β-二氢青蒿素-大黄素复合物对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的探讨β-二氢青蒿素-大黄素复合物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,促进其凋亡的作用及机制。方法用MTT比色法检测β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞的抗增殖及细胞毒作用;利用流式细胞仪分析复合物作用前后SGC-7901细胞周期分布及凋亡率的改变;应用免疫细胞化学染色法检测蛋白CyclinD1和Ki-67的表达变化。结果(1)MTT结果显示,β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞抑制作用显著,且呈浓度-时间依赖性(P<0.05);(2)流式细胞仪检测分析出:实验组的细胞增殖被阻滞于G0/G1期、且凋亡率升高,均呈浓度梯度趋势(P<0.05);(3)免疫细胞化学染色结果显示:实验组中Ki-67和CyclinD1的阳性表达率明显降低,且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论β-二氢青蒿素-大黄素复合物可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,促进其凋亡,并且呈时效和量效关系;其作用机制可能与影响细胞周期有关,且药物浓度越高,下调作用越明显。

β-二氢青蒿素-大黄素复合物对人胃癌细胞株SGC-7901作用的实验研究

目的探讨β-二氢青蒿素-大黄素复合物能否诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关作用机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞的抗增殖及细胞毒作用、Hoechst33258荧光染色和HE染色观察细胞凋亡的形态学改变、AnnexinV-PI双染法检测凋亡、Western Blotting方法检测CyclinD1和Ki-67蛋白的表达变化。结果 MTT结果β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞抑制作用显著,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05);镜下观察可见明显的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测结果显示,β-二氢青蒿素-大黄素复合物能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05);Western Blotting方法发现β-二氢青蒿素-大黄素复合物明显下调了CyclinD1和Ki-67的表达水平。结论β-二氢青蒿素-大黄素复合物可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞有关。

二氢青蒿素通过抑制SIRT1的表达而增强5-氟尿嘧啶对胃癌的抗肿瘤活性

目的:探讨二氢青蒿素对5-氟尿嘧啶治疗胃癌的辅助作用并研究其机制。方法:实验分为对照组、二氢青蒿素组、5-氟尿嘧啶组、5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组和5-氟尿嘧啶+二氢青蒿素+SIRT1质粒组。MTT法检测胃癌细胞系BGC-823在5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素处理下的细胞活力。Western blot实验检测5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素对BGC-823细胞SIRT1和NADPH氧化酶表达水平,caspase-9和caspase-3活化水平及凋亡信号调节激酶1(ASK1)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白磷酸化水平的影响。流式细胞术检测BGC-823细胞在5-氟尿嘧啶和二氢青蒿素联合处理下的活性氧簇(ROS)生成水平和细胞凋亡率。结果:二氢青蒿素处理能显著抑制BGC-823细胞SIRT1的表达并增加NADPH氧化酶的蛋白水平,明显提高BGC-823细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,降低5-氟尿嘧啶的半数抑制浓度;转染SIRT1表达质粒后,二氢青蒿素联合5-氟尿嘧啶对BGC-823细胞的杀伤活性受到显著抑制(P<0.05)。二氢青蒿素能明显促进5-氟尿嘧啶对BGC-823细胞生成ROS的诱导效应和ASK1及JNK的磷酸化(P<0.05)。用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)或JNK特异性抑制剂SP600125处理后,二氢青蒿素联合5-氟尿嘧啶对BGC-823细胞的杀伤活性和caspase-9及caspase-3的活化均受到明显抑制(P<0.05)。另外,NAC能显著抑制二氢青蒿素联合5-氟尿嘧啶对JNK磷酸化的促进作用,而SP600125却不能影响BGC-823细胞ROS的产生,表明JNK是ROS的下游分子。结论:二氢青蒿素联合5-氟尿嘧啶通过SIRT1/NADPH氧化酶/ROS/JNK通路诱导胃癌细胞发生caspase依赖的凋亡。

二氢青蒿素-碱基拼合物的合成及抗肿瘤活性研究

以二氢青蒿素为先导化合物,设计并合成15个二氢青蒿素-碱基拼合物(LA01~LA13,LB01,LB02),化合物结构经^(1)HNMR和ESI-MS表征。采用MTT法测定LA和LB系列化合物对乳腺癌MDA-MB-436和T47D细胞株的体外抗增殖活性。结果表明,化合物LA13和LB01对三阴乳腺癌MDA-MB-436细胞有显著抑制活性,其IC_(50)值分别为5.32μmol·L^(-1)和2.54μmol·L^(-1)。

