HPLC法同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量

目的建立能同时测定冠心安口服液中蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的HPLC分析方法。方法Capcell Pak UG C_(18)色谱柱分离;蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷检测波长分别设定为334、281、320 nm;柱温为室温;进样体积为10μL;以乙腈为流动相A,1 mL·L^(−1)磷酸溶液(三乙胺调节pH至6.0)为流动相B,梯度洗脱。结果蒙花苷、延胡索乙素和2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的质量浓度分别在0.0245~2.4500、0.0457~4.5700、0.0474~4.7400μg·mL^(−1)范围内线性良好;平均回收率分别为100.8%、99.9%、101.4%;精密度和重复性RSD值(n=6)均在5.0%以内;供试品溶液在24 h内稳定。结论此方法具有前处理简单、分析时间短和检测结果准确等优点,适用于冠心安口服液制剂的质量控制。

二苯乙烯苷调控PI3K/AKT信号通路干预SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)经PI3K/AKT通路对冈田酸诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及调控机制。方法:CCK-8法筛选OA最佳浓度,将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、TSG组、LY294002组和LY294002+TSG组。通过CCK-8法和TUNEL法检测各组细胞增殖和凋亡情况;Western blotting法和qRT-PCR法检测PI3K、P-PI3K(Y607)、AKT、P-AKT(Ser473)、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达情况,通路及凋亡蛋白相对表达量以P-PI3K(Y607)/PI3K、P-AKT(Ser473)/AKT、Bcl-2/Bax灰度比值表示。结果:OA最佳处理浓度为40 nmol/L。与对照组相比,模型组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,通路及凋亡蛋白、PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bax mRNA表达水平升高(均P<0.05);与模型组相比,TSG组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,通路及凋亡蛋白、PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA相对表达水平升高,Bax mRNA表达水平降低(均P<0.05),LY294002组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,P-PI3K(Y607)/PI3K蛋白表达水平显著降低(P<0.05)、P-AKT(Ser473)/AKT、Bcl-2/Bax蛋白表达水平较明显降低,但未有统计学意义,PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bax mRNA表达水平升高(均P<0.05);与LY294002组相比,LY294002+TSG组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,通路及凋亡蛋白相对表达水平、PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA升高,Bax mRNA表达水平降低(均P<0.05)。结论:二苯乙烯苷可能通过干预PI3K/AKT信号通路,进而调节Bcl-2、Bax等凋亡因子的表达,从而缓解冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。

高效液相色谱法同时测定苁蓉通便口服液中松果菊苷和二苯乙烯苷的含量

建立同时测定苁蓉通便口服液样品中松果菊苷和二苯乙烯苷含量的HPLC方法。采用Tech Mate C18-ST(4.6 mm×250.0 mm,5µm)色谱柱;利用乙腈-0.2%甲酸溶液进行梯度洗脱;检测波长330 nm;流速1.0 mL/min。结果显示,苁蓉通便口服液中的松果菊苷和二苯乙烯苷与相邻色谱峰分离度良好,松果菊苷和二苯乙烯苷分别在0.1593~0.9558µg和0.3853~4.6235µg范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.28%、98.43%(RSD<2.0%),10批苁蓉通便口服液中2种成分的含量分别为7.70~8.35 mg/mL和8.80~14.70 mg/mL。该方法操作简单、准确,可用于苁蓉通便口服液中松果菊苷和二苯乙烯苷的含量测定。

碘化钾对Pd/C催化加氢制备4,4′-二氨基二苯乙烯-2,2′-二磺酸反应的影响

以Pd/C为催化剂,碘化钾(KI)为助催化剂,研究了液相催化加氢法还原4,4'-二硝基二苯乙烯-2,2'-二磺酸制备4,4'-二氨基二苯乙烯-2,2'-二磺酸.结果表明,当KI用量为原料质量的0.4%时,可显著提高催化加氢反应的选择性,制得产物的纯度(质量分数)为99.4%,收率可达97.4%.产物用元素分析、IR、1H NMR 和MS进行了鉴定.

