1,9-二甲基亚甲基蓝光度法测定海参糖胺聚糖

研究了1,9-二甲基亚甲蓝与海参糖胺聚糖反应体系。显色剂pH为3.00,最佳吸收波长为520nm,加入显色剂4～6min后测定吸光度,线性范围为5～30mg/L,线性回归方程:A=0.0104c+0.0118,r=0.9996(n=3)。结合木瓜蛋白酶酶解作用可以利用该法直接测定海参体壁中糖胺聚糖。

改良1,9-二甲基亚甲基蓝法定量检测岩藻多糖

岩藻多糖是一类硫酸化多糖,主要提取自海参、褐藻等,其具有抗凝血、抗肿瘤、抗血栓等多种生物活性,在医药和食品行业具有广阔的应用前景。目前,1,9-二甲基亚甲基蓝(1,9-dirnethyl-methylene blue,DMMB)比色法是岩藻多糖定量检测的常用方法之一,但存在灵敏度差、操作繁琐、耗时长等问题。优化了DMMB法的显色液浓度、pH、显色反应时间等条件,改良后检测方法的线性范围、精密度、回收率和定量限均有显著改善。改进后DMMB法检测岩藻多糖的最佳反应条件为:DMMB溶液浓度为42.8 mg·mL^(-1)、pH 3.3,避光反应在10~15 min之间进行检测。方法学考察结果表明,改良后的DMMB比色方法提高了岩藻多糖定量检测方法的灵敏度,将检测浓度范围拓宽至0.0125~0.3000 mg·mL^(-1),这为岩藻多糖定量分析提供了快捷有效的手段,有利于岩藻多糖的开发与利用。

一种新型的大鼠血浆中硫酸软骨素含量测定方法

目的建立血液中硫酸软骨素含量测定的新方法。方法采用链霉蛋白酶E和水饱和酚处理血浆,然后采用改良的1,9-二甲基亚甲基蓝法测定血浆中硫酸软骨素的含量。结果在0~10μg/ml的范围内具有良好的线性关系,回归方程为y=0.014x+0.245,R^2=0.998。该方法的日内精密度和日间精密度的RSD均小于4%,回收率在102.0%~105.0%之间,CS提取回收率在80%以上(n=5)。结论所建方法成本低、快速、简便、灵敏,适用于血液中硫酸软骨素的含量测定。

动物源细胞外基质中糖胺聚糖物质的检测方法

背景:作为每个组织和器官中的细胞分泌产物,细胞外基质凭借其独一无二的生物学特性成为了临床应用中一种独特的再生型生物材料。糖胺聚糖作为细胞外基质中的重要活性物质之一,具有诸多优良的生物学特性。目的:整理总结近年来国内外对细胞外基质中糖胺聚糖检测方法的研究进展,并对各方法进行了对比,为优化细胞外基质糖胺聚糖检测方法提供帮助和方法参考。方法:通过输入关键词“糖胺聚糖检测、细胞外基质、determination methods of glycosaminoglycan、Animal-derived extracellular matrix”,从PubMed、知网等文献搜索引擎共搜索出2 037篇相关文献,筛选并整理63篇文献,总结出常见的糖胺聚糖检测方法。根据阅读文献时总结的思路,提出基于现有提取检测糖胺聚糖方法的改进方案,并设计对比实验验证。结果与结论:糖胺聚糖对动物源细胞外基质生物学性能起着至关重要的作用,可赋予细胞外基质材料及产品优异的生物活性与促修复功能。检测材料中糖胺聚糖含量可指导细胞外基质材料的工艺优化,因此糖胺聚糖检测方法至关重要。目前糖胺聚糖的检测方法主要有高效液相色谱法、糖醛酸分析法、乙醣胺定量分析法与二甲基亚甲基蓝检测法,以上方法均存在一定的局限性。基于已有的研究成果,针对二甲基亚甲基蓝检测法中的样本消化、糖胺聚糖提取等步骤做了改进,大幅度提升了检测结果的准确度,为其他糖胺聚糖检测方法提供了思路和参考。

一种快速测定微生物发酵体系硫酸化多糖的方法研究

目的:建立适合微生物发酵体系硫酸化多糖的测定方法。方法:以代表性的硫酸化多糖——硫酸软骨素(CS)为对象,以二甲基亚甲基蓝(DMMB)法为基础,考察了测定波长、反应时间、体系pH值、培养基组分、多糖及蛋白等对该方法的影响。用氯化钡-明胶法测定硫酸根含量,以对DMMB法进行验证。结果:DMMB法最适测定波长为525 nm,反应时间为0~5 min,体系的pH值为3.0。培养基组分及蛋白质对结果影响不显著(P>0.05)。DMMB法能测定硫酸化的糖胺聚糖肝素和硫酸软骨素,而对非硫酸化糖胺聚糖透明质酸不响应。DMMB法测定硫酸化多糖和氯化钡-明胶法测定硫酸根相关性较好(R2>0.99),且DMMB法操作简单。结论:DMMB法可用于测定微生物发酵体系硫酸化多糖,且简便快速。