二甲磺基乙烷处理生精小管体外培养模型的建立

目的建立二甲磺基乙烷(EDS)处理生精小管的体外培养模型。方法雄性SD大鼠于实验前7 d腹腔注射EDS,分离生精小管进行体外培养,分为基础处理组(加入胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠培养基添加剂ITS,即ITS组)和促黄体素(LH)处理组(加入ITS和LH,即ITS+LH组),采用Ed U标记技术检测睾丸间质干细胞增殖情况,放射免疫分析技术及3β-HSD染色检测睾酮分泌及睾丸间质干细胞的分化情况。取雄性成年小鼠睾丸并分离生精小管,分别以不同浓度的EDS处理,其后再进行分组(ITS组和ITS+LH组)处理连续培养,采用放射免疫法检测培养基上清液中睾酮的分泌情况。结果与ITS组比较,大鼠生精小管ITS+LH组睾丸间质干细胞增殖较为明显。睾酮的分泌呈现与体内睾丸间质细胞发育分化趋势一致;且该模型在LH作用下,睾酮产生量大,持续时间长,表明该模型对LH敏感。1.72 mmol/L EDS可有效杀死小鼠生精小管上的成熟睾丸间质细胞;该处理模型在经过培养后又有睾酮的产生,且ITS+LH组生精小管培养上清液中睾酮含量显著高于ITS组(P<0.01),表明EDS可以杀死成熟睾丸间质细胞,同样该模型也表现出对LH敏感。结论雄性大鼠和小鼠生精小管体外培养模型中,睾丸间质干细胞的发育分化过程与体内睾丸间质干细胞的发育分化相似,该模型是一个研究睾丸间质细胞发育分化的合适模型。

促甲状腺激素释放激素受体1和2在二甲磺酸乙烷处理大鼠睾丸中的表达及意义

目的探讨促甲状腺激素释放激素受体-1,-2(TRH-R1,TRH-R2)在二甲磺酸乙烷(EDS)处理大鼠睾丸中的表达及其在Leydig细胞中表达的意义。方法构建30只EDS处理大鼠模型,应用蛋白质免疫印迹杂交技术、免疫组织化学ABC法以及免疫荧光双标法,检测TRH-R1和TRH-R2在EDS处理后2d、7d、14d、21d和28d大鼠睾丸中的表达和定位。结果免疫印迹杂交发现,EDS处理后2d至14d,大鼠睾丸组织未见TRH-R1和TRH-R2表达,在EDS处理后21d、28d再次检测到了TRH-R1和TRH-R2的表达;免疫组织化学染色显示,TRH-R1和TRH-R2表达于EDS处理后21d、28d大鼠睾丸生精小管周围的长梭形细胞,免疫荧光双标证实此类细胞为再生的Leydig祖细胞。结论TRH-R1和TRH-R2参与了Leydig细胞的再生过程,可能对成年型Leydig细胞的发育、分化具有调节作用。