);雄性大鼠混合饲喂组谷草转氨酶高于对照组(P<0.05);雌性大鼠混合饲喂组钠离子低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:顺势给药和逆势给药可引起大鼠心脏脏器系数降低,混合给药可引起大鼠谷草转氨酶增高,钠离子降低。

二氢槲皮素与环糊精相互作用及其包合物的制备

二氢槲皮素具有抗氧化、抗炎等多种生物活性,其低水溶性极大限制了其在食品和药品等领域中的应用。为提高二氢槲皮素的水溶性,本实验采用相溶解度法比较了α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精对二氢槲皮素的增溶效果。结果表明,相较于α-环糊精,β-环糊精和γ-环糊精的加入均可提高二氢槲皮素的水溶性,β-环糊精和γ-环糊精对二氢槲皮素的包合是一个以焓变为主要驱动力的自发的放热反应。在单因素实验的基础上,正交优化实验获取了制备二氢槲皮素/β-环糊精包合物的最佳工艺条件:温度30℃,包合物料比1∶1,包合时间4 h,乙醇体积分数60%。研究结果可为提高二氢槲皮素的水溶性提供理论依据,并为其在食品和药品领域中的应用提供数据支撑。

二氢槲皮素对大肠杆菌的抑菌作用机理

食源性病菌给食品安全带来重大的挑战。二氢槲皮素(dihydroquercetin,DHQ)可作为食品防腐剂,但目前鲜见其抑菌机理的相关报道。本实验发现DHQ对6种食源性致病菌,即金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌和热带假丝酵母菌均有显著抑制作用(P<0.05),且对大肠杆菌的抑制活性最佳,故以大肠杆菌为指示菌,研究DHQ的抑菌机理。利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察,发现在DHQ作用下的大肠杆菌严重变形,表现出黏连、折叠、质壁分离、出现空泡结构等现象。荧光探针被用来测定膜内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,结果显示DHQ能显著增加细胞内的ROS水平(P<0.05)。利用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞膜的通透性和完整性,发现随着DHQ质量浓度增加,细胞膜通透性显著增加(P<0.05),细胞膜的完整性遭到破坏。使用罗丹明123检测细胞膜电位,结果表明DHQ会引起大肠杆菌细胞膜去极化,造成膜电位显著降低(P<0.05)。细胞膜内Ca^(2+)检测结果表明,DHQ会导致胞内Ca^(2+)外漏,影响菌体的正常生长代谢和功能活动。采用碘化丙啶/核糖核酸酶(propidium iodide/ribonuclease,PI/RNase)染色缓冲液检测细胞周期,结果表明DHQ干扰了大肠杆菌正常的细胞周期。研究结果揭示了DHQ主要作用于细胞膜,影响正常传代,从而达到抑制大肠杆菌的效果。

超高压辅助胶束法提取落叶松中二氢槲皮素的工艺优化

为简化二氢槲皮素提取工艺,降低能耗与成本,提高提取效率,促进二氢槲皮素的综合应用,本研究采用黑龙江省的兴安落叶松为原料,运用超高压辅助胶束提取技术提取落叶松中二氢槲皮素,测定落叶松树根、树干等不同部位的二氢槲皮素总含量。以此总含量为基础,对提取胶束进行筛选,采用响应面试验对提取工艺进行优化,考察了料液比、提取压力、提取次数及胶束浓度4种不同因素对二氢槲皮素提取率的影响,并与微波提取、超声提取、回流提取等不同提取工艺进行能耗与CO_(2)排放比较。结果表明,最终确定提取胶束为茶皂素,最佳提取工艺条件为:茶皂素浓度8%,料液比1:11.5,提取压力157 MPa,提取次数3次,保压时间5min,在此最佳条件下重复进行3次实验,二氢槲皮素实际提取率可达84.35%±1.20%,与预测值84.98%基本一致。与其他提取方法相比超高压辅助胶束提取率最高,单位原料的能耗和CO_(2)排放量均为最低,分别为1.71×10^(-4)kW·h·g^(-1),1.34×10^(-4)kg/g。综上,利用超高压辅助胶束绿色溶剂提取技术提取落叶松中二氢槲皮素,绿色环保、操作简单、工艺合理可靠,并且重复性高,可广泛应用。

