染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物合成及其抗乳腺癌活性研究

目的研究染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物的体外抗乳腺癌活性及其作用机制。方法合成染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物,通过MTT法检测其对癌细胞株MCF-7、MBA-MD-231、MBA-MD-435增殖抑制作用;并通过分子对接的方法探讨染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物与雌激素受体α(ERα)的作用方式。结果合成了3个染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物,并对其生物活性及抗乳腺癌机制进行了验证。结论染料木素邻苯二甲酰亚胺衍生物具有较强的抗乳腺癌活性,可能与竞争性抑制ERα等机制有关。

HPLC法同时测定金鸡虎补丸中的去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素

目的建立HPLC法同时测定金鸡虎补丸中去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素4种成分。方法金鸡虎补丸70%乙醇提取液的分析采用C18色谱柱（200mm×4.6mm,5μm）;流动相A为乙腈-甲醇（3∶2）,流动相B为0.1%H3PO4溶液,梯度洗脱;体积流量为0.9mL/min;去氢二异丁香酚检测波长为270nm,五味子甲素、染料木素和芒柄花素均为254nm;柱温为35℃;进样量20μL。结果被测定的4组成分色谱峰均有良好的分离度,方法精密度、重复性的RSD均小于2.0%;在室温条件下24h内稳定;各组分线性范围较宽,线性关系良好（r≥0.999 4）;平均加样回收率为96.8%-98.1%,RSD（n=6）≤1.4%。结论金鸡虎补丸的提取方法和流动相保证了分析方法的简单易行、重复性好、准确可靠。

7-O-[ω-(N-L-氨基酸甲酯)-烷基]-染料木素的合成与表征

染料木素具有多种生理活性,以染料木素和L-氨基酸为原料,经过染料木素烷基化、氨基酸酯化、偶联3步反应,合成了一系列新的标题化合物,并对8个标题化合物进行了1HNMR、HRMS和IR结构表征。

4′,7-二辛氧基染料木素的合成及其抗乳腺癌活性研究

目的合成4′,7-二辛氧基染料木素并检测其生物活性。方法在染料木素的7位和4′位引入辛氧基,并采用MTT比色法,以5氟尿嘧啶为阳性对照,评价其对体外培养的人乳腺癌(MCF-7)细胞的作用。结果 4′,7-二辛氧基染料木素对MCF-7细胞的增殖抑制作用强于阳性对照药物。结论提示4′,7-二辛氧基染料木素可作为抗乳腺癌的新型候选药物。

7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠急性毒性研究

目的研究化合物7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠的急性毒性。方法给小鼠按剂量2000mg·kg^-1一次性灌胃7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素,连续观察9天,统计死亡率,计算出LD50值。结果小鼠按剂量2000mg·kg^-1给予7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素后,均无明显中毒反应出现,也无死亡现象。结论 7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素毒性极低,属低毒范围。

染料木素的磷酰化结构改造及与溶菌酶的弱相互作用

采用改进的Atherton-Todd反应对染料木素进行磷酰化结构改造,得到了4种新的磷酰化产物,并通过ESI-MS,NMR进行了结构确认,结果发现磷酰化试剂对染料木素羟基的磷酰化具有较好的选择性,反应主要发生在染料木素7位羟基;进一步利用ESI质谱技术,对4种磷酰化染料木素与大分子溶菌酶的弱相互作用进行测定,显示所有的磷酰化产物均与溶菌酶形成非共价复合物。

6-羟基染料木素和6,8-二羟基染料木素的简便合成

以鹰嘴豆芽素A为原料,通过溴代、甲氧基化和去甲基化三步反应合成了6-羟基染料木素(2b)和6,8-二羟基染料木素(3b),总产率分别为20%和40%,其结构经1H NMR,13C NMR,IR和HR-MS(ESI)表征。

高效液相色谱法测定抗风湿液中染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚、五味子甲素的含量

目的采用多波长HPLC梯度洗脱法建立同时测定抗风湿液中染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素含量的方法。方法采用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流速：1.0 mL·min-1;流动相A为乙腈,流动相B为0.5%醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长：染料木苷和染料木素为263 nm,去氢二异丁香酚为274 nm,五味子甲素为250 nm;柱温为35℃。结果染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素质量浓度分别在9.65～193.00μg·mL-1（r=0.999 9）、7.25～145.00μg·mL-1（r=0.999 7）、5.90～118.00μg·mL-1（r=0.999 2）、5.30～106.00μg·mL-1（r=0.999 6）时与其峰面积呈良好的线性关系;染料木苷、染料木素、去氢二异丁香酚和五味子甲素的平均加样回收率分别为98.8%、99.1%、96.9%、98.1%,RSD分别为1.0%、1.3%、1.3%、1.5%（n=6）。结论该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可作为抗风湿液的含量控制方法。

