手性衍生-高效液相色谱法拆分菌体细胞壁中α,ε-二氨基庚二酸非对映异构体

建立了一种手性衍生-高效液相色谱荧光检测法拆分菌体细胞壁中α,ε-二氨基庚二酸(DAP)3种非对映异构体(LL、DD和meso)的方法。100mg干细胞样品经2mL6mol/LHCl于110℃下水解8h,水解液用Na2CO3调pH至中性。水解后的样品经邻苯二甲醛(OPA)和N-乙酰基-L-半胱氨酸手性衍生后,使用乙腈与0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(10:90,V:V)混合溶剂洗脱,反相C18柱(250mm×4.6mm,5μm)分离,荧光检测器检测(ex=350nm,em=455nm)。α,ε-二氨基庚二酸(DAP)3种非对映异构体(LL、DD和meso)的手性衍生物得到良好分离。对7个样品分析结果表明,适用于菌体细胞壁中DAP的3种非对映异构体的分离。

二氨基庚二酸激活NOD1信号通路对心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨二氨基庚二酸(DAP)激活核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1(NOD1)信号通路对心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法:将40只C57/BL6雄性小鼠随机分为4组,即假手术组、I/R组、DAP组和I/R+DAP组,每组10只。对I/R组和I/R+DAP组小鼠进行心肌缺血再灌注模型制备,假手术组进行相同的手术操作,但只穿线不结扎,DAP组和I/R+DAP组小鼠在冠状动脉结扎前30 min腹腔注射DAP,假手术组和I/R组小鼠注射等剂量的生理盐水;观察各组小鼠心肌梗死、心肌细胞凋亡、炎症反应及NF-κB p65磷酸化情况。结果:I/R组NOD1 mRNA和NOD1蛋白表达水平均显著高于假手术组(P<0.05);I/R组梗死面积比值明显高于假手术组,且I/R+DAP组小鼠梗死面积最高(P<0.05),而DAP组与假手术组差异无统计学意义;I/R组和I/R+DAP组TUNEL阳性细胞数显着高于假手术组,I/R+DAP组阳性细胞数最多(P<0.05),而DAP组与假手术组差异无统计学意义;I/R组和I/R+DAP组炎症细胞浸润数明显多于假手术组,I/R+DAP组小鼠最高(P<0.05);I/R组和I/R+DAP组磷酸化的NF-κB p65蛋白水平显著高于假手术组,且I/R+DAP组最高(P<0.05)。结论:DAP激活NOD1可加重缺血再灌注损伤后小鼠心脏心肌细胞的梗死面积,增加心肌细胞的凋亡和炎症反应,该机制与NF-κB信号通路的激活有关。

抗幽门螺杆菌药物设计重要靶点二氨基庚二酸脱羧酶晶体结构成功解析

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种螺旋状厌氧细菌，与慢性胃炎、胃粘膜相关淋巴样组织（MALT）淋巴瘤等疾病的发生都有密切关系，也是目前唯一被确认为胃癌致病因素之一的细菌。上海药物所沈旭课题组与药物发现与设计中心蒋华良课题组的博士研究生张良、刘伟治通过高通量筛选技术发现两个高活性HpFabZ小分子抑制剂，

赖氨酸在嗜热自养型甲醇IS株中籍二氨基庚二酸途径的生物合成

嗜热自养型甲醇菌是一种原细菌具有赖氨酸生物合成之二氨基庚二酸途径中的第一和最后一个酶,即二氢吡啶二羧酸合成酶与二氨基庚二酸脱羧酶,这种菌没有酵母氦酸脱氨酶,即赖氨酸的氨基已二酸生物合成途径的最后一个酶,二氢二吡啶二羧骏合成酶被赖氨酸抑制,但不受其阻遏。我们认为这种细菌是以二氨基庚二酸途径来合成赖氨酸的。

有机介质对2,3-二氨基吩嗪的荧光增敏作用研究

研究了有机介质对漆酶催化氧化邻苯二胺的产物──2，3-二氨基吩嗪（DAP）的光谱性质的影响，结果表明；极性有机介质对其吸收光谱影响较小，但对其荧光具有强烈的增敏作用，荧光量子效率可提高近30倍．据此，建立了有机介质增敏荧光测定DAP的新方法．进一步研究表明：有机介质对2，3-二氨基吩嗪的荧光增敏原因在于其增溶作用、供电子效应及对DAP分子吸光性能的增强．