二氢槲皮素对心力衰竭大鼠心功能的保护作用及其作用机制

目的:观察二氢槲皮素(DHQ)对心力衰竭(HF)大鼠心功能的影响,并分析其相关作用机制。方法:将45只以腹腔注射盐酸阿霉素法造模的HF大鼠随机分为模型组(HF组)、DHQ低剂量组(L-DHQ组)、DHQ高剂量组(H-DHQ组)、卡托普利组(Captopril组),每组15只。另取15只健康大鼠设为对照组(NC组)。以彩色超声仪检测大鼠心功能指标;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中脑钠肽(BNP)、炎性因子、氧化应激指标水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠心肌组织相关蛋白表达。结果:与NC组比较,HF组大鼠心肌组织存在明显的病理损伤,心功能指标左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、每搏心输出量(SV)均降低,BNP水平升高,血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、丙二醛(MDA)水平均升高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平均降低,心肌细胞凋亡率、心肌组织中B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白表达量以及磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)/酪氨酸激酶2(JAK2)和磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)比值均升高,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与HF组比较,L-DHQ组、H-DHQ组和Captopril组大鼠心肌组织病理损伤明显减轻,LVEF、LVFS、SV均升高,BNP水平降低,血清IL-6、TNF-α、CRP、MDA水平均降低,SOD、GSH-Px水平均升高,心肌细胞凋亡率、心肌组织中Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1蛋白表达量以及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3比值均降低,Bcl-2蛋白表达量升高,且H-DHQ组和Captopril组改善程度均明显优于L-DHQ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DHQ可有效减轻HF大鼠炎症反应和氧化应激反应,抑制心肌细胞凋亡,保护HF大鼠心功能,其作用机制可能与调控HMGB1表达和JAK2/STAT3信号通路相关。

二氢槲皮素对大鼠肾缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨二氢槲皮素对肾缺血-再灌注损伤模型大鼠的保护作用。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组(control组)、肾缺血-再灌注损伤模型组(model组)和二氢槲皮素组(DHQ组),每组6只。微板法和脲酶法检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,可见分光光度法和TBA法检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,并观察各组大鼠肾脏病理形态。结果与control组相比,model组大鼠血清BUN和Scr水平明显升高(t=6.06,P<0.001;t=11.16,P<0.001),MDA水平明显升高(t=5.985,P<0.001),SOD水平明显降低(t=8.663,P<0.001)。与model相比,DHQ组血清Scr水平下降(t=6.612,P<0.001),BUN水平明显下降(t=6.903,P<0.001),MDA水平明显下降(t=5.11,P<0.001),SOD水平明显上升(t=10.66,P<0.001)。model组大鼠肾小管水肿、空泡样病变,肾小球系膜基质扩张,炎性细胞浸润,而DHQ组大鼠肾小管部分仍能保留绒毛结构,水肿面积减少,未出现空泡样病变,肾小球系膜基质扩张减轻,炎性细胞浸润减轻。结论二氢槲皮素可以降低大鼠肾缺血-再灌注损伤导致的血清肌酐和尿素氮浓度升高,改善损伤肾小管的形态和功能,对肾缺血-再灌注损伤有一定保护作用,其机制与其抗损伤、抗氧化有关。

二氢槲皮素预处理对心肌缺血/再灌注损伤抗氧化作用的影响

目的探讨二氢槲皮素(dihydroquercetin,DDQ)对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤抗氧化作用的影响。方法SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、二氢槲皮素低剂量组(5 mg·L^(-1))、二氢槲皮素高剂量组(10 mg·L^(-1))4组。使用Langendorff逆行恒压灌流方式建立离体大鼠心脏I/R模型。观察I/R期间DDQ对左心室舒张压、左心室收缩压、室内压最大上升速率、室内压最大下降速率和心率的影响。乳酸脱氢酶(LDH)水平和血清肌酸激酶(CK)的含量均采用酶联免疫吸附法进行分析,TTC染色法评价心肌梗死程度,测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察心肌组织学结构的病变。结果与模型组比,DDQ预处理组能够明显改善血流动力学的各项指标;DDQ预处理组可使心肌组织中的SOD和GSH/GSSG的含量明显增加;CK,LDH和MDA的含量明显降低,同时降低心肌梗死程度,减轻心肌组织学病变。结论 DDQ对离体大鼠缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用,此保护作用可能与DDQ提高氧自由基清除能力,减少氧自由基产生,降低脂质过氧化损伤的作用机制有关。

超声-微波交替法提取落叶松二氢槲皮素

以二氢槲皮素的得率为指标,采用超声-微波交替法从落叶松中提取二氢槲皮素。以体积分数60%乙醇作为提取溶剂,料液比1∶12,浸润3h,强档功率提取1次,微波提取10min,超声提取40min,超声-微波交替提取的条件为超声提取40min后再微波提取10min。二氢槲皮素单独超声和微波提取时得率分别为0.034%和0.074%,超声-微波交替提取时得率可达0.12%,明显优于单独超声或微波提取。通过扫描电子显微镜观察超声提取、微波提取和超声-微波交替提取所得的物料,超声-微波交替提取的抽提效果最为明显。