染料木素对阿尔茨海默病模型大鼠氧化应激和Bcl-2的影响

目的:探讨染料木素(GS)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠氧化应激和Bcl-2的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、染料木素高剂量组(GS-H,90 mg/kg)、染料木素中剂量组(GS-M,30 mg/kg)、染料木素低剂量组(GS-L,10 mg/kg)、戊酸雌二醇组(EV,0.3mg/kg)6组,预给药7 d后,采用D-半乳糖腹腔注射联合Aβ25-35双侧海马注射造AD模型,观察AD大鼠学习记忆能力的变化,海马神经元形态结构变化,检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,及海马Bcl-2蛋白表达。结果:染料木素可以明显改善AD大鼠学习记忆能力,减少海马神经元丢失,改善细胞形态;显著提高AD大鼠血清SOD活力(P<0.05)和GSH含量(P<0.05),降低血清MDA含量(P<0.05),同时上调海马Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。结论:染料木素能有效减少神经元丢失,改善机体的氧化应激反应,提高机体抗氧化能力,调节AD大鼠Bcl-2蛋白表达,改善AD模型大鼠的学习记忆能力。

染料木素和大豆素的结构分析

染料木素和大豆素是大豆异黄酮苷元的两种主要成分,具有多种生物活性,关于其混合物的同时结构分析,鲜有报道。实验为确保混合物结构解析的正确性,利用质谱技术得出的物质分子离子峰及相关特征碎片峰、红外光谱技术所得的特征官能团信息、核磁共振(氢谱、碳谱及二维核磁共振谱等)技术分析出的碳氢等元素的结构分布情况,从化学式量、主要官能团及具体分子结构等方面成功地对染料木素和大豆素的混合物进行了分子结构的同时佐证解析。这避免了实验必须对混合物进行分离收集,再对各物质单独结构分析所带来的繁琐技术操作,使得方法简便,快捷省时。同时,实验所得方法为其他混合物结构解析提供技术参考。

中药红花化学成分的研究进展

红花具有活血通经,散瘀止痛的功效,有轻度兴奋心脏、降低冠脉阻力、增加冠脉流量和心肌营养性血流量的作用,临床用于预防和治疗冠心病、脑血栓、月经不调、类风湿性关节炎和结节性红斑等疾病。到目前为止,从红花中先后分离得到的化学成分有黄酮类、聚炔类、生物碱类、醌式查尔酮类、木脂素类、亚精胺类、烷基二醇类、有机酸类、甾族类、甾醇类等。由于红花成分的多样性和药理作用的广泛性,以及物美价廉的特性,从本世纪初对红花的成分和药理药效的研究一直是科研人员研究的热点,对红花近年来国内外化学成分的研究进展进行综述,以便于对该药材资源进行更好地研究、开发和利用。

温度及pH敏感的β-环糊精聚合物微球的合成及药物控制释放研究

以反相乳液聚合得到了β-CD聚合物微球,对β-CD微球进行氯乙酰化改性后,利用原子转移自由基聚合的方法把聚甲基丙烯酸N ,N 二甲氨基乙酯(PDMAEMA)接枝到β-CD微球上,从而得到了具有温度和pH响应性的β- CD聚合物微球.通过红外光谱、元素分析确定了PDMAEMA接枝的β- CD微球的结构,采用热台偏光显微镜直接观测到了β- CD微球的温度和pH敏感性.对模型药物染料木素(GNT)和苯丁酸氮芥(CLB )进行了控制释放研究,结果表明pH值可对微球的“内环境”起到“开 关”作用,从而可构筑出一种新型的药物控制释放体系.

新型大豆异黄酮萘磺酸酯前药的设计合成

利用前药原理对大豆异黄酮染料木素进行化学修饰，以提高染料木素的生物利用度进而改善其生物活性。结果成功设计合成了4个新型染料木素萘磺酸酯衍生物（2～5），所有新化合物的结构均经IR、MS、元素分析和^1H NMR确证。采用平行实验优选法优化关键中间体2的合成，并对其烷基化反应化学进行了初步分析。

