QuEChERS结合大体积进样法测定水产干制品中N-二甲基亚硝胺

目的基于大体积进样(large-volume injections,LVI)系统建立QuEChERS结合气相色谱-串联三重四极杆质谱法测定水产干制品中N-二甲基亚硝胺化合物含量的分析方法。方法称取样品5 g,加5 mL水稀释后加入内标,经乙腈提取,提取液经PLS-A和ProElutQuE 15 mL Tube净化后,得到上机液。在多模式进样口(multi mode injection,MMI)中选择LVI模式进样,采用HP-INNOWAX石英毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)分离,选择多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式进行测定,内标法定量。结果N-二甲基亚硝胺在0.1~20.0 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数(r^(2))为0.9994,检出限为0.03μg/kg。在空白基质(不含N-二甲基亚硝胺化合物)样品中分别添加1、3、10μg/kg的3个水平混合标准溶液进行加标回收实验,加标回收率为85.7%~102.3%,相对标准偏差为3.6%~9.8%(n=6)。结论本法称样量少、有机试剂用量少、灵敏度高,能够满足水产干制品中N-二甲基亚硝胺含量的检测分析。

QuEChERS结合液相色谱质谱联用技术测定动物源性食品中N-二甲基亚硝胺

目的:建立高效液相色谱质谱联用技术定量检测动物源性食品中的N-二甲基亚硝胺。方法:样品前处理粉碎后经乙腈提取,低温离心除去油脂,QuEChERS净化,采用多反应监测模式测定。结果:N-二甲基亚硝胺校准曲线在2.0~200.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,相关系数为0.998 5,方法检出限和定量限分别为0.5μg·kg^(-1)和3.0μg·kg^(-1),回收率为86.8%~90.8%,相对标准偏差在2.2%~3.1%。结论:该方法取样量少,试剂消耗量少,提取和净化流程简便,定性和定量准确度好,可用于检测动源性食品中N-二甲基亚硝胺。

QuEChERS-EMR-GC/MS测定鱼肉制品中N-二甲基亚硝胺含量的方法学研究

目的:建立一种QuEChERS-EMR结合气相色谱串联质谱技术快速分析鱼肉制品中N-二甲基亚硝胺的方法。方法:样品加入内标,采用乙腈提取,经QuEChERS-EMR净化,VF-WaxMS(60 m×0.25 mm×0.25μm)色谱柱分离,在单离子检测(SIM)扫描,内标法定量。结果:N-二甲基亚硝胺在2.0~50.0 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r为0.9994,方法检出限为1.0μg/kg,方法定量限为3.3μg/kg,添加浓度水平分别为4.0μg/kg、20μg/kg、40μg/kg时,测定回收率在83.1%~104.3%之间,相对标准偏差在3.3%~6.1%之间。鱼肉基质对N-二甲基亚硝胺的基质效应为7.5%,表现为弱基质效应,可以忽略。结论:该方法操作简便,经济高效,环保,准确度高和重复性好,以及基质效应弱,适用于鱼肉制品中N-二甲基亚硝胺的测定。

肉制品中N-二甲基亚硝胺检测方法的研究进展

主要对肉制品中N-二甲基亚硝胺的前处理技术、检测方法及预防N-二甲基亚硝胺毒害作用的措施进行了综述,旨在为更准确、更高效地检测肉制品中N-二甲基亚硝胺提供理论参考。

QuEChERS-GC-MS/MS法快速检测食品中N-二甲基亚硝胺

本文建立了QuEChERS-气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法测定食品中N-二甲基亚硝胺。结果表明,N-二甲基亚硝胺在0.01~0.10μg/mL浓度范围内标准曲线线性关系良好,R^(2)=0.9990;通过加标回收试验可知,N-二甲基亚硝胺的回收率84.2%~105.8%,RSD为1.8%~7.9%;该方法定量限和检出限分别为0.5μg/kg和0.14μg/kg。将该方法用于实际食品检测,效果较好。