2,3——二氨基吩嗪光谱特性研究及应用

研究了各种介质中不同酸度对2,3——二氨基吩嗪(DAP)的光谱特性的影响,发现非离子表面活性剂以及极性有机溶剂对其荧光具有强烈的增敏作用,荧光量子产率大大提高,而且强极性有机溶剂在无水环境下,对其荧光增敏比非离子表面活性剂更强。建立了有机介质和非离子表面活性剂介质荧光增敏的测定方法,并对各种介质增敏机理进行了讨论。

发展中的氨基酸工业(二) 各论

1.L-谷氨酸钠 2.DL-蛋氨酸 3.L-赖氨酸盐酸盐 4.甘氨酸 5.L-色氨酸 6.L-半胱氨酸盐酸盐 7.DL-丙氨酸 8.L-谷氨酰胺 9.L-精氨酸盐酸盐 10.L-亮氨酸 11.

不同NDF/NFC比的日粮对山羊小肠可吸收氨基酸组成的影响

用4只体重(35±2.5)kg装瘤胃瘘管、十二指肠和回肠T型瘘管的徐淮白山羊,饲喂中性洗涤纤维/非纤维性碳水化合物比(NDF/NFC)不同的A、B、C、D 4种日粮,分别利用二氨基庚二酸和卵磷脂作为瘤胃细菌和纤毛虫的内标物测定进入十二指肠的细菌、纤毛虫及过瘤胃饲料蛋白质的各种氨基酸的流量与组成,研究对山羊小肠内可吸收氨基酸组成的影响。结果表明:小肠可吸收氨基酸(AA)中,B组细菌AA为1.54 g/d,极显著高于A组(0.45 g/d)、C组(0.36 g/d)、D组(0.39 g/d)(P<0.01),且B组占可吸收AA的38.4%,显著高于D组(24.84%)(P<0.05),极显著高于A组(13.25%)和C组(14.81%)(P<0.01);纤毛虫AA在A组为1.22 g/d,分别极显著高于B组(0.63 g/d)、C组(0.57 g/d)、D组(0.42 g/d)(P<0.01),且A组占可吸收AA的36.74%,B、C、D组分别占15.71%、23.45%、26.75%;来自过瘤胃饲料的小肠可吸收AA中,A、B组分别为1.65、1.84 g/d,显著高于C组(1.51 g/d)(P<0.05),极显著高于D组(0.76 g/d)(P<0.01),占可吸收AA%以C组(61.73%)为最高,显著高于A组(49.13%)、D组(48.41%)(P<0.05),极显著高于B组(45.88%)(P<0.01),即B组转化为微生物蛋白质的效率最高;在微生物蛋白质的AA组成中,纤毛虫的AA组成相对稳定,食糜颗粒相结合细菌的AA含量组成比食糜液相结合细菌相对稳定,食糜液相结合细菌AA变化直接影响小肠内可吸收的细菌AA组成与数量。

小单孢菌细胞壁中3－OHDAP的快速分析

本文介绍了用微结晶纤维素簿板层析对小单孢菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）细胞壁中二氨基庚二酸（ＤＡＰ）异构体及其３－羟基衍生物（３－ＯＨＤＡＰ）进行快速分析的方法。在甲醇：水：冰乙酸：吡啶（１０：５：０．２５：１）的溶剂系统中测得Ｒ＿（ＬＬ－ＤＡＰ）：ｍｅｓｏ－ＤＡＰ为０．８８，ＤＤ－ＤＡＰ为０．７８，３－ＯＨＤＡＰ为０．７２。

