二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠骨髓间充质干细胞缺血清凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的观察脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalglycine,DMOG)对无血清培养引起的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡影响及其对凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法分离小鼠股骨及胫骨骨髓腔中的单个核细胞,传代后应用流式细胞仪进行细胞表型检测和三系分化以鉴定骨髓间充质干细胞。流式细胞仪TUNEL法观察DMOG作用于细胞后对细胞无血清培养凋亡的对抗作用,Westerm blot检测DMOG对凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果实验所获的单个核细胞通过流式细胞仪细胞表型鉴定和三系分化鉴定证实为骨髓间充质干细胞。与无血清造模组相比,二甲基乙二酰基甘氨酸能明显降低骨髓间充质干细胞因缺血清导致的凋亡率(P<0.05),并上调凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表达(P<0.05),抑制凋亡促进蛋白Bax蛋白表达(P<0.05)。结论脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG能抑制骨髓间充质干细胞因缺血清培养引起的凋亡。对凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax表达的调控可能是DMOG对抗骨髓间充质干细胞凋亡的重要机制。

二甲基乙二酰基甘氨酸促进骨髓间充质干细胞成骨分化

目的观察二甲基乙二酰基甘氨酸对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的调控作用。化学性低氧模拟物(如二甲基乙二酰基甘氨酸)能够稳定低氧诱导因子,从而在骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化中发挥调控作用。方法于小鼠股骨及胫骨骨髓腔中分离获得小鼠骨髓单个核细胞,并以流式细胞仪鉴定及传代培养。使用二甲基乙二酰基甘氨酸对细胞进行干预,以便在常氧培养条件下模拟低氧环境。经过不同浓度二甲基乙二酰基甘氨酸干预后,使用MTT法检测细胞的增殖能力,使用碱性磷酸酶定量测定、碱性磷酸酶染色、茜素红钙结节染色评价骨髓间充质干细胞的成骨能力。结果流式细胞仪鉴定证实从小鼠骨髓腔中所获细胞为小鼠骨髓间充质干细胞。二甲基乙二酰基甘氨酸能够以剂量依赖的方式抑制骨髓间充质干细胞增殖(P<0.05),但0.5 mM浓度的二甲基乙二酰基甘氨酸能够上调碱性磷酸酶的表达和钙结节的沉积(P<0.05)。结论表明二甲基乙二酰基甘氨酸能抑制间充质干细胞的增殖,促进间充质干细胞的成骨分化。

二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增殖和分化的影响

目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到培养板24h后,实验组培养基中分别加入50μM(50μM组)和200μM(200μM组)的DMOG,对照组加入完全培养液。分别于培养1、3、5d时采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,5、10d行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测成骨细胞分化,21d用茜素红染色检测MC3T3-E1细胞钙结节的形成并进行定量分析,采用ELISA法检测MC3T3-E1培养3d情况时上清液中的VEGF蛋白含量,并用实时荧光定量PCR法检测MC3T3-E1细胞VEGF mRNA的相对表达量。结果:培养1d时对照组、50μM组和200μM组的MC3T3-E1的光密度(optical density,OD)值分别为0.041±0.009、0.074±0.019、0.086±0.044,3d时分别为0.123±0.027、0.148±0.020、0.224±0.061,5d时分别为0.297±0.044、0.325±0.084、0.354±0.038,1d、3d时50μM组和200μM组与同时间点对照组比较均有显著性差异(P<0.05),3d时50μM组与200μM组有显著性差异(P<0.05)。培养5d和10d时对照组ALP染色颜色较深,50μM组颜色中等,200μM组颜色较浅;5d时对照组ALP活性为1.943±0.072,50μM组为1.632±0.051,200μM组为1.319±0.065;10d时对照组ALP活性为3.734±0.067,50μM组为3.381±0.070,200μM组为2.831±0.086。三组间同时间点比较均有统计学差异(P<0.05),同组10d时与5d时比较均有统计学差异(P<0.05)。茜素红染色200μM组可见少量红色结节,50μM组可见中等量红色结节,对照组可见大量红色结节;对照组茜素红含量(μg/ml)为56.178±7.940,50μM组为41.922±2.438,200μM组为31.929±1.922,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。培养3d时对照组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量(ng/孔)为9.063±0.603,50μM组为12.123±0.870,200μM组为15.540±0.581,三组间比较均有统计学差异(P<0.05);50μM组VEGF mRNA表达量为对照组的1.792±0.067,200μM组为对照组的3.963±0.092,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 :低氧模拟剂DMOG可促进MC3T3-E1细胞增殖和VEGF表达,抑制其成骨分化。

