Cdc25 Ccyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞中的作用

目的:研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cdc25C、cyclin B1的作用。方法:采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性;流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响;Western blot观察DADS对Cdc25C蛋白、cyclin B1蛋白表达的影响。结果:MTT比色实验结果显示,DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的剂量-效应依赖关系(P<0.05)。流式细胞分析发现,DADS作用12h时,G2/M期细胞增加到30.1%;24h时增加到58.1%;36h达50.2%(P<0.05)。Western blot结果表明,DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达,cyclinB1表达在DADS处理24h后开始下降(P<0.05)。结论:DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制Cdc25C、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G2/M期。

二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果。进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3 (F=247. 86,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=302. 54,P=0. 000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性。DADS处理24 h时SK-OV-3 (F=335. 12,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=347. 43,P=0. 000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P <0. 05)。DADS处理24 h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12和48 h时,呈明显的时间依赖性(P <0. 05)。与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548. 23,P=0. 000; F=311. 84,P=0. 000)。将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375. 11,P=0. 000; F=256. 48,P=0. 000)。将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,p-Chk1 (ser345)(F=108. 89,P=0. 013; F=97. 58,P=0. 018)、p-CDC25C (ser216)(F=87. 25,P=0. 025; F=114. 25,P=0. 009)、p-P53 (ser15)(F=112. 41,P=0. 011; F=255. 87,P=0. 000)、P21WAF1 (F=246. 38,P=0. 001; F=141. 36,P=0. 005)和p-CDK1 (Thr14/Tyr15)蛋白(F=298. 12,P=0. 000; F=233. 15,P=0. 000)的表达明显增加,CDK1 (F=308. 24,P=0. 000; F=257. 55,P=0. 000)和Cyclin B1蛋白(F=223. 15,P=0. 001; F=241. 28,P=0. 000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA (F=77. 36,P=0. 031; F=157. 28,P=0. 001)、Ki-67 (F=205. 64,P=0. 007; F=315. 22,P=0. 000)和Survivin蛋白(F=122. 13,P=0. 013; F=188. 24,P=0. 000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86. 46,P=0. 023; F=99. 11,P=0. 009)。结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,最终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关。

p42/44MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡

目的 :探讨二烯丙基二硫化物 (DADS)诱导CNE2细胞凋亡及p4 2 4 4MAPK信号转导通路对此过程的作用。方法 :DADS处理CNE2细胞 2 4h后 ,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数 ,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定细胞活性 ,流式细胞仪检测凋亡细胞 ,蛋白质印迹法检测磷酸化p4 2 4 4MAPK表达。结果 :DADS(5 0～ 15 0 μmol·L-1)作用 2 4h后 ,诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化 (核浓染 核碎裂 ) ,流式细胞仪结果显示 ,随着DADS给药浓度增加 ,细胞凋亡率呈浓度依赖性逐渐升高 ,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律 ,DADS(5 0～ 15 0 μmol·L-1)浓度依赖性刺激磷酸化p4 2 4 4MAPK的表达 ,p4 2 4 4MAPK抑制剂U0 12 6显著增强DADS致凋亡作用。结论 :DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化p4 2 4 4MAPK表达 ,磷酸化p4 2 4 4MAPK抑制剂能增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应。

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌细胞凋亡机制

目的研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法用MTT法检测DADS处理24 h后H1299细胞活性;用蛋白质印迹法测定H1299细胞内磷酸化-p42/44 MAPK的表达。结果与对照组相比,DADS呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;蛋白质印迹法分析显示,DADS可激活p42/44 MAPK,且磷酸化-p42/44 MAPK的表达呈浓度依赖性增加。结论DADS能诱导H1299人非小细胞性肺癌细胞发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性诱导磷酸化-p42/44 MAPK表达。

p38 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡

目的 研究二烯丙基二硫化物 (DADS)诱导CNE2细胞凋亡及 p38MAPK信号转导通路对此过程的作用。 方法 DADS处理CNE2细胞 2 4h后 ,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数 ,MTT法测定细胞活性 ,流式细胞仪检测凋亡细胞 ,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK表达。结果 在培养的CNE2细胞中 ,DADS(50～ 1 50 μmol·L- 1 )作用 2 4h后 ,DADS诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化 (核浓染 ,核碎裂 ) ,流式细胞仪结果显示 ,随着DADS给药剂量增加 ,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律 ,细胞凋亡呈剂量依赖性 ,DADS(50～ 1 50 μmol·L- 1 )浓度依赖性刺激磷酸化p38MAPK的表达 ,p38MAPK抑制剂SB2 0 3580明显增强DADS致凋亡作用。结论 DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化 p38MAPK表达 。