二氢青蒿素抑制ATF2磷酸化提高胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨二氢青蒿素与5-氟尿嘧啶协同抗胃癌效应的机制。方法 MTT实验检测胃癌细胞系BGC-823的细胞活力;流式细胞术检测BGC-823细胞的凋亡;Western blot实验检测BGC-823细胞中ATF2、磷酸化ATF2、Bcl-xl的表达水平及细胞色素c的释放水平和Caspase-3活化水平。结果 5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素对BGC-823的细胞活力抑制率[(67.1±5.5)%]和凋亡诱导率[(37.3±2.9)%]均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组[细胞活力抑制率:(18.9±1.5)%,P<0.05];凋亡诱导率[(9.5±0.9)%,P<0.05]。5-氟尿嘧啶+二氢青蒿素+ATF2质粒组BGC-823的细胞活力抑制率[(26.5±2.1)%]和凋亡诱导率[(14.9±1.1)%]显著低于5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组(P<0.05)。5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组的ATF2磷酸化水平和Bcl-xl表达水平均显著低于5-氟尿嘧啶单治疗组,同时5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素治疗组的细胞色素c释放水平及Caspase-3活化水平均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组。结论二氢青蒿素通过抑制ATF2的磷酸化增强5-氟尿嘧啶对胃癌细胞的杀伤活性。

RP-HPLC法测定大鼠血浆中DHX-11的浓度

目的建立测定大鼠血浆中10-O-[4-(1-乙酰基-5-苯基-4,5-二氢吡唑-3-基)苯基]-(10S)-二氢青蒿素(10-O-[4-[1-acetyl-5-phenyl-4,5-dihydropyrazol-3-yl]phenyl]-(10S)-dihydroartemisinin,DHX-11)的高效液相色谱方法,并应用于DHX-11的药物动力学研究。方法采用反相色谱柱(200mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比为90∶10),流速为1 mL.min-1,检测波长为294nm,内标为大黄酚,以液液萃取法处理血浆。结果 DHX-11血浆浓度在0.022～1.120 mg.L-1内线性关系良好(r>0.996 0),定量下限为0.022 mg.L-1,日内、日间精密度(以相对标准偏差表示)不大于13.3%,低、中、高质量浓度(0.0448、0.224、0.896 mg.L-1)质控样品回收率分别为92.7%、91.1%、85.7%。大鼠灌胃给药血药浓度-时间数据经DAS2.0药动学软件处理,主要药动学参数为:t1/2:(1.922±0.632)h;CL/F:(104.673±31.629)L.h-.1kg-1;AUC0-t:(3 778.6±1 031.4)μg.h.L-1;AUC0-∞:(3 879.3±1 010.7)μg.h.L-1。结论该方法可作为大鼠血浆中DHX-11浓度的测定方法,为探讨DHX-11的药动学行为提供了方法依据。

壮药斜叶黄檀中1对新的异黄烷类对映异构体

目的研究壮药斜叶黄檀Dalbergia pinnata根茎的化学成分。方法通过硅胶柱色谱、RP-C18及半制备高效液相色谱法进行分离和纯化,根据理化性质、波谱数据及结合参考文献鉴定化合物结构并对分离得到的化合物进行体外抗氧化活性测试。结果从斜叶黄檀乙醇提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为斜叶黄檀素A(1a)、斜叶黄檀素B(1b)、2’-甲氧基-4’-羟基-α,β-二氢查耳酮(2)、3,7-二羟基-6-甲氧基-二氢黄酮(3)、8-羟基-4’,7-二甲氧基异黄酮(4)、黑黄檀素(5)、黄檀素(6)、6-羟基-7-甲氧基-二氢黄酮(7)、赝靛黄素(8)、8-O-methylretusin(9)、二氢芒柄花黄素(10)、2’-甲氧基-4’-羟基查耳酮(11)、5,7,3’-三羟基-5’-甲氧基-异黄酮(12)。结论化合物1a和1b为1对新的异黄烷对映异构体,化合物7为新的天然产物,所有化合物均为首次从斜叶黄檀植物中分离得到。化合物1(1a+1b)、3~4、6~7、9~12表现出较好的体外抗氧化能力,与阳性对照维生素C相当。