基于“功效成分群”动态传递规律的盘龙七片质量标志物(Q-Marker)筛选

目的基于盘龙七片“祛风除湿”抗炎功效,通过分析盘龙七片“功效成分群”在“饮片-成药-入血成分”间传递的动态规律,筛选出质量标志物(quality markers,Q-Marker)。方法采用超高效液相-四极杆-飞行时间质谱联用技术(UPLCQ-TOF-MS/MS)对盘龙七片化学成分群进行表征,根据前期网络药理学分析结果,筛选候选“功效成分群”并以多重反应监测(MRM)模式建立同时定量测定方法。进一步通过评估功效成分群在“饮片-成药-入血成分”间转移规律确定“功效成分群”组成,然后以虚拟分子对接技术筛选候选Q-Marker,最后以“成分-体外活性”关联算法分析候选Q-Marker与关键靶点的结合活性,确定能代表盘龙七片“祛风除湿”抗炎作用的Q-Marker。结果成分表征鉴定并确定得到44个化学成分,结合网络药理学分析选择其中24个成分作为候选“功效成分群”。进一步评估“饮片-成药-入血”间动态传递规律筛选出7个转移率较高成分。最后通过分子对接及“成分-活性”关联算法确定了6个成分作为盘龙七片“祛风除湿”抗炎功效的QMarker。结论综合盘龙七片化学成分表征、“饮片-成药-入血”间转移规律、关键靶点结合能力和体外活性关联分析结果,将去氢木香内酯、龙胆苦苷、木香烃内酯、β-蜕皮甾酮、迷迭香酸和染料木素6个化合物作为盘龙七片Q-Marker。

基于HPLC 多成分定量分析不同产地太子参药材的质量

目的建立太子参Pseudostellaria heterophylla HPLC多成分定量检测方法,结合化学计量学和加权逼近理想解排序(TOPSIS)法对不同产地太子参药材质量进行评价。方法以Agilent Zorbax ODS C18柱为色谱柱,乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长分别为254、285、203 nm,采用HPLC法同时检测尿苷、肌苷、鸟苷、川陈皮素、染料木苷、木犀草素、金合欢素、白杨素、水杨酸、阿魏酸、肉桂酸、太子参环肽B、太子参环肽A、乌苏酸和β-谷甾醇的含量。利用SIMCA 14.1和SPSS 26.0软件对上述15种成分含量检测结果进行主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),挖掘影响太子参产品质量的差异性标志物。运用加权TOPSIS法进行7省17批次太子参药材综合质量评价。结果HPLC多成分定量分析方法学考察符合《中国药典》规定要求。PCA结果显示前2个主成分特征值均大于1,累积方差贡献率为87.843%,17批次太子参样品分为3类。OPLS-DA筛选出尿苷、金合欢素、肌苷、太子参环肽A、太子参环肽B、β-谷甾醇和阿魏酸为影响太子参产品质量的差异标志物。EW-TOPSIS欧氏贴近度在0.2585~0.6425,表明不同产地太子参质量差异较大,其中江苏、安徽地区太子参排名靠前,其次为福建、江西和湖南地区,云南、四川地区太子参排名靠后。结论建立的太子参HPLC多成分定量检测方法操作便捷、结果准确可靠,PCA、OPLS-DA联合加权TOPSIS法可用于不同产地太子参药材的质量评价。

大叶千斤拔根、茎的HPLC指纹图谱及成分差异研究

目的:为了研究大叶千斤拔根、茎的化学成分差异,首先建立大叶千斤拔根的HPLC指纹图谱,对根、茎的成分差异进行定性分析;其次,针对二者共有成分染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素建立含量测定方法,进行定量评价。方法:采用Agilent Zorbax SB-phenyl(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长260 nm;采用中药指纹图谱相似度评价系统(2.0版)进行相似度评价;对3个成分的含量测定结果,采用SPSS(16.0)软件t检验分析,确定区分根、茎的指标成分。结果:11批根的图谱相似度为0.919~0.984,7批茎的图谱相似度为0.638~0.848;染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分的含量在根中分别为0.64~1.30、0.62~1.21、0.13~0.47 mg·g^-1,在茎中分别为0.07~0.31、0.14~1.00、0.10~0.28 mg·g^-1。结论:大叶千斤拔根、茎的化学成分存在一定差异,染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分总量可用于大叶千斤拔根的质量控制,染料木苷含量或染料木苷与染料木素的含量比值可作为区分根、茎的指标。

蒙古黄芪的化学成分研究

目的研究蒙古黄芪Astragalus membranaceus var.mongholicus的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、大孔树脂柱色谱、ODS柱色谱及制备高效液相等色谱技术对蒙古黄芪70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化数据和波谱数据鉴定化合物的结构。结果共分离得到16个化合物,分别鉴定为芒柄花素(1)、毛蕊异黄酮(2)、(6aR,11aR)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷(3)、染料木素(4)、芒柄花苷(5)、毛蕊异黄酮苷(6)、7,2′-二羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)、(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(8)、红车轴草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(9)、黄芪甲苷(10)、异黄芪皂苷II(11)、黄芪皂苷VIII(12)、腺嘌呤(13)、鸟嘌呤核苷(14)、尿嘧啶核苷(15)、胡萝卜苷(16)。结论化合物13、14为首次从该属植物中分离得到。