低氧与DMOG对BMSCs成脂分化影响的对比研究

目的对比低氧培养与常氧下添加二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响。方法流式细胞术及细胞的成骨、成脂、成软骨三系分化对骨髓BMSCs进行鉴定;ELISA法观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在对照组(21%O2)、低氧组(1%低氧培养组)及DMOG干预组(常氧+DMOG培养组)下表达情况;油红O染色法观察BMSCs内脂肪滴形成情况;分别采用Real-time PCR法和Western blot法检测各组成脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的mRNA和蛋白水平。结果流式细胞术显示骨髓单个核细胞阳性表达CD90、CD44、CD105,阴性表达CD34,且能够向成骨、成软骨、成脂三系分化;与对照组HIF-1α蛋白表达(85.00±1.87)相比,低氧组及DMOG干预组(480.40±6.91、331±7.78)明显上调(P<0.01),其中低氧组HIF-1α蛋白较DMOG干预组HIF-1α蛋白明显上调(P<0.01);与对照组阳性细胞数(51.80±4.15)相比,低氧组和DMOG干预组(27.80±3.11、31.20±2.59)明显减少(P<0.05),低氧组与DMOG干预组阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,低氧组与DMOG干预组PPARγ与C/EBPα的mRNA明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与低氧组相比,DMOG干预组PPAR-γ及C/EBPα的mRNA表达明显下调(P<0.05)。与对照组相比,低氧组及DMOG干预组PPAR-γ蛋白表达分别下调了28.3%及39.8%(P<0.01),C/EBPα的蛋白表达分别下调了36.7%及42.5%(P<0.01);与低氧组相比,DMOG干预组PPAR-γ及C/EBPα蛋白表达分别下降了16%及9.1%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1%物理性低氧和常氧条件下0.5 mmol/L DMOG均能抑制BMSCs成脂分化,1%物理性低氧具有更强的抑制作用。