基于六氯合锡阴离子构筑的有机-无机超分子杂合物YSnCl6[Y:H2TEDA,（HDEA）2,H2DAP]的制备和结构

在盐酸水-甲醇介质中,三乙烯二胺(TEDA)、二乙胺(DEA)和由邻苯二胺(OPD)自缩合形成的 2,3-二氨基吩嗪(DAP)发生质子化形成有机铵阳离子,四氯化锡转化为六氯合锡阴离子.通过氢键和离子对作用,有机铵阳离子与六氯合锡阴离子自组装成有机-无机超分子杂合物,[(H2 TEDA)(SnCl6 )](1 ),[(HDEA)2 (SnCl6 )](2),[(H2 DAP)(SnCl6 )](3).杂合物的晶体分子结构经 X-射线衍射方法测定确证.化合物(1 )和(3)的晶体属于三斜晶系,分别为P-1 和P1 空间群,化合物(2)的晶体属于单斜晶系,P2(1)/n 空间群.晶体中,六氯合锡阴离子具有变形八面体构型,有机组分与无机组分穿插排列,形成(1 )和(3 )三维、(2 )为二维的超分子结构,为进一步新材料研究奠定基础.

嗜热共生杆菌内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶中Y76对辅酶偏好性影响

辅酶NAD(H)相比NADP(H)有稳定性好、价格低廉及更广的辅酶循环方法等优势,因此在实际应用中常需将NADP(H)依赖型的脱氢酶改造成为NAD(H)依赖型的。来源于嗜热共生杆菌Symbiobacterium thermophilum的NADP(H)依赖型内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(meso-2,6-diaminopimelate dehydrogenase,St DAPDH)及其突变体酶是催化还原氨化合成D-氨基酸的优良催化剂,本研究试图改变其辅酶偏好性,增强其应用优势。对其晶体结构分析可知,氨基酸残基Y76距离腺嘌呤较近,R35及R36和辅酶上磷酸基团有直接相互作用。依氨基酸侧链基团性质对Y76进行了定点突变,发现不同突变子对两种辅酶的偏好性都发生了变化;对与磷酸基团直接作用的R35、R36进行的双突变R35S/R36V,导致酶对NADP+的催化活力降低;将R35S/R36V和部分Y76突变进行了组合,发现三突变组合以NAD+为辅酶时的活力均大于以NADP+为辅酶的活力,实现了辅酶偏好性转变。这些研究工作为进一步实现St DAPDH的辅酶偏好性完全转变提供依据。

内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶关键氨基酸位点的改造提高对烷基取代2-酮酸的催化活力

【背景】高效实现D-氨基酸的生物合成一直是人们关注的热点。内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶(meso-diaminopimelate dehydrogenase,DAPDH)能够直接催化2-酮酸和氨合成D-氨基酸。【目的】提高DAPDH对烷基取代2-酮酸的催化活力,并解释其催化机制。【方法】以来源于嗜热共生杆菌(Symbiobacteriumthermophilum)的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)为模板,在前期结构分析结合被选择位点突变结果的基础上,确定对H227位进行定点饱和突变,并以D-丙氨酸、D-2-氨基丁酸、D-正缬氨酸、D-谷氨酸为底物进行筛选。【结果】获得突变体H227Q和H227N。突变体H227Q对丙酮酸、2-氧代丁酸、2-氧代戊酸、2-酮戊二酸的比活力比野生型分别提高了10.9、11.5、8.6和7.6倍。动力学参数表明,突变体H227Q同时提高了酶对底物的亲和力及催化常数,使其对丙酮酸的催化效率(kcat/Km)相较于野生型提高了9.4倍。利用分子模拟技术分析突变体H227Q与产物氨基酸之间的相互作用表明,227位的谷氨酰胺通过与氨基酸的羧酸形成氢键,使得氨基酸产物Cα上的氢和辅酶烟酰胺环C4原子之间的距离缩短。【结论】利用定向进化技术提高DAPDH对烷基取代2-酮酸的催化活力,有助于开发新型的高效生物催化剂,这些工作也为下一步继续进行更具挑战性的D-氨基酸研究提供了基础。

内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶不对称合成非天然手性D-氨基酸的研究进展

内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶不对称合成非天然的手性D-氨基酸是目前生物催化领域的研究热点。内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶具有优良的立体选择性,利用其进行酶催化不对称合成光学纯的手性D-氨基酸,被广泛用于医药、食品、化妆品、精细化学品等领域。为了促进生物催化法在合成手性D-氨基酸方向的进一步发展,本文对内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶催化合成D-氨基酸的现状进行了综述。重点介绍了Corynebacterium glutamicum、Ureibacillus thermosphaericus、Symbiobacterium thermophilum来源的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶在新酶的挖掘、催化性能、晶体结构解析、分子改造、功能与催化机制、合成D-氨基酸新途径等方面的研究进展,并对内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶的未来研究方向及策略进行了展望。本综述将进一步加深人们对内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶的认识,也为具有挑战性的生物合成任务提供信息借鉴。