何首乌提取物二苯乙烯苷对糖尿病肾病模型大鼠肾组织血管内皮生长因子干预研究

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对糖尿病(DM)大鼠肾组织血管内皮生长因子(VEGF)表达干预,探讨TSG延缓糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球滤过率下降机理。方法雄性Wister大鼠150只,分正常组(NC组)48只;余102只高糖高脂喂养,8周后造DM大鼠模型。其中95只大鼠造模成功,随机分为模型组(DN组)50只;二苯乙烯苷治疗组(DN+TSG组)45只,TSG(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射干预8周,实验观察共20周。HE染色、光镜、电子显微镜下观察各组大鼠肾脏组织形态学的变化;免疫组织化学染色方法测定大鼠肾组织中VEGF的表达变化。结果TSG干预8周时及给药结束后即实验12、16、20周时,DN组与NC组比较:尿微量白蛋白/肌酐(UALB/Ucr)、总胆固醇(CHOL)、血肌酐(Scr)逐渐升高(P<0.05)。DN+TSG组较DN组:UALB/Ucr、CHOL、Scr降低(P<0.05)、病理变化减轻、VEGF在肾组织中表达减少(P<0.05)。结论何首乌提取物TSG延缓DN大鼠肾功能不全进展,可能与其减轻DN大鼠肾脏VEGF表达,减轻氧化应激对肾脏血管内皮损伤,减少蛋白尿有关。

Pd/C催化剂选择加氢合成4,4’-二氨基二苯乙烯-2,2’-二磺酸

在水介质中,采用Pd/C-OVN复合催化剂,研究了4,4’-二硝基二苯乙烯-2,2’-二磺酸(DNS)选择加氢合成4,4’-二氨基二苯乙烯-2,2’-二磺酸。用正交设计法对工艺条件进行优化,得出最佳反应条件为:原料DNS质量浓度200 g/L,Pd/C催化剂用量2.0％,助催化剂OVN用量0.8％,反应温度65℃。在此条件下考察了催化剂的稳定性,产物结构经红外光谱确证。

反式和顺式二苯乙烯苷在大鼠体内的药代动力学比较研究

[目的]比较何首乌中反式二苯乙烯苷和顺式二苯乙烯苷在大鼠体内的药代动力学差异。[方法]分别单次灌胃给药(60 mg/kg)反式二苯乙烯苷和顺式二苯乙烯苷后,测定大鼠给药后不同时间点的血浆中药物浓度,通过计算药代动力学参数,比较两者的体内药动学行为差异。[结果]单次给药反式二苯乙烯苷和顺式二苯乙烯苷后,大鼠血浆中顺式二苯乙烯苷的半衰期(T1/2)显著高于反式二苯乙烯苷(P<0.05),而反式二苯乙烯苷在大鼠体内的达峰浓度(Cmax)和清除率(CLz/F)则显著高于顺式二苯乙烯苷(P<0.05)。[结论]单次给予相同浓度的反式二苯乙烯苷和顺式二苯乙烯苷后,两者在大鼠体内的药代动力学行为存在明显差异。

4,4’-二氨基二苯乙烯-2,2’-二磺酸改性水性聚氨酯的制备及性能

以异佛尔酮二异氰酸酯（IPDI）及聚己内酯二元醇（PCL1000）为主要原料,二羟甲基丙酸（DMPA）为亲水扩链剂,制得了一系列水性聚氨酯预聚体。利用4,4＇-二氨基二苯乙烯-2,2＇-二磺酸（DSD酸）作为扩链剂进行改性,得到荧光水性聚氨酯（SWPU）。采用FTIR、DLS、XRD、UV-Vis、荧光光谱、力学性能分析、热重分析对荧光聚氨酯进行了结构表征与性能测试。FTIR、DLS分析表明：DSD酸已引入到聚氨酯分子链中,随着DSD酸质量分数的增加,乳液粒径先减小后增大,当DSD酸质量分数为2%时,制备的SWPU2乳液粒径最小（44.61nm）。XRD、UV-Vis、荧光光谱结果表明：SWPU有紫外吸收且发生了红移,发出较强的蓝紫色荧光并发生浓度猝灭。与WPU相比,SWPU的力学性能及热稳定性明显提高,SWPU2荧光强度最强为434568.94 a.u.,胶膜的最大拉伸强度为48.43 MPa,断裂伸长率为389.40%;最大分解温度也由301.48℃提高到328.05℃。