二甲基乙二酰基甘氨酸预处理对大鼠跨区穿支皮瓣成活的影响及相关机制

目的观察二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）预处理对大鼠跨区穿支皮瓣成活及闭塞区域2血管的影响，并探讨相关机制。方法取60只成年SD大鼠，按照随机数字表法分为DMOG组和生理盐水组，每组30只。在2组大鼠背部右侧制作三血管体穿支皮瓣，包括旋髂深动脉穿支、肋间动脉穿支、胸背动脉穿支和闭塞区域1、2。DMOG组大鼠于术前2d、2h及术后2d腹腔注射2mL含DMOG的生理盐水（DMOG剂量为40mg／kg），生理盐水组大鼠于相同时相点腹腔注射等量生理盐水。术后7d，行大体观察、计算皮瓣成活率；采用血管造影术观察皮瓣闭塞区域2及潜在区血管情况；HE染色观察皮瓣闭塞区域2的新生血管并计算微血管密度（MVD），免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法检测该区域的血管内皮生长因子（VEGF）表达（分别以积分吸光度值与灰度值比值表示），激光多普勒血流成像仪检测该区域血管的血流量。每组各项指标的样本数均为6。对数据行t检验。结果（1）术后7d，2组大鼠均存活，皮瓣未出现感染。DMOG组大鼠皮瓣的坏死区域大致位于胸背动脉穿支人皮点以远，痂皮呈暗黄色、质地较软；生理盐水组大鼠皮瓣的坏死区域大致位于闭塞区域2以远，痂皮呈棕黑色、质地较硬。DMOG组大鼠皮瓣成活率为（88±3）％，显著高于生理盐水组的（82±3）％（t=3．38，P〈0．01）。（2）术后7d，DMOG组大鼠皮瓣闭塞区域2的血管结构较清晰、新生血管较多，潜在区血管结构较完整；生理盐水组大鼠皮瓣闭塞区域2的血管结构模糊不清、新生血管较少，潜在区血管结构较紊乱。（3）术后7d，DMOG组大鼠皮瓣闭塞区域2的MVD为（29．2±2．2）个／mm2，明显多于生理盐水组[（20．3±3．6）个／mm2，t=5．10，P〈0．01]。（4）术后7d，DMOG组大鼠皮瓣闭塞区域2VEGF的免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法表达结果分别为5060±432、0．48±0．04，均明显高于生理盐水组（2811±382、0．26±0．06，t值分别为9．54、5．67，P值均小于O．01）。（5）术后7d，DMOG组大鼠皮瓣闭塞区域2血管的血流量为（584-4）灌注单位（PU），明显多于生理盐水组[（46±4）PU，t=5．20，P〈0．01]。结论DMOG可通过促进大鼠背部跨区穿支皮瓣闭塞区域2的血管新生，改善皮瓣血供，从而提高皮瓣的成活率。

二甲基乙二酰基甘氨酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成的影响

目的 观察二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、胶原合成的影响.方法 使用不同浓度DMOG分别作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,用噻唑蓝（MTT）法检测其增殖水平的差异和药物半数抑制浓度（IC50）及最佳干预时间;并将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为对照组、DMOG组（IC50为800 μmol/L的DMOG）、缺氧组及缺氧＋DMOG组（缺氧＋800μmol/L的DMOG）,作用36 h（最佳干预时间）后用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、Western blot检测各组的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞的增殖水平,流式细胞仪检测各组的细胞周期;羟脯氨酸比色法检测各组细胞的胶原合成.结果 随着浓度的增加（200、400、800、1 600 μmol/L）,DMOG对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖抑制呈剂量时间依耐性;在瘢痕疙瘩成纤维细胞中,缺氧组、DMOG组和缺氧＋DMOG组的HIF-1α的蛋白（0.98±0.09、1.36±0.16、1.43±0.21）和mRNA（1.14 ±0.11、1.24±0.16、1.27±0.11）的表达均较对照组的蛋白（0.71 ±0.13）和mRNA（1.01 ±0.02）高（P＜0.01）.流式细胞结果显示缺氧组、DMOG组和缺氧＋ DMOG组的G0/G1期细胞比例[（56.7±2.2）％、（61.3±3.3）％、（73.4±2.5）％],较对照组[（48.8±2.4）％]明显增加（P＜0.01）,S期细胞和G2/M期细胞比例均减少（P＜0.01）.与对照组比较,其他3组细胞增殖均受到了抑制,并且其中DMOG组和缺氧＋DMOG组培养36 h后细胞吸光度较对照组明显降低（0.54±0.01、0.29±0.02比1.01 ±0.02,P＜0.01）;与对照组比较,缺氧组中的羟脯氨酸水平、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白有均所升高（P＜0.01）.与对照组比较,DMOG组和缺氧＋ DMOG组中的羟脯氨酸（11.86 ±0.64、14.72±0.03比15.92±0.22）、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA（0.63 ±0.07、0.86±0.08、0.56 ±0.09、0.82 ±0.10比1.00±0.01、1.00 ±0.03）和蛋白（0.78 ±0.19、1.06±0.18、0.66 ±0.13、0.81±0.10比2.23 ±0.14、1.53 ±0.05）表达均明显降低（P＜0.01）.结论 DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖具抑制作用,并能显著抑制其胶原的合成.