山羊尿中嘌呤衍生物排出规律的研究

测定瘤胃微生物蛋白质的传统方法为标记法,标记物分内源标记物和外源标记物两类。常用的内源标记物主要有二氨基庚二酸（DAPA）、核糖核酸（RNA）、氨基酸序列（AAP）、三磷酸腺甙（ATP）、磷脂胆碱（P-C）、D-丙氨酸,常用的外源标记物主要有15N、35S和32P等同位素标记[1]。

L-赖氨酸高产基因工程菌的构建

赖氨酸的高产菌株已通过经典的诱变法获得 ,但要再提高这些诱变株的产量就很困难。赖氨酸的生物合成很有规律 ,它不仅依赖于赖氨酸合成途径中的酶 ,而且依赖于驱动合成赖氨酸的碳源代谢的酶。为了提高赖氨酸产率 ,就要求改变碳源的供应 ,从而控制中间物向赖氨酸合成的转化。二氨基庚二酸合酶基因 (dapA)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因 (ppc)是菌体在赖氨酸合成代谢途径中 ,控制表达二氨基庚二酸合酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的关键基因。我们首先分别克隆这两个基因 ,并使之处于一定启动子控制下。然后将dapA和ppc重组克隆到同一个载体 ,并转化赖氨酸发酵菌 ,从而提高菌体内的酶活 ,进一步提高赖氨酸发酵产率。

细菌细胞壁的结构

了解细菌细胞壁的结构,对于研究细菌的分类、遗传、及噬菌体的感染,对于解释抗生素和溶菌酶等对细菌的作用,以及革兰氏染色的机理等,都是很重要的。本文拟对细菌细胞壁的结构作一简述。

水霉病的流行病学和防治方法

水霉病作为一种真菌病,严重困扰水产养殖业的发展,且没有适合水霉病的水产用国标药物。 一、水霉病病原 水霉病病原有10多种,主要以水霉属、绵霉属、细囊霉属的种类最为常见。水霉病病原是真核生物,以菌丝或酵母形细胞方式生长,细胞壁较结实,大多由几丁质组成。水霉病病原的营养体通常为二倍体;病原的细胞壁主要成分是纤维素,并缺乏明显层次;细胞中线粒体脊排列不规则;细胞的核膜厚薄不均匀,核孔多;细胞的赖氨酸合成途径为二氨基庚二酸途径,与藻类和维管植物相同。

嗜水气单胞菌asd-1基因功能研究

asd-1基因编码天冬氨酸半醛脱氢酶,该酶可影响革兰氏阴性菌的细胞壁正常合成。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)asd-1基因的功能,采用Overlap PCR方法敲除该基因,结果显示asd-1基因的敲除明显降低了嗜水气单胞菌的生长速度,但是不会导致突变株对二氨基庚二酸(DAP)的强制需求,进一步对氨基酸序列分析表明asd-1蛋白质较迟缓爱德华氏菌、鲶爱德华氏菌的asd A蛋白质多出3个氨基酸,其中Asn-257导致asd A蛋白质中的关键活性位点Arg-267在asd-1蛋白质中改变为Val-267,该研究表明嗜水气单胞菌的asd-1基因突变显著降低其生长速度。

细菌的形态及观察

细菌属于原核生物,是一些在显微镜下才能看到的单细胞有机体。原核生物只有核质而无核膜,没有有丝分裂各阶段,行直接分裂繁殖,不具有纤维素(醋酸杆菌除外)、几丁质、藻胶、果胶、木质素、甾醇(极少数种例外)。这些特点表明它们既不属于动物界,也不属于植物界。原核生物包括细菌和蓝细菌,蓝细菌具有叶绿素a和藻蓝素,细菌没有这两种色素,而有其特有的物质。