二苯乙烯苷对血糖波动性糖尿病小鼠血清VEGF和PEDF水平的影响及其与肾功能的关系

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对血糖波动性糖尿病小鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)水平的影响及其与肾功能的关系。方法把30只小鼠随机分为正常组、血糖波动性糖尿病组、血糖波动性糖尿病TSG治疗组动物模型,每组10只小鼠。小鼠左下腹腔内注射链脲佐菌素(60mg/kg)复制糖尿病动物模型;糖尿病小鼠模型制备成功后,采用腹腔注射给予葡萄糖和胰岛素造成血糖波动;血糖波动性糖尿病TSG治疗组每天2次50 mg/kg TSG灌胃,正常组及血糖波动性糖尿病组给予等量的生理盐水灌胃,连续8周后,所有小鼠测空腹血糖;采用全自动生化分析仪测定血清血肌酐(Serum Creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)含量;用ELISA法检测各组小鼠血清VEGF、PEDF的含量;用苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜观察各组小鼠肾组织的形态学变化。结果与正常组比较,血糖波动性糖尿病组、血糖波动性糖尿病TSG治疗组的空腹血糖[分别为(20.700±1.399)mmol/L、(19.220±1.132)mmol/L]、血清SCr[分别为(172.500±15.537)μmol/L、(151.600±12.912)μmol/L]、BUN[分别为(20.870±4.109)mmol/L、(13.760±2.000)mmol/L]、VEGF[分别为(80.330±5.081)pg/ml、(74.030±4.473)pg/ml]、PEDF[(39.640±4.617)pg/ml、(45.570±5.485)pg/ml]水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与血糖波动性糖尿病组比较,血糖波动性糖尿病TSG治疗组小鼠空腹血糖、血清SCr、BUN、VEGF水平降低,PEDF水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示:正常组小鼠肾组织结构正常,血糖波动性糖尿病组、血糖波动性糖尿病TSG治疗组的小鼠肾小球体积增大,肿胀,囊性扩张,间质水肿,有炎细胞浸润,肾小管出现萎缩、消失,血糖波动性糖尿病组病理变化更严重。结论TSG可改善血糖波动性糖尿病小鼠的血糖水平,增强肾脏对血肌酐、血尿素氮的清除,降低VEGF水平,升高PEDF水平,发挥对血糖波动性糖尿病小鼠肾脏的保护作用。

何首乌提取物二苯乙烯苷延缓糖尿病大鼠肾小球滤过率下降的实验研究

目的:探讨何首乌提取物TSG延缓DM大鼠肾小球滤过率下降的机理。方法:雄性Wistar大鼠150只,分NC组48只;余102只高糖高脂喂养,8周后造DM大鼠模型。95只大鼠造模成功,DN组50只;DN+TSG组45只。给予DN+TSG组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射8周,实验20周。通过HE染色、光镜、电镜下观察各组大鼠肾脏病理变化;采用免疫组化测定大鼠肾组织中ET-1、vWF的表达变化水平;Western-blot蛋白定量分析大鼠肾组织中NT蛋白的表达水平。结果:TSG干预8周时及给药结束后即实验12、16、20周时测DN组:UAlb/Ucr、CHOL、Scr逐渐升高(P<0.05),DN+TSG组较DN组:UAlb/Ucr、CHOL降低,20周Scr降低(P<0.05);HE染色、电镜结果较DN组病理变化减轻;免疫组化:与DN组比ET-1、vWF在肾组织中表达减少(P<0.05),但均未恢复到NC组的水平;Western蛋白印迹:与NC组比较,DN组和TSG+DN组大鼠肾脏NT蛋白表达量的灰度比值升高;与DN组相比TSG+DN组肾脏NT蛋白表达量的灰度比值降低(P<0.05)。结论:TSG对DM大鼠肾脏血管内皮损伤有保护作用,可能通过干预DM大鼠肾脏氧化反应,减少UAlb/Ucr、CHOL、Scr,减轻血管内皮损伤,进而延缓DN向ESRD发展。