二甲基乙二酰基甘氨酸对跨区穿支皮瓣Choke Ⅱ区血管生成的影响机制研究

目的研究二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对跨区穿支皮瓣Choke Ⅱ区血管生成的影响及作用机制。方法将126只成年雄性SD大鼠随机分为DMOG组、YC-1组和空白对照组,每组42只。3组大鼠背部制作大小为12 cm×3 cm的跨区穿支皮瓣模型;于术前1 d、2 h及术后1、2、3 d分别腹腔注射DMOG(40 mg/kg)、YC-1(HIF-1α抑制剂,10 mg/kg)和等量生理盐水。术后观察各组大鼠皮瓣成活情况,7 d时测量皮瓣成活面积并计算皮瓣成活率,皮瓣透光实验、明胶-氧化铅血管造影及HE染色观察皮瓣Choke Ⅱ区血管生成情况,免疫组织化学染色及Western blot法检测皮瓣Choke Ⅱ区VEGF及HIF-1α表达;3、5、7 d ELISA法测定皮瓣Choke Ⅱ区VEGF和HIF-1α蛋白含量。结果术后7 d时DMOG组皮瓣远端未见明显坏死,空白对照组和YC-1组皮瓣均发生坏死且主要位于远端;DMOG组皮瓣成活率为90.28%±1.37%,高于YC-1组84.28%±1.45%及空白对照组85.83%±1.60%,差异有统计学意义(P<0.05)。DMOG组皮瓣Choke Ⅱ区血管较多且结构清晰、完整;YC-1组、空白对照组中Choke Ⅱ区血管较少且结构紊乱。DMOG组血管数量为(25.56±1.29)条/视野,高于YC-1组(7.38±0.54)条/视野及空白对照组(14.48±0.91)条/视野,差异有统计学意义(P<0.05)。术后3、5、7 d,DMOG组皮瓣Choke Ⅱ区HIF-1α、VEGF表达均高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DMOG能促进跨区穿支皮瓣Choke Ⅱ区血管生成,加速皮瓣早期血管化进程,改善微循环和血供,降低皮瓣缺血、缺氧损伤程度,提高成活率。

二甲基乙二酰基甘氨酸对间充质干细胞外泌体生物学特性的影响

目的探讨二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)预处理对骨髓间充质干细胞(MSC)来源的外泌体(exosome)在心肌保护机制方面生物学特性的影响。方法分离及鉴定间充质干细胞来源的exosome,比较DMOG预处理后MSCs分泌的exosome(ExoDMOG)与常规处理来源的exosome(Exo)对小鼠心肌梗死后心肌保护、体外内皮细胞血管形成能力及心肌细胞抗凋亡能力的影响。结果DMOG预处理后MSCs分泌的exosome明显改善小鼠心肌梗死后心功能并延长生存期,在体外实验中拥有更佳的促血管新生能力及心肌细胞保护能力。DMOG预处理的exosome中miR-210表达水平明显上升,在体外实验中miR-210 mimic转染到受体细胞中拥有与ExoDMOG相似的生物学作用;体内实验发现,加入miR-210的抑制剂(antogomiR-210)后明显削弱了ExoDMOG对促血管新生、心肌细胞保护的作用。结论DMOG预处理后MSCs来源的exosome拥有更佳的促血管生成能力及心肌细胞保护作用,可能通过miR-210来发挥生物学作用。

二甲基乙二酰甘氨酸对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)对大鼠肺缺血-再灌注损伤(IRI)的保护作用。方法成年SD大鼠24只均分为三组。采用阻断左肺门60min、再灌注120min制备肺IRI模型(IRI组)。DMOG组予腹腔注射DMOG 60mg/kg后制备肺IRI模型,假手术组(S组)仅游离左肺门,但不阻断。处死大鼠,计算肺组织肺湿干重比(W/D),分光光度法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平,RT-PCR和Western blot检测肺组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA和蛋白表达量。结果与S组相比,IRI组肺组织W/D、MDA、MPO及TNF-α、IL-1β、IL-6、HIF-1α蛋白相对表达量均升高(P<0.05),而SOD降低(P<0.05)。与IRI组相比,DMOG组W/D、MDA、MPO及TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05),而SOD、HIF-1α蛋白相对表达量均升高(P<0.05)。结论 DMOG预处理可以减轻大鼠早期肺IRI,其调控作用主要发生在HIF-1α基因转录后的蛋白水平。