二氢槲皮素与二氢杨梅素的抗肿瘤活性对比

目的:研究二氢槲皮素和二氢杨梅素对H_(22)荷瘤小鼠抑瘤作用。方法:建立小鼠H_(22)移植性肿瘤模型(除空白外)。造模24 h后分成6组:模型组,阳性对照组(环磷酰胺25mg/kg),二氢槲皮素和二氢杨梅素高、低剂量组(30、10mg/kg),除阳性对照组腹腔给药,其余各组均灌胃给药,测定其对H_(22)荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指数、生化指标和细胞因子含量的影响,并通过HE染色,观察瘤组织内坏死程度。结果:二氢槲皮素和二氢杨梅素高、低剂量组(30mg/kg、10mg/kg)均对肿瘤具有一定抑制作用,且均可提高H_(22)荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数,其中二氢槲皮素高剂量组(30mg/kg)抑瘤效果最佳,其抑瘤率为58.8%。二氢槲皮素和二氢杨梅素高、低剂量组均可升高H_(22)荷瘤小鼠细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,升高超氧化物歧化酶(SOD)的水平,降低丙二醛(MDA)水平。此外,二氢槲皮素和二氢杨梅素高、低剂量组对H_(22)荷瘤小鼠肝肾功能没有毒理作用。结论:二氢槲皮素和二氢杨梅素高、低剂量组均对肿瘤具有一定抑制作用,其中二氢槲皮素组的作用较明显,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与增强抗氧化能力、提高机体免疫功能和升高细胞因子水平有关。

响应面法优化酶辅助闪式提取二氢槲皮素工艺

目的:利用响应面法对纤维素酶辅助闪式提取二氢槲皮素的工艺条件进行优化。方法:以二氢槲皮素的提取率为指标,在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken试验设计,对影响提取率的条件(乙醇体积分数、加酶量和液料比)进行优化。结果:最佳提取条件为乙醇体积分数60.93%、加酶量3.48 mg/g、液料比103.64∶1(mL/g)、提取时间120 s。结论:闪式提取操作简便、节能、省时,可应用于二氢槲皮素大规模生产。

二氢槲皮素对脑缺血损伤模型大鼠炎症因子、氧化应激水平以及脑组织能量代谢影响

目的 :研究二氢槲皮素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用及机制。方法 :采用传统的双侧结扎法,建立大鼠急性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(20 mg/kg),二氢槲皮素高、中、低剂量组(60、30、15 mg/kg),每组10只。日给药1次,连续14 d,第15天复制脑缺血损伤大鼠模型,于手术后24 h取材。采用HE染色观察二氢槲皮素对大鼠脑组织结构的影响,ELISA法检测各组大鼠血清中IL-6、TNF-α和ICAM的含量。制备脑组织匀浆,采用比色法检测脑组织匀浆中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na^+-K^+-ATP酶以及Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活性。结果 :与模型组比较,二氢槲皮素可明显改善脑缺血损伤模型大鼠脑组织的病理情况,能够降低血清中IL-6、TNF-α和ICAM的水平。降低脑组织中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px、LDH、Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活性。结论 :二氢槲皮素可以减轻双侧结扎法造成的大鼠急性脑损伤,其作用机制可能与通过抑制炎症反应、抗氧化以及改善脑组织能量代谢相关。

兴安落叶松中二氢槲皮素提取方法的比较

以二氢槲皮素的得率为指标,分别采用超声、微波和加热提取法(冷浸、温浸和回流等)从落叶松中提取二氢槲皮素。先后对提取溶剂的体积分数、料液比和提取次数等共性因素及提取时间和能量强度等核心因素进行考察,3类方法中微波提取得率最高,可达0.116%,回流提取的累积得率可达微波法的95.9%,而超声提取的累积得率仅能达到微波法累积得率的55.2%。规模化生产可采用体积分数60%乙醇作为提取溶剂,料液比1∶12,微波700 W提取2次,每次10 min或80℃回流提取3次,每次240 min。扫描电子显微镜观察结果表明:尽管超声对植物细胞组织破壁或变形的机械效应较强,但二氢槲皮素的得率仍较微波和回流提取法低,二氢槲皮素的溶出主要是导致热效应的贡献。

二氢槲皮素固体分散体片的制备及体外溶出度的研究

目的应用固体分散技术,提高二氢槲皮素及其片剂的体外溶出度。方法以PEG-4000、PEG-6000和PVP-K30为载体,采用溶剂-熔融法制备了二氢槲皮素固体分散体,考察不同载体对固体分散体溶出度的影响。同时制得二氢槲皮素固体分散体片,并着重考察了片剂的体外溶出度。结果以亲水性PVP-K30为载体制备的固体分散体能够显著的提高二氢槲皮素的体外溶出度,制成固体分散片剂后,二氢槲皮素固体分散体片的溶出度可达86.8%。结论以PVP-K30为载体的固体分散体片可提高二氢槲皮素的溶解度,制备二氢槲皮素固体分散片达到设计要求,且制法简便可行。