副干酪乳杆菌X12抑制N-二甲基亚硝胺诱导IEC-6细胞损伤作用研究

目的探究副干酪乳杆菌X12(Lactobacillus.paracasei subsp.paracasei X12)抑制N-二甲基亚硝胺(N-nltrosodimethylamine,NDMA)诱导IEC-6细胞(大鼠肠道黏膜细胞)毒性损伤作用。方法通过胃液、肠液耐受性实验、扫描电镜法分析副干酪乳杆菌X12益生功能和菌株的形态;通过CCK-8实验对副干酪乳杆菌X12抑制NDMA诱导IEC-6细胞毒性作用进行分析。结果胃肠道耐受性实验显示,副干酪乳杆菌X12可耐受胃肠液的消化,但对胆盐的耐受性略差;扫描电镜下副干酪乳杆菌X12菌体呈短而圆的杆状结构,无鞭毛;CCK-8实验结果显示,在MRS培养基中NDMA(0~80μg/mL)对副干酪乳杆菌X12的生长无显著影响(P>0.05);副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA致大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性的作用,且该作用与副干酪乳杆菌X12的剂量有关。结论副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA诱发的IEC-6细胞毒性损伤。

和枢消积丸对二甲基亚硝胺诱导的小鼠肝损伤的保护作用研究

目的:评价和枢消积丸对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。方法:连续腹腔注射DMN 10mg/kg 3次诱导小鼠肝损伤的同时灌胃给予不同剂量的和枢消积丸,检测其体重、肝指数、肝功能及肝脏组织病理学等指标。结果:小鼠在注射DMN 3次后,其TP及ALB水平显著降低,ALT、AST、TBIL、DBIL以及TBA水平显著升高,与对照组比较差异具有统计学意义。予以和枢消积丸灌胃后,和枢消积丸各剂量组均可显著性改善DMN小鼠肝细胞坏死,降低其病理评分,且可显著性降低DMN小鼠血清ALT水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。且中剂量组可降低DMN小鼠血清AST水平(P<0.01),高剂量组可降低DMN小鼠血清AST、TBIL、DBIL以及TBA水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:和枢消积丸对DMN诱导小鼠肝损伤具有较好的保护作用。

SPE/LC/MS/MS检测水中痕量二甲基亚硝胺

二甲基亚硝胺(NDMA)是水处理领域新近发现的一种氯化消毒副产物,确定了采用LC/MS/MS方法分析NDMA的色谱条件和饮用水中痕量NDMA的固相萃取浓缩方法。试验表明,采用ESI源的LC/MS/MS检测方法可有效检出小分子NDMA,通过优化梯度洗脱可获得良好的分离效果,仪器最低检测浓度可达到1μg/L;使用粉末活性炭作为固相萃取小柱吸附剂,在浓缩500倍的条件下,NDMA回收率可达81%～108%,方法检出限为2ng/L。该方法检测浓度水平低、精度高、操作简单,完全可满足水中痕量NDMA的分析要求。应用该方法测得管网末端自来水样的NDMA浓度为78.93ng/L,其浓度远高于发达国家报道的数值。

大蒜素对二甲基亚硝胺诱发的肝纤维化大鼠的保护作用

目的 研究大蒜素对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法 SD大鼠随机分为 5组 :正常对照组、模型组(给等量蒸馏水 )、大蒜素 (11、2 2 mg/ kg)组、秋水仙碱 (0 .15 g/ kg)组。二甲基亚硝胺 (DMN)诱发大鼠肝纤维化模型 ,各组在造模开始时 ig给药 ,实验共进行 4 2 d。腹主动脉取血 ,制备血清 ,进行肝功能、血脂、肝细胞病理学检查。结果 大蒜素各组均能明显降低实验性肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶 (AL T)、谷草转氨酶 (AST) (P<0 .0 5、0 .0 1)水平 ,以大蒜素 2 2 mg/ kg组作用明显 ,而秋水仙碱对肝功能没有明显的改善作用 (P>0 .0 5 )。大蒜素均能明显降低血清甘油三酯 (TG)、胆固醇 (TC)水平 ,提高血清白蛋白 (AL B)含量。病理学检查结果 ,大蒜素组肝细胞的坏死、空泡变性、出血及脂肪沉积较模型组和秋水仙碱组明显减轻 ,炎症细胞明显减少。电镜检查结果显示 ,大蒜素 11mg/ kg组肝细胞坏死、自溶较模型组明显减轻 ,大蒜素 2 2 mg/ kg组肝细胞接近正常。结论 大蒜素对 DMN所致肝损伤具有保护作用。