脯氨酸羟化酶抑制剂可抑制小鼠骨髓间充质干细胞凋亡(英文)

背景:脯氨酸羟化酶抑制剂能够通过稳定低氧诱导因子使其下游基因表达上调,进而对细胞凋亡发挥调控作用。目的:观察脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸对无血清培养引起的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:分离传代培养并鉴定小鼠骨髓间充质干细胞。分别应用无血清(无血清对照组)及含体积分数10%胎牛血清(正常对照组)的DMEM培养基培养小鼠骨髓间充质干细胞24,48,72h,实验组在无血清对照组的基础上给予1mmol/L的二甲基乙二酰基甘氨酸。结果与结论:实验所获的细胞通过流式细胞仪细胞表型鉴定和三系分化鉴定证实为骨髓间充质干细胞。流式细胞仪检测结果显示,与无血清对照组比较,实验组骨髓间充质干细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。说明脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸可拮抗血清剥夺引起的骨髓间充质干细胞凋亡。

DMOG促进骨髓间充质干细胞血管新生作用的研究

目的探讨在缺氧缺血清环境下,脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)促进骨髓间充质干细胞(MSCs)血管新生的作用及其机制。方法 MSCs从大鼠骨髓中分离得到,分为:常氧条件下溶剂对照组(N-DMSO)、缺氧条件下溶剂对照组(H-DMSO)、20μM DMOG加药组(D-20μM)、100μM DMOG加药组(D-100μM)及500μM DMOG加药组(D-500μM),观察以下指标:(1)通过缺氧条件下CCK-8检测DMOG在20μM、100μM及500μM剂量下对MSCs的保护作用,确定DMOG的最佳剂量;(2)通过Matrigel实验观察DMOG促进MSCs血管新生的作用;(3)通过Western blot法检测血管新生通路相关蛋白表达。结果 (1)不同浓度组DMOG对缺氧损伤MSCs的影响:N-DMSO组OD值3.25±0.05,H-DMSO组2.23±0.14,D-20μM组2.68±0.43,D-100μM组3.11±0.25,D-500μM组3.23±0.04。与N-DMSO组比较,H-DMSO组OD值降低(P<0.01),与H-DMSO组比较,D-20μM组、D-100μM组、D-500μM OD值均升高(P<0.05或0.01)。(2)不同浓度组DMOG对正常MSCs的影响:D-20μM组3.19±0.02,D-100μM组3.15±0.06,D-500μM组2.51±0.08。与N-DMSO组比较,D-500μM组OD值降低(P<0.01),D-20μM组、D-100μM组与N-DMSO组比较差异均无统计学意义(均P>0.05),提示DMOG在20μM及100μM对细胞无毒性。(3)血管新生相关蛋白的表达:与H-DMSO组相比,D-100μM组缺氧3、6及24h HIF-1α均增加(1.44±0.32 vs 7.79±0.23,2.4±0.28 vs 3.51±0.79,0.93±0.37 vs2.46±0.07,P<0.05或0.01),p AKT则在缺氧6h增加(0.47±0.15 vs 0.71±0.03,P<0.05),VEGF在缺氧6、24h均增加(0.63±0.10 vs 0.87±0.14,0.42±0.06 vs 0.70±0.06,P<0.05或0.01),以缺氧24h最为显著。pm TOR/m TOR及p ERK/ERK蛋白两组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 DMOG通过抑制HIF-1α降解及促进AKT磷酸化提高缺氧环境下MSCs的血管新生能力。