何首乌提取物二苯乙烯苷对糖尿病肾病大鼠肾组织SUR2B亚型K_(ATP)通道干预作用的研究

目的:观察何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对DN(糖尿病肾病)大鼠肾组织SUR2B亚型K_(ATP)通道的调节作用,探讨TSG延缓DN大鼠肾小球滤过率下降的机理。方法:实验分为正常组,模型组,TSG组;高糖高脂喂养8周后尾静脉注射STZ(30 mg/kg)造模;TSG组予TSG(30 mg/kg)腹腔注射,正常组、模型组腹腔注射等量生理盐水,实验观察共20周。检测各组大鼠UALB/UCr、SCr;免疫组织化学染色方法测定大鼠肾组织vWF(血管性血友病因子)的表达;Real-Time PCR法测定SUR2B/Kir6.1mRNA表达变化。结果:正常组比较,DN组大鼠UALB/UCr、SCr升高(P<0.05),肾组织vWF表达增强,SUR2B/Kir6.1mRNA表达减少;TSG组较DN组UALB/UCr、SCr降低(P<0.05),肾组织vWF表达减弱(P<0.05),SUR2B/Kir6.1mRNA表达增加(P<0.05)。结论:何首乌提取物TSG延缓DN大鼠肾功能下降,可能与其调节肾脏SUR2B/Kir6.1亚型K_(ATP)通道,减轻氧化应激对肾脏血管内皮损伤有关。

甲磺酸奥希替尼联合常规培美曲塞二钠加卡铂化疗方法治疗晚期非小细胞肺癌的临床效果分析

目的探讨甲磺酸奥希替尼联合常规培美曲塞二钠加卡铂化疗方法治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床效果。方法选取2018年10月至2023年1月首都医科大学宣武医院收治的105例晚期NSCLC患者为研究对象。依照随机数字表法分为对照组(52例)和观察组(53例)。对照组给予培美曲塞二钠加卡铂化疗,观察组在对照组基础上给予甲磺酸奥希替尼治疗,3周为1个疗程,2组均连续治疗2个疗程。治疗后进行疾病控制率评价,比较2组治疗前后的Karnofsky功能状态(KPS)评分、CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)水平、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)比值及细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原、胸苷激酶1水平及治疗期间不良反应发生率。结果观察组疾病控制率高于对照组[83.0%(44/53)比65.4%(34/52)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组KPS评分高于对照组[(76±6)分比(64±6)分];观察组CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)水平及CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)比值高于治疗前且高于对照组;2组CYFRA21-1、癌胚抗原、胸苷激酶1水平均低于治疗前且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗期间,观察组与对照组不良反应发生率差异无统计学意义[13.2%(7/53)比9.6%(5/52)](P>0.05)。结论甲磺酸奥希替尼联合常规培美曲塞二钠加卡铂化疗方法治疗晚期NSCLC的临床效果较好,有助于患者生活质量和免疫功能的提高,且具有较好的安全性。

HPLC法测定不同产地生何首乌和不同炮制工艺制首乌中顺(反)式二苯乙烯苷含量

目的比较不同产地何首乌及不同炮制工艺制何首乌中顺(反)二苯乙烯苷含量的变化,探究其炮制减毒增效的作用机制,为何首乌质量控制及饮片炮制标准研究提供数据参考,以期降低临床用药风险。方法采用高效液相色谱法,测定何首乌和制何首乌中顺(反)式二苯乙烯苷(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)的含量。结果不同批次何首乌和制何首乌中顺(反)式二苯乙烯苷含量范围分别为27.23~358.19μg·g^(-1)和10.30~52.00 mg·g^(-1)。结论本方法操作简单,准确度高,重复性好,可以用于何首乌和制何首乌中顺(反)式二苯乙烯苷含量测定。

DSD酸新工艺研究(Ⅰ)——4,4’-二氨基二苯乙烯-2.2’-二磺酸合成

采用50%发烟硫酸磺化对硝基甲苯,生成2-甲基-5-硝基苯磺酸,在无催化剂的条件下,用次氯酸钠溶液氧化缩合2-甲基-5-硝基苯磺酸,生成4,4′-二硝基二苯乙烯-2,2′-二磺酸,再用盐酸铁粉还原得4,4′-二氨基二苯(烯-2,2′-二磺酸(简称 DSD 酸).