兔肠道大豆异黄酮还原菌株的分离鉴定及其转化特性

【目的】从兔新鲜粪样中分离对大豆异黄酮黄豆苷原和染料木素具有转化作用的特定细菌菌株。【方法】在厌氧工作站内对獭兔新鲜粪样进行梯度稀释后涂板,挑取单菌落与底物黄豆苷原和染料木素分别厌氧混合培养,用高效液相色谱检测底物被转化情况。【结果】分离得到一株对大豆异黄酮黄豆苷原和染料木素均具有转化作用的革兰氏阳性严格厌氧细菌菌株AUH-JLR41(KJ188150)。根据产物的高效液相保留时间、紫外吸收图谱和质谱分析结果,将菌株AUH-JLR41代谢底物黄豆苷原和染料木素生成的产物分别鉴定为二氢黄豆苷原和二氢染料木素。经手性高效液相系统检测,产物二氢黄豆苷原和二氢染料木素均呈现两个等面积物质峰,表明这两个产物的对映体过量率均为0。通过转化动态研究发现,菌株AUH-JLR41分别在底物黄豆苷原和染料木素加入48 h和72 h后将底物全部转化为产物,该菌株能转化底物黄豆苷原和染料木素的最大浓度均为0.6 mmol/L。经BLAST比对,菌株AUH-JLR41的16S r RNA基因序列与斯奈克氏菌属菌株Slackia equolifaciens DZE(EU377663)的相似性高达99.6%。【结论】兔肠道分离的斯奈克氏菌属菌株Slackia sp.AUH-JLR41在厌氧条件下能将大豆异黄酮黄豆苷原和染料木素分别还原为二氢黄豆苷原和二氢染料木素。

基于指纹图谱结合化学模式识别及多成分定量的千斤拔质量评价研究

目的 建立千斤拔Moghania Radix HPLC指纹图谱及多成分定量方法,为其质量控制提供参考。方法 采用XBridge■C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,以乙腈-0.1%乙酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),检测波长260 nm,柱温30℃;对24批千斤拔(编号为S1~S24,其中S2~S9为采集的新鲜全株植物,实验室低温干燥而得,其余样品为市场购买药材或饮片)构建指纹图谱,同时测定相关成分的含量,并结合聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法进行全面评价。结果 24批不同来源千斤拔指纹图谱共标定11个共有峰,指认出染料木苷、6″-O-丙二酰基染料木苷、染料木素。相似度计算结果表明,各批次相似度在0.707~0.981;聚类分析将24批千斤拔分为2类,S2~S5、S6、S8、S9号样品(均为新鲜全株植物)聚为一类,其他17份样品聚为一类;经主成分分析,主成分1~4是影响样品质量评价的主要因子,选取前4个主因子对不同产地的千斤拔进行评分,24批样品的综合得分在5.34~-3.61,说明各批次质量差异相对较大;样品中综合得分最高是S4,各饮片样品的综合得分较低。24批样品中染料木苷、6″-O-丙二酰基染料木苷、染料木素质量分数分别为0.10~0.57、0.11~2.85、0.15~0.71 mg·g^(-1),不同批次之间3个成分质量分数差异较大,批次之间3个成分含量总体呈现出二低一高的趋势,建议使用3个成分总和作为质量控制指标。结论 建立的HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法稳定、可靠,可为千斤拔的质量评价提供依据。

HPLC法同时测定不同产地蔓性千斤拔中5个异黄酮成分的含量

目的:建立同时测定不同产地蔓性千斤拔药材中染料木素-4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、染料木苷5个异黄酮类化合物含量的高效液相色谱法。方法:采用Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长258 nm,柱温30℃。结果:染料木素4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷和染料木苷进样量分别在0.033~0.656μg(r=0.999 7)、0.010~0.204μg(r=0.999 5)、0.034~0.687μg(r=0.999 9)、0.012~0.244μg(r=0.999 7)和0.086~1.725μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为98.11%、94.27%、93.17%、93.13%和98.97%,RSD分别为1.0%、1.6%、1.4%、1.4%和1.8%。测得染料木素4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷和染料木苷的样品含量分别为0.112~0.192、0.047~0.072、0.110~0.170、0.074~0.115和0.437~0.703 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本法可用于蔓性千斤拔药材的质量控制。