脯氨酰羟化酶抑制剂对PC12细胞SDF-1α表达的影响

目的研究脯氨酰羟化酶抑制剂对基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1 alpha,SDF-1α)表达的影响及可能的机制。方法体外培养PC12细胞,予以不同浓度氯化钴(CoCl_2)、去铁胺(DFO)、二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)处理。CCK-8法检测细胞活性,RT-PCR检测药物诱导后细胞内SDF-1αmRNA的表达,Western印迹法和ELISA法分别检测低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、SDF-1α蛋白表达。结果 CCK-8法结果显示,低浓度CoCl_2能够促进PC12细胞的增殖能力,但随着浓度增高,DFO、CoCl_2、DMOG均能使细胞增殖能力降低。RT-PCR结果显示,DFO、CoCl_2、DMOG各组细胞内SDF-1αmRNA表达减少。Western印迹法结果显示,CoCl_2、DFO和DMOG组HIF-1α表达量较对照组显著增高。ELISA法结果显示,CoCl_2、DFO、DM OG组SDF-1α水平均显著下降。结论脯氨酰羟化酶抑制剂CoCl_2、DFO和DMOG均可上调HIF-1α的表达,下调SDF-1α的表达。

脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG动员的大鼠外周血间充质干细胞的多向分化潜能研究

目的:探讨脯氨酸羟化酶抑制剂—二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)动员后大鼠外周血间充质干细胞(PB-MSCs)的多向分化潜能。方法:SD大鼠腹腔注射DMOG 40 mg·kg-1,分离扩增PB-MSCs,流式细胞术检测其表面抗原;诱导分化培养法研究PB-MSCs成骨、成软骨、成脂、成神经分化潜能。结果:PB-MSCs表面阴性表达造血系标记CD34(2.16±1.60)%、CD45(0.82±0.55)%,阳性表达CD90(98.66±0.77)%;成骨分化检测有钙结节出现,硝酸银染色发现细胞成黑色颗粒状;成软骨分化检测发现细胞核偏移,甲苯胺蓝染色细胞外基质成紫色,核成蓝色;成脂分化检测发现细胞中出现大量"脂滴",油红O染色成红色;成神经检测中,细胞出现轴突,免疫荧光蛋白检测巢蛋白(Nestin)表达阳性,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阴性。结论:DMOG动员后培养的外周血细胞为MSCs,且具有成骨、成软骨、成脂、成神经分化的潜能。

后处理减轻心肌缺血/再灌注损伤与HIF-1α-iNOS-cGMP通路激活的关系

目的 探讨后处理减轻缺血/再灌注所致的心肌损伤效应是否与低氧诱导因子-1α （HIF-1α）及其下游通路有关.方法 建立大鼠心肌缺血/再灌注及后处理模型,检测心肌组织中HIF-1α及其下游基因诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的表达情况及cGMP的含量.结果 后处理缩小缺血/再灌注所致的心梗面积[（27.30±4.16）%比 （36.00±5.29）%,P＜0.01],减少心肌细胞凋亡（Caspase 3比活性：（1.85±0.50）比（3.79±0.64）,P＜0.01）,上调心肌组织中HIF-1α表达[（5.76±0.55） 比（2.85±0.13）,P＜0.01）的同时,提高了iNOS的表达及其cGMP的含量.预先给予HIF-1α脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG使后处理心肌组织中HIF-1α表达进一步上调后,iNOS的表达及cGMP含量随之增加,同时后处理减轻心肌损伤的效应[心梗面积：（17.95±2.00）% 比 （27.30±4.16）%,P＜0.01; Caspase3比活性：0.43±0.13比1.85±0.50,P＜0.01]也进一步增强.结论 后处理减轻缺血/再灌注所致心肌损伤的效应可能与其激活心肌组织中HIF-1α-iNOS-cGMP通路有关.