介孔钯碳催化液相加氢制备4,4′-二氨基二苯乙烯-2,2′-二磺酸酸

以介孔碳负载钯(Pd/MC)为催化剂,研究4,4′-二硝基二苯乙烯-2,2′-二磺酸(DNS酸)液相催化加氢制备4,4′-二氨基二苯乙烯-2,2′-二磺酸(DSD酸)反应工艺。结果表明,在蒸馏水为溶剂,催化剂活性组分的负载量为5%,催化剂为原料质量的0.2%,原料质量浓度为175g/L,温度为60℃,压力为1MPa条件下,DNS酸的转化率达100%,DSD酸的纯度为99.46%,收率可达98%以上。

基于对Klotho表达的调控作用探讨何首乌提取物二苯乙烯苷对慢性肾衰竭大鼠高脂血症的影响

目的:探讨何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对慢性肾衰竭大鼠肾脏Klotho蛋白表达及血脂变化的影响。方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG组[20 mg/(kg·d)]、缬沙坦组[55 mg/(kg·d)],每组10只。采用5/6肾脏切除法建立慢性肾衰竭模型,分别灌胃给药4周,假手术组与模型组给予等剂量饮用水灌胃。全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),及24 h尿蛋白定量(24 hUP),计算三酰甘油与高密度脂蛋白胆固醇比值(TG/HDL-C)。肾组织HE染色,光镜观察肾脏病理改变;免疫组化及Western blot检测肾组织Klotho蛋白及TGF-β1(转化生长因子-β1)表达。结果:与假手术组相比,模型组SCr、BUN及24 hUP水平均升高(均P<0.01);与模型组比较,TSG和缬沙坦组以上指标均下降(P<0.05或P<0.01),两给药组之间无明显差异(P>0.05)。模型组TC、TG、LDL-C、TG/HDL-C均明显高于假手术组(P<0.05或P<0.01),TSG组以上指标明显降低,与模型组相比有明显差异(P<0.05或P<0.01),缬沙坦无降低血脂作用。免疫组化和Western blot结果显示,模型组Klotho蛋白表达明显低于假手术组(P<0.01),TGF-β1表达明显高于假手术组(P<0.01);TSG及缬沙坦均可以升高Klotho蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG能调节慢性肾衰竭大鼠血脂异常,尤其是降低TG水平及TG/HDL-C,保护肾功能,其作用机制可能与升高Klotho蛋白表达相关。

二苯乙烯类化合物对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢紊乱的改善作用

目的探讨4个二苯乙烯类化合物对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)状态HepG2细胞糖脂代谢的影响。方法高糖高脂复合物诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型后,MTT法检测细胞活力;试剂盒检测细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)和葡萄糖含量;油红O染色法观察细胞脂质积累,共聚焦显微镜观察细胞对葡萄糖的摄取;采用Western blot检测PPARγ信号通路和PI3K/Akt胰岛素信号通路相关蛋白的表达,探讨二苯乙烯类化合物对IR-HepG2细胞糖、脂质代谢的影响。结果50 mmol·L^(-1)葡萄糖和0.5 mmol·L^(-1)油酸组成的复合物诱导HepG2细胞48 h成功建立IR模型。与模型组相比,4个化合物均能不同程度地降低细胞中TG含量和脂质积累,并能提高细胞对葡萄糖的摄取能力。各化合物可显著抑制IR-HepG2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPARγ)等脂代谢相关蛋白的表达水平,同时上调磷酸化磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-Kinase,PI3K)等糖代谢相关蛋白表达,其中土大黄苷和白藜芦醇效果最为显著。结论4个二苯乙烯类化合物尤其是土大黄苷和白藜芦醇改善HepG2细胞的IR,可能与其调节细胞糖脂代谢紊乱有关,作用机制可能与调控PPARγ等脂代谢相关蛋白的表达和激活PI3K/Akt/mTOR1通路有关。

钯/碳催化剂的预处理对催化加氢制备4,4′-二氨基二苯乙烯-2,2′-二磺酸的影响

实验以水为反应介质,Pd/C为催化剂,OVN为助催化剂,以NaHSO3水溶液为处理剂,考察了Pd/C催化剂经预处理后,对催化加氢制备4,4′-二氨基二苯乙烯-2,2′-二磺酸(DSD酸)反应选择性的影响。实验结果表明,催化剂的预处理和助催化剂的添加,均可提高Pd/C催化加氢制备DSD酸反应的选择性。在较佳条件下,首次催化加氢所得产品DSD酸的收率可达95.77%,副产物苄基物的质量分数仅为0.31%。