脂质过氧化在二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化形成过程中的作用

目的探讨脂质过氧化损伤在二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成中的作用。方法二甲基亚硝胺腹腔注射4wk诱导大鼠肝纤维化模型,连续每周动态观察染毒4wk及染毒停止后4wk大鼠血清肝功能(ALT,AST,清蛋白、总胆红素)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、SOD、GSH与GSH-PX活性、MDA含量等变化,连续同步观察大鼠肝组织炎症坏死与胶原沉积等的变化。结果模型大鼠血清肝功能明显异常,ALT自2wk开始升高,4wk达高峰,以后维持较高水平;总胆红素自2wk出现异常;清蛋白含量自1wk开始下降,5wk时为最低,4wk时肝组织HE染色见汇管区肝细胞浸润及较广泛出血坏死,胶原染色显示有宽大纤维间隔形成,至8wk时仍较明显,肝组织Hyp含量2wk时轻微增加,4wk时达高峰。而后持续较高水平,2wk 3wk时,大鼠肝组织SOD与GSH-PX活性下降、GSH含量下降、MDA含量上升,并达到高峰,相关分析发现,肝脏Hyp含量与SOD活性明显负相关,而与MDA含量之间呈显著的正相关。结论脂质过氧化显著损伤出现在肝脏胶原沉积之前,两者之间明显相关,脂质过氧化损伤是二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的重要机制。

经典退黄三方抗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的方证比较研究

目的:通过观察经典退黄三方茵陈蒿汤、茵陈五苓散和栀子柏皮汤对二甲基亚硝胺(dimeth-ylnitrosamine,DMN)诱导的大鼠肝纤维化模型的效应,探讨该模型的病机。方法:48只大鼠按体质量分层随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤组、茵陈五苓散组和栀子柏皮汤组,采用DMN腹腔注射4周的方法诱导大鼠肝纤维化模型。从造模第3周开始,各药物组在继续造模的同时予以相应的药物干预,正常对照组和模型组给以等量生理盐水。4周末结束实验,杀鼠取材,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学、羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量及肝功能变化。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织Hyp含量显著升高(P<0.01),肝功能显著异常(P<0.01)。与模型组比较,茵陈蒿汤可显著改善肝功能(P<0.05或P<0.01),显著改善肝组织病理改变,降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度(P<0.01);茵陈五苓散可显著降低血清总胆红素含量(P<0.01),对肝组织病理影响不明显;而栀子柏皮汤显著改变肝脏病理,并对肝组织Hyp含量有降低作用。结论:茵陈蒿汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果优于茵陈五苓散和栀子柏皮汤;DMN诱导的大鼠肝纤维化模型在其形成期的病机以"湿(瘀)热内蕴"为主,且湿(瘀)热并重,与茵陈蒿汤方证高度相关。

茵陈蒿汤干预二甲基亚硝胺大鼠肝硬化效应的方证病理学基础研究

目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组、茵陈蒿汤(yinchenhao Decoc-tion,YCHD)组及一贯煎(yiguanjian,YGJ)组;各组于继续造模同时给予不同方剂的煎剂经口灌胃2周,正常大鼠与模型对照组给予同量等渗盐水,4周末处死大鼠,获取血清与肝组织样品,观测肝功能、肝组织病理学、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,检测肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性;免疫印迹检测肝组织α-SMA、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、血小板衍生生长因子(platelete-derived growth factor,PDGF)以及肝脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid bindingprotein,L-FABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)表达的变化。结果与模型对照组比较,YCHD组肝功能显著改善;肝组织Hyp含量与α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05),显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,而YGJ无明显作用。肝组织TNF-α与PDGF表达在YCHD组显著减少,而YGJ组TNF-α进一步增加,PDGF无明显变化;YCHD组肝组织MDA含量与GST活性显著降低(P<0.01或P<0.05),GSH含量、L-FABP及Tf蛋白表达显著增加(P<0.05),而YGJ组仅见GSH显著增加(P<0.05)。结论茵陈蒿汤显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成;DMN大鼠肝硬化形成期的肝组织炎性病变及其过氧化损伤是茵陈蒿汤清热利湿效应的方证病理学基础。