缺氧诱导因子-1对大鼠缺血再灌注损伤后急性炎症应答的影响

目的观察缺氧诱导因子-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤后急性炎症应答的影响。方法健康清洁级大鼠24只,随机分为3组:二甲基乙二酰基甘氨酸(TMOG)组、对照组、假手术组,每组8只。TMOG组,在缺血与再灌注损伤模型建立前24h进行腹腔内注射20ug/gTMOG;对照组,在缺血与再灌注损伤模型建立前24h进行腹腔内注射生理盐水0.5mL;除假手术组,其余2组通过结扎冠状动脉左前降支60min,然后松开180min建立心肌缺血再灌注损伤动物模型;假手术组不结扎冠状动脉左前降支。3组大鼠均在实验终点采右心房血,分离血清,测定血清中的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)的表达水平;处死动物取出心脏,测定大鼠心肌组织的缺氧诱导因子-1的mRNA表达。结果TMOG组缺氧诱导因子-1的mRNA表达比对照组明显增多(P<0.05);TMOG组血清中的ICAM-1及IL-8的表达水平明显降低(P<0.05)。结论缺氧诱导因子-1能通过抑制ICAM、IL-8的合成,减少中性粒细胞的浸润,从而改善心肌缺血再灌注损伤,对心肌缺血再灌注损伤具有重要保护作用,为防治心肌缺血再灌注损伤提供了新的治疗思路。

低氧与低氧模拟剂对BMSCs成骨分化影响的对比研究

目的对比低氧培养与常氧条件下低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸（dimethyloxalylglycine,DMOG）对小鼠BMSCs成骨分化的影响。方法原代分离培养健康3～4周龄昆明小鼠BMSCs,采用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测,行成骨、成脂、成软骨诱导分化染色鉴定。取第3代BMSCs分为对照组（A组,常氧条件下培养）、低氧培养组（B组,1%O2低氧条件下培养）及DMOG干预组（C组,常氧条件下加入0.5 mmol/L DMOG培养）。分别于培养1、2、3、4 d采用MTT法检测BMSCs增殖情况,7、14 d检测ALP含量,24 h后采用Western blot法检测低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor,HIF-1α）蛋白表达,3、7 d采用实时荧光定量PCR检测RUNX2、Osterix基因表达,21 d行茜素红染色观察。结果 BMSCs流式细胞术表面标志鉴定示CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（-）;成骨、成脂、成软骨诱导分化后茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性。MTT法检测示,培养1 d,3组细胞增殖比较差异无统计学意义（P〉0.05）;2、3、4 d,与A组比较,C组均抑制细胞增殖,但差异无统计学意义（P〉0.05）;而B组则促进细胞增殖,差异有统计学意义（P〈0.05）。培养各时间点,B、C组ALP含量、HIF-1α蛋白相对表达量及RUNX2、Osterix基因相对表达量均显著高于A组,ALP含量及RUNX2、Osterix基因相对表达量C组高于B组,而HIF-1α蛋白相对表达量B组高于C组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。培养21 d茜素红染色示,A组可见少许结节状红染物质,B组可见中等量红染物质,而C组可见大量红染物质。结论低氧能明显促进BMSCs增殖,DMOG对BMSCs增殖无明显影响;低氧与DMOG均能促进BMSCs成骨分化,且DMOG促BMSCs成骨分化能力更强。

低氧诱导因子-1α激动剂对内皮祖细胞生物学行为的影响

目的观察低氧诱导因子-a（HIF-1a）的激动剂对兔骨髓内皮祖细胞（EPCs）的增殖和功能的生物学影响。方法以不同浓度的HIF-1a的激动剂二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）干预EPCs，检测其增殖活性、集落形成能力、一氧化氮（NO）的产量、迁移能力、衰老状态、成血管功能及相关蛋白的表达。结果DMOG能显著激活EPCs中HIF-a蛋白表达，增加细胞的活性，且成剂量依赖关系，其中浓度500μmol／L时增殖作用达到峰值。同时DMOG增加EPCs集落形成能力（P〈0．01），抑制细胞的衰老（P〈0．05），并显著提高EPCs的的迁移能力和体外成血管功能。结论HIF—1a的激活剂能显著提高内皮祖细胞增殖能力、集落形成能力、迁移能力和成血管功能。