二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的机制

目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的。笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G_2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C(Cell division cycle protein 25C,Cdc25C)、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G_2/M期,但G_2/M期阻滞的机制还未完全阐明。本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的可能机制。方法:RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC823细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3相关基因(ATM-RAD3-related gene,ATR)、细胞周期检查点蛋白激酶1(checkpoint kinase1,Chk1)、细胞周期检查点蛋白激酶2(checkpoint kinase2,Chk2)表达和ATR、Chk1、Chk2的磷酸化程度:免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合情况。结果:RT-PCR检测显示,Chk1和Chk2的mRNA水平在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05)。Western blot检测显示,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/L DADS刺激BGC823细胞2h后,处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.05),而Chk2磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05)。15mg/L DADS作用15～120min,ATR磷酸化程度明显增加,呈时间依赖性(P<0.05),而ATR表达无改变。免疫共沉淀分析表明,DADS能促进BGC823细胞Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论:DAD诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞与Chk1的活化有关,DADS可能是通过激活ATR、Chk1,调节Cdc25C的表达引起人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞。

二烯丙基二硫化物对人胃癌MGC803细胞G_2/M期检查点激酶Chk1/2的影响

目的:观察二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌MGC803细胞的细胞周期检查点激酶1(Chkl)和细胞周期检查点激酶2(Chk2)的影响。方法:RT-PCR检测MGC803细胞的Chk1和Chk2激酶在mRNA水平的改变;Western blotting检测Chk1、Chk2的表达和Chk1、Chk2的磷酸化程度,免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与细胞分裂周期蛋白25C(Cdc25C)结合情况。结果:RT-PCR检测显示,Chkl和Chk2 mRNA水平在处理组与未处理组之间无明显差异(P>0.05)。Western blotting检测显示,MGC803细胞分别受30 mg.L-1DADS刺激1 h和2 h后,与未处理组相比,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变(P>0.05);但处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.01),而Chk2在处理组与未处理组间磷酸化程度无明显差异(P>0.05)。免疫共沉淀分析表明,MGC803细胞中DADS能促进Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论:DADS可能是通过激活Chk1引起人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞。

二烯丙基二硫化物对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用。方法取对数生长期的细胞,分别用0、20、50、100、200μmol/L的DADS处理24 h,用CCK-8法测算细胞生长抑制率。结果用20、50、100、200μmol/L的DADS处理24 h后,小鼠Lewis肺癌细胞生长抑制率分别为16.35%±0.40%、28.85%±0.70%、35.09%±0.50%、41.14%±1.10%,不同DADS药物浓度间比较,P均<0.01。结论 DADS呈浓度依赖性抑制Lewis肺癌细胞的增殖。

二烯丙基二硫化物对膀胱癌细胞p-ERK表达的影响研究

目的观察大蒜提取物二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK表达的影响,以探讨二烯丙基二硫化物抗膀胱癌的作用,为应用于临床肿瘤的治疗提供部分理论基础。方法用培养的人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因转录的影响;并裂解人膀胱癌T24细胞株提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹检测p-ERK蛋白的表达情况。结果人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后,p-ERK基因表达mRNA的水平明显降低(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05);人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后即可检测出p-ERK蛋白的表达减少(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05)。结论二烯丙基二硫化物可下调人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因的转录与p-ERK蛋白的表达,这可能是二烯丙基二硫化物抗癌的机制之一。

二烯丙基二硫化物体内抗鸡马立克氏病毒的研究

为探究大蒜中抗病毒的活性成分二烯丙基二硫化物(Diallyl disulfide,DADS)在体内抗鸡马立克氏病毒(Marek's Disease Virus,MDV)的效果,以弱毒疫苗株CVI988/Rispens接种鸡胚成纤维细胞(CEFS)获取大量的MDV,感染雏鸡建立模型。主要通过病理组织切片的观察、血清生化指标的检测以及实时荧光定量QPCR等方法,探讨DADS在鸡体内抗鸡马立克氏病毒的有效浓度范围以及作用效果。结果表明:DADS浓度为250,500,750μmol/m L时能有效降低雏鸡血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及甘油三酯(TG)的水平,同时也有降低病毒拷贝数的作用。所以3种浓度的DADS能在疾病早期有效抑制患马立克氏病鸡肝脏肿瘤生长并具有体内抗病毒的效果。

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌H1299细胞凋亡机理研究

目的:研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及细胞周期阻滞对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法:MTT法检测细胞活性、Hoechst 33258染色法计数凋亡细胞、流式细胞术检测细胞凋亡率及周期分布。结果:与未处理的对照组相比,DADS可诱导H1299细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,并呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;较高浓度的DADS能诱导G2/M期细胞百分率显著升高。结论:DADS能诱导H1299细胞发生细胞凋亡,并诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞。

二烯丙基二硫化物对HL-60白血病细胞株VEGF表达及分泌的影响

为了研究二烯丙基二硫化物(diallyldisulfide,DADS)对白血病HL-60细胞株VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用,并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制,应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量;RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGFmRNA的相对含量。结果表明:HL-60细胞中均有VEGFmRNA的表达和VEGF蛋白的分泌;与空白对照相比,DADS3个浓度组(0.625,1.25,2.5μg/ml)作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌(P<0.01)。3个浓度组间差异显著(P<0.01),其下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关(r>0.9,P<0.01)。结论:DADS可能通过抑制VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应。