二甲基亚硝胺对鼠体脂质过氧化的影响

目的：亚硝胺是四大食品污染物之一，大量流行病学资料显示人类的食管癌、肝癌和胃癌等与之有关，其致癌机理，尚无成熟看法，有人提出可能与自由基反应有关，为探讨亚硝胺的致癌机制及与自由基的关系。方法：本研究用不同剂量的二甲基亚硝胺观察其对鼠体脂质过氧化反应的影响。结果：二甲基亚硝胺可使大鼠血清和肝肾ＭＤＡ产生增加；血红细胞和肝肾ＳＯＤ活性下降；全血ＧＳＨ－Ｐｘ活性下降。结论：自由基和脂质过氧化反应可能是二甲基亚硝胺及其它亚硝胺致癌的途径之一。

冬虫夏草菌丝对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的作用

目的:探讨冬虫夏草菌丝对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的作用。方法:将SD大鼠分为正常对照组、模型组、冬虫夏草菌丝治疗组。采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型。每组大鼠给予相应的药物。4周后,大鼠肝脏用胶原染色观察胶原纤维沉积的变化,盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸含量,Envi-sion两步法测定肝组织Ⅳ型胶原含量和金属蛋白酶组织抑制因子2(tissueinhibitorofmetalloproteinase-2,TIMP-2)含量;酶图法检测肝组织基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinases-2,MMP-2)活性,Western印迹法检测肝组织Ⅰ型胶原。结果:模型组大鼠肝组织羟脯氨酸、Ⅳ型胶原和TIMP-2含量,I型胶原蛋白表达,较正常对照组均增加,而MMP-2含量降低;冬虫夏草菌丝治疗组大鼠肝组织羟脯氨酸、Ⅳ型胶原和TIMP-2含量,I型胶原蛋白表达较模型组均有不同程度的下降,而MMP-2含量升高。结论:冬虫夏草菌丝有显著的抗肝纤维化作用,其作用机制与促进胶原降解有关。

刺玫果阻断二甲基亚硝胺在大鼠体内合成及肝保护作用

刺玫果汁在大鼠胃内阻断二甲基亚硝胺（ＤＭＮ）的合成，其阻断率为９８．４９％，与刺玫果汁同样量的抗坏血酸阻断率为９．０４％，提示刺玫果汁中除抗坏血酸外还含有阻断ＤＭＮ合成的活性成分。给亚硝酸钠和氨基比林的大鼠血清谷──丙氨酶（ＳＧＰＴ）和山梨醇脱氢酶（ＳＤＨ）活力比正常组增高一倍，并引起肝细胞变性和坯死，在同样条件下，同时给刺玫果汁大鼠的ＳＧＰＴ和ＳＤＨ活力保持正常水平肝细胞也没受损伤，而同时给同样量的抗坏血酸组大鼠ＳＧＰＴ和ＳＤＨ活力比正常组增高一倍，并引起肝细胞变性和坏死。

复配香辛料提取物体外阻断N-二甲基亚硝胺生成的效果

在确定桂皮、柚子皮、八角和花椒4种香辛料中活性物质最佳提取条件的基础上,利用所提取的活性物质在不同浓度下进行阻断N-二甲基亚硝胺生成的体外试验,并以不同比例进行复配,根据阻断率选出最佳复配比。结果显示:当桂皮、柚子皮、八角、花椒提取液四者达最佳复配比时,复配液具有较好的阻断效果。

一种改良的二甲基亚硝胺肝纤维化模型诱导方法及其病理特点

目的探讨旨在降低死亡率的二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化改良造模方法及其病理特点。方法大鼠分为常规方法造模组(常规组)与改良方法造模组(改良组),每组再分为模型组与正常对照组,均设染毒后4周和8周共2个时间观察点。常规组造模以DMN10μL/kg大鼠体重的剂量,腹腔注射,每周连续3d,连续4周,共12次;改良组同上剂量的DMN腹腔注射,每2d一次,连续4周,共14次。观察大鼠体重、肝体比与脾体比,试剂盒测定血清肝功能,HE染色与天狼猩红染色分别观察肝组织炎症与胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量。结果2种造模方法均在造模4周时形成典型的肝纤维化,模型大鼠的体重、肝体比、脾体比、血清肝功能等均有相应的变化趋势。与常规组比较,改良组模型大鼠造模8周后死亡率显著降低,肝细胞炎症坏死稍轻,而肝窦毛细血管化明显。结论隔日1次腹腔注射较之连续3d腹腔注射DMN是一种较为稳定的肝纤维化改良造模方法,具有肝窦毛细血管化与小叶内纤维化的肝纤维化病理特征。

