二氨基荧光素单取代功能化研究

一氧化氮(NO)是生物体内一种重要的信号分子。二氨基荧光素是一种能够有效检测NO的荧光探针化合物。通过结合"tagging"技术对二氨基荧光素进行单功能化可提高其NO探测的靶向性和空间分辨率。本文针对二氨基荧光素和HaloTag结合的问题,以邻苯二胺为模型化合物对反应条件进行优化,并用二氨基荧光素二乙酸酯验证了该系列反应条件的合理性,以高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析了取代产物的组成和含量。实验结果表明,溴乙酰溴是二氨基荧光素和HaloTag之间最合适的连接子。采用优化的反应条件,目标单取代产物的产率可以达到34.8%。本研究为邻二氨基类一氧化氮荧光探针的单烷基取代功能化的应用奠定了基础。

豚鼠耳蜗外毛细胞的一氧化氮定量分析

目的:为了观察一氧化氮底物左旋精氨酸(L-arginie)和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对豚鼠耳蜗外毛细胞一氧化氮的影响。方法:应用新的荧光染料4,5二氨基乙酰乙酸荧光素(4,5-diaminofluorescein diacetate,DAF-2DA)测定豚鼠耳蜗外毛细胞内一氧化氮的含量。结果:发现加左旋精氨酸后外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值升高。而加左旋硝基精氨酸甲酯后,外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值降低。结论:进一步证明豚鼠耳蜗外毛细胞内存在一氧化氮。

高效液相色谱法测定水体中的痕量一氧化氮

基于4,5-二氨基荧光素与一氧化氮(NO)反应生成高荧光三唑荧光素的原理,建立了一种测定水体中溶解NO的高效液相色谱方法。通过不同流动相(乙腈∶磷酸盐缓冲溶液)配比实验和色谱柱温度梯度实验,确定了该方法测定水体中NO的最佳实验条件:流动相配比为乙腈∶磷酸盐缓冲溶液=8∶92(V/V);柱温为25℃。在优化条件下,测得NO浓度与荧光强度在0.33~3.32 nmol/L和13.3~266 nmol/L范围内具有良好的线性关系,检出限为90 pmol/L,相对标准偏差为5.1%,平均加标回收率为122.4%。方法可用于测定可口可乐、植物饮料、海水和日本星杆藻藻液中的NO浓度。