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。

二烯丙基二硫化物对NR硫化胶粉的再生作用

研究二烯丙基二硫化物（DADS）对NR硫化胶粉的再生效果,主要探讨再生工艺和DADS用量对NR硫化胶粉再生效果的影响,并利用傅里叶转换红外光谱和扫描电子显微镜初步探讨DADS对NR硫化胶粉的再生机理。结果表明：在浸润温度为60℃、浸润时间为1 d、剪切时间为5 min的工艺条件下,DADS用量为6~10份时对NR硫化胶粉的再生效果较好;DADS可以催化断裂NR硫化胶的交联键,也可能使其大分子主链断裂,从而使其交联密度降低,DADS甚至可以溶解NR硫化胶片;在剪切力的协助下,DADS的S S键以及NR硫化胶的多硫键可以裂解为含硫自由基,通过两种自由基的结合可以达到降低NR硫化胶交联密度的目的。

微波辐射相转移催化合成二烯丙基二硫化物的研究

本文用微波辐射相转移催化法合成了二烯丙基二硫化物,研究了微波辐射功率、微波辐射时间、相转移催化剂的量以及反应物的摩尔比等因素对产品产率的影响。最佳反应条件为:以蒸馏水为溶剂,四丁基溴化铵作相转移催化剂,n(二硫化钠)∶n(烯丙基氯)=0.65∶1,ω(二硫化钠)∶ω(四丁基溴化铵)=47.67∶1,微波功率195W,微波辐射时间12 min,收率82.2%。证明合成的二烯丙基二硫化物对HepG2细胞具有细胞毒性。

二烯丙基二硫化物诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡及Fas/FasL信号通路调控作用

为探究二烯丙基二硫化物(DADS)对马立克氏病肿瘤细胞系(MDCC-MSB-1细胞)的增殖抑制作用及其信号通路的调控机制,以MDCC-MSB-1细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度DADS分别作用MDCC-MSB-1细胞24,48,72 h后对细胞增殖抑制的影响。用0、80、160、240μmol/LDADS预处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33342核酸染色法检测细胞形态变化;caspase-8活性试剂盒检测细胞中caspase-8蛋白酶活性;并用荧光定量PCR法检测Fas/FasL信号通路关键因子mRNA的转录水平。结果显示,40μmol/L〜240μmol/L的DADS抑制MDCC-MSB-1细胞的增殖呈时间剂量依赖性;随着浓度的升高,细胞形态逐渐出现细胞核核膜消失,染色体降解为多个片段并且边缘化,形成凋亡小体;240μmol/L的DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞caspase-8蛋白酶活性及Fas、FADD、caspase-8、Bid和caspase-3mRNA的转录水平极显著升高(P<0.01)。结果表明,DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡,并活化其Fas/FasL死亡受体凋亡信号通路,可为鸡马立克氏病的治疗提供参考。

二烯丙基二硫化物对马立克氏病鸡血清生化指标的影响

评估抗肿瘤药物二烯丙基二硫化物(DADS)对仔鸡马立克氏病(MD)血清生化指标的影响及其抗肿瘤效果。将75只1日龄雏鸡随机平均分为5组,分别为空白组,对照组和二烯丙基二硫化物低剂量组、中剂量组、高剂量组。1日龄时对照组和试验组肌内注射马立克氏病病毒(MDV)进行攻毒,15日龄时分别以低剂量、中剂量、高剂量的DADS皮下注射作为药物试验组,40日龄时比较5组试验鸡血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、总胆红素(TB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血糖(GLU)的变化。结果显示,MDV对鸡体的ALB、TP、GLU呈下调作用,其他检测项呈上调作用;DADS对感染MDV鸡指标有恢复正常值的作用,并且随浓度的增大呈上升到下降的趋势,最适浓度在100μmol/mL。提示DADS能有效抑制MDV的早期感染,增强肝功能。

大蒜中二烯丙基二硫化物对大鼠前列腺癌有化学预防作用

二烯丙基二硫化物（DAD8）是蒜中的重要化合物，对人肿瘤如结肠癌、肺癌和皮肤癌有化学预防作用。ArmkuⅢarA发表论文称其采用体内模型，研究了DADS对SD大鼠前列腺癌的化学预防作用。

二烯丙基二硫化物对MDCC-MSB-1细胞凋亡的影响

以50,100,150μmol/L二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide, DADS)处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,利用吖啶橙(acridine orange, AO)染色法对细胞凋亡的形态进行初步观察;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测P53的蛋白表达;蛋白活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性变化;Q-PCR检测Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达情况。结果显示,与空白组相比,DADS诱导MDCC-MSB-1细胞发生凋亡形态变化,增加细胞凋亡率,同时诱导p53蛋白表达量和线粒体膜电位下降,上调Caspase-3和Caspase-9基因表达水平和蛋白活性。