HPLC法测定松针中二氢槲皮素含量

目的:建立松针中二氢槲皮素测定方法。方法:采用HPLC法测定松针中二氢槲皮素的含量,采用Kromasil C_(18)色谱柱(250×4.6mm 5μm);以甲醇-水(50:50)为流动相,流速:1.0ml·min^(-1);柱温:30℃;检测波长320nm。结果:线性范围:0.25～1.25μg,r=0.999 8。平均回收率为100.4%,RSD1.3%(n=6)。结论:方法可用于测定松针中二氢槲皮素。

二氢槲皮素对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的:研究二氢槲皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法:建立H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤模型;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法考察预孵育二氢槲皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤细胞存活率的影响;利用试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH),细胞内丙二醛(MDA),过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量的变化。结果:不同浓度的二氢槲皮素预处理4、12、24h均能够提高细胞的存活率,且呈剂量依赖性,其中预处理12h的保护作用最为明显。与正常对照组相比,模型组的存活率下降,LDH的漏出量增大,细胞内MDA的含量增大,CAT、SOD、GSH-Px的活力明显降低。用二氢槲皮素预处理12h能显著地减少LDH的漏出量,降低细胞内MDA的含量,提升细胞内CAT、SOD、GSH-Px的活力,并呈剂量依赖性。结论:二氢槲皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤具有显著保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与其能够提高细胞内抗氧化酶活性,增强细胞稳定性有关。

二氢槲皮素与二氢杨梅素抗炎活性对比研究

构建巨噬细胞验证模型,比较研究二氢槲皮素(Dihydroquercetin,taxifolin,TF)和二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)体外抗炎活性。以1 mg/L的脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞建立了体外炎症模型;通过细胞毒性试验(MTT)法检测细胞存活率;Griess试剂法测定细胞上清液中NO(一氧化氮)释放量;ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β(白细胞介素-1β)、IL-6(白细胞介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)和PGE2(前列腺素E2)的含量变化;通过RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达情况。MTT试验结果表明,二氢槲皮素和二氢杨梅素各剂量组没有表现出对巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性。同时,二氢槲皮素高中低剂量组和二氢杨梅素高中低剂量组均能显著抑制脂多糖诱导细胞对NO、PGE2的释放(P<0.01),且均表现出剂量依赖性;二氢槲皮素高中低剂量组和二氢杨梅素高中低剂量组均能有效降低IL-1β、IL-6、TNF-α基因的表达,同时能够降低脂多糖诱导细胞产生细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。二氢槲皮素和二氢杨梅素均具有良好的体外抗炎作用,且二氢槲皮素的抗炎作用较好。

二氢槲皮素药理作用的研究进展

二氢槲皮素(DHQ)是一种从植物中提取的黄酮类化合物,其在某些植物中的含量非常丰富。DHQ药理作用极其广泛,可以应用于社会上多个行业中。本文主要从药理作用方面对DHQ的研究进展进行详细的概括,以期为DHQ的进一步研究提供参考依据。

落叶松中二氢槲皮素的提取及鉴定

研究了从落叶松中提取二氢槲皮素的工艺路线,探索了影响提取率的工艺条件,并对产物进行了结构鉴定。

二氢槲皮素的提取及抗氧化性研究

采用浸提法,分别用水、丙酮-水作为提取溶剂从落叶松中提取二氢槲皮素,通过L9(34)正交实验优化最佳提取条件;研究不同油脂中二氢槲皮素的抗氧化效果;比较Vc、BHT、EDTA、柠檬酸对二氢槲皮素的抗氧化协同作用。结果表明,以水作为溶剂的最佳提取条件为:提取温度90℃、料液比1∶12(g/mL)、提取时间120min,以丙酮作为溶剂的最佳提取条件是:丙酮浓度60%(V/V)%、料液比1∶14(g/mL)、提取时间4 h,且以丙酮-水为提取剂的索氏提取量高于以水作为提取剂的提取量;猪油和大豆油的最佳抗氧化剂添加量分别是0.04%(m/m%)和0.06%(m/m%);在四种增效剂中Vc的增效作用最强。

刺玫蔷薇茎中二氢槲皮素的提取工艺研究

探索了从刺玫蔷薇茎中提取二氢槲皮素的工艺条件,考察了乙醇提取及盐酸水解过程中各条件对二氢槲皮素提取率的影响。通过单因素实验确定其最佳条件:原料粒度为100～120目、提取温度为80℃、乙醇溶液浓度为60%、料液比为1∶15、提取时间为3h及盐酸溶液与原料用量比值为3∶1、盐酸浓度为3mol/L、水解时间为2h、水解温度为90℃,在此条件下二氢槲皮素的提取率为90.79%。