蓝圆鲹在腌制过程中N-二甲基亚硝胺和N-二乙基亚硝胺的变化规律

研究蓝圆鲹在不同腌制条件下N-二甲基亚硝胺(NDMA)和N-二乙基亚硝胺(NDEA)的变化规律。以蓝圆鲹在腌制过程中产生的NDMA和NDEA为指标,分别考察粗盐和精盐、温度、盐度、干腌和湿腌法对NDMA和NDEA含量变化的影响。结果表明:(1)相同盐度下,粗盐腌制的样品中NDMA和NDEA含量较精盐腌制高;(2)盐度相同时,温度越高,NDMA和NDEA的含量也越高;(3)温度相同时,样品中的NDMA和NDEA含量以盐和鱼质量比1∶5组最高,盐和鱼质量比1∶8组次之,盐和鱼质量比1∶3组最低;(4)采用干腌法腌制时,当腌制时间大于10 d时,所有试验组中NDMA和NDEA含量的峰值均消失;(5)湿腌法比干腌法样品中NDMA和NDEA含量高。因此,为减少腌制产品中NDMA和NDEA的积累,建议采用精盐低温高盐的干腌法进行腌制,并在腌制时间超过10 d NDMA和NDEA含量的峰值降低后进行食用。

茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺与四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型凋亡相关基因影响的比较研究

目的:通过"方-效-证"相结合研究,明确茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺(di methylnitrosamine,DMN)或四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)两种造模方式所致的肝硬化模型大鼠的疗效特点。方法:分别采用DMN和CCl4建立大鼠肝硬化模型,以肝纤维化已经形成并向肝硬化发展的时期(CCl4造模8周后)及其肝硬化成型后(DMN造模4周后)作为干预治疗的切入点,横向比较茵陈蒿汤在不同模型中的药效。基因芯片技术检测肝脏基因表达情况。结果:在DMN模型中,随着造模时间的延长,模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ谷氨酰转移酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)活性和总胆红素(total bilirubin,TBil)含量逐渐升高,均于4周时达到高峰(P<0.01);血清白蛋白(albumin,ALB)含量逐渐降低,4周时降至最低(P<0.01);与6周模型对照组比较,茵陈蒿汤组大鼠血清ALT、AST和GGT活性及TBil含量显著降低(P<0.05或P<0.01),血清ALB含量显著升高(P<0.05)。在CCl4模型中,茵陈蒿汤显著降低血清ALT、AST和GGT活性(P<0.05),但对血清TBil和ALB含量的改善没有显著作用。茵陈蒿汤能显著改善DMN大鼠肝脏病理改变,降低羟脯氨酸含量,但对CCl4模型则没有显著作用。基因芯片结果表明,在CCl4模型中,茵陈蒿汤显著抑制Fas、Bax和caspase-3的表达,促进Bcl-xL的表达,但不能抑制CCl4诱导的肝细胞凋亡,反而促使酪氨酸激酶受体上调了4.8倍。结论:茵陈蒿汤对DMN和CCl4两种大鼠肝硬化模型都表现出了疗效,但对DMN模型的干预尤其是降低肝组织羟脯氨酸含量、改善肝组织病理变化及调控凋亡基因等的作用显著优于CCl4模型。

丹酚酸B盐对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1及其受体蛋白表达的影响

目的:研究中药丹参的有效成分丹酚酸B盐抗肝纤维化作用的机制。方法:Wistar大鼠24只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B盐治疗组。采用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,丹酚酸B盐治疗组在造模4周后给予丹酚酸B盐治疗4周。治疗结束后,用盐酸水解法检测全部大鼠肝组织中羟脯氨酸的含量,用Western印迹法检测肝组织Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-beta1,TGF-β1)、转化生长因子β受体Ⅰ(transforminggrowthfactor-betareceptortypeⅠ,TβRⅠ)、转化生长因子β受体Ⅱ(transforminggrowthfactor-betareceptortypeⅡ,TβRⅡ)蛋白的表达。结果:模型组大鼠肝组织中羟脯氨酸的含量、Ⅰ型胶原蛋白、TGF-β1及其受体TβRⅠ和TβRⅡ蛋白的表达较正常对照组均有显著增加,而丹酚酸B盐治疗组的上述指标与模型组比较则均有不同程度的下降。结论:丹酚酸B盐具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制与抑制TGF-β1及其受体蛋白的表达有关。