1,2-二甲磺酸乙烷预处理对雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的:探究1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)预处理是否对雄性SD大鼠缺血再灌注肾脏损伤有保护作用及其可能机制。方法:夹闭双侧肾蒂45 min,构建雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注模型;48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组(blank)、假手术组(sham)、肾脏缺血再灌注组(I/R)、EDS预处理+肾缺血再灌注组(EDS+I/R)、EDS预处理+睾酮+肾缺血再灌注组(EDS+TST+I/R)和阉割+肾缺血再灌注组(Cast+I/R)。术前1 h及再灌注后24 h采血检测血清黄体生成素、睾酮、血肌酐、血尿素氮以及尿液肾损伤分子1(KIM-1)水平;取肾脏组织,检测TNF-α水平、Fas mRNA与caspase-3蛋白表达情况。结果:(1)EDS+I/R与Cast+I/R组比较,血肌酐和尿素氮无显著差异(P>0.05),但KIM-1水平却低于Cast+I/R组(P<0.05),2组血肌酐、血尿素氮和KIM-1均高于另外3组(P<0.05)。(2)与术前1 h相比,再灌注术后24 h,EDS+I/R、Cast+I/R及EDS+TST+I/R组均伴睾酮及黄体生成素下降(P<0.05)。(3)EDS+I/R组TNF-α水平、Fas mRNA及caspase-3蛋白表达水平均显著低于Cast+I/R与I/R组(P<0.05)。结论:EDS预处理可大幅降低血清睾酮水平,从而减轻雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与TNF-α介导的Fas/Fas L通路有关。

二甲磺酸乙烷对大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用

目的:评价细胞毒性药物二甲磺酸乙烷对新生大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用效应及安全使用剂量。方法:选取出生后3 d的雄性SD幼鼠共40只,分为对照组(二甲基亚砜溶剂组)、二甲磺酸乙烷75 mg/kg组、二甲磺酸乙烷100 mg/kg组和二甲磺酸乙烷125 mg/kg组,每组10只。予腹腔内注射不同实验剂量的二甲磺酸乙烷,注射后4 d分别处死幼鼠;测量动物体重及睾丸重量,放射免疫法检测血清中睾酮水平,睾丸组织冰冻切片行3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)染色,实时荧光定量PCR技术及Western blot技术检测睾丸组织中Leydig细胞相关特异基因及蛋白的表达水平。结果:药物注射后4 d,与对照组相比较,在血清睾酮水平方面[(0.542±0.117)μg/L,(0.124±0.021)μg/L,(0.113±0.015)μg/L,vs.(0.834±0.172)μg/L,P<0.05],75 mg/kg剂量组轻度下降,而100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组则明显降低;睾丸组织3β-HSD染色显示:75 mg/kg剂量组仍可见少量的3β-HSD染色呈阳性的胚胎型Leydig细胞(fetal leydig cell,FLC),100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组无3β-HSD染色呈阳性的FLC存在,但125 mg/kg剂量组睾丸曲细精管细胞排列严重紊乱;RT-PCR及Western blot检测显示:100 mg/kg剂量组睾丸组织Hsd3b1和Cyp17a1的mRNA表达水平及其相应蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。结论:二甲磺酸乙烷能够特异性地破坏新生雄性SD大鼠睾丸组织中的胚胎型Leydig细胞,腹腔注射100 mg/kg二甲磺酸乙烷可建立起稳定、可靠的大鼠睾丸去胚胎型Leydig细胞模型。

二甲磺酸乙烷对成年大鼠精囊组织形态结构的影响

目的:研究二甲磺酸乙烷(EDS)注射对大鼠精囊不同组织结构体积的影响。方法:27只约90日龄雄性SD大鼠随机分成2组,对照组(n=14)一次性腹腔内注射生理盐水,EDS组(n=13)一次性腹腔内注射EDS75 mg/kg体重;7 d和12 d后取一侧精囊,制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,用体视学方法估计精囊内各种结构的总体积。结果:EDS几乎完全破坏睾丸内的Leydig细胞,导致急剧睾酮缺乏。与7 d对照组(n=7)相比,7 d EDS组(n=6)精囊(包括附着在精囊上的凝固腺)的体积减少53%[(138.2±12.9)mm3vs(64.9±3.6)mm3,P<0.05],但该体积在7 d EDS组和12 d EDS组(n=7)之间无显著差异[(64.9±3.6)mm3vs(55.4±7.7)mm3,P>0.05]。与12 d对照组(n=7)相比,12 d EDS组腺腔、腺上皮、平滑肌层和外膜的总体积分别显著减少97%、80%、58%和67%。结论:EDS处理导致大鼠精囊腺腔、腺上皮、平滑肌层和外膜结构的严重萎缩。

二甲磺酸乙烷对大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的影响

本文应用组织学和免疫组织化学方法,观察了二甲磺酸乙烷单次腹腔注射(75 mg/kg 体重)对大鼠下丘脑、垂体和睾丸的影响。用药后3天,睾丸间质细胞消失,部分垂体 LH 细胞增大或免疫反应性减弱,而下丘脑 GnRH 系统无显著变化。用药后7天,生精上皮明显退变,垂体 LH 细胞染色强度普遍下降,下丘脑中 GnRH 免疫反应性神经元数目、正中隆起 GnRH 纤维和终末的密度及染色强度均明显降低。睾酮替代治疗使睾丸晚期精子细胞增加,垂体和下丘脑上述改变恢复。结果提示:1.二甲磺酸乙烷引起的精子发生障碍继发于间质细胞破坏、睾酮分泌停止;2.下丘脑GnRH 系统和垂体 LH 细胞的相应激素释放增加;3.睾酮负反馈作用解除是下丘脑-垂体轴分泌活性增强的主要因素;4.二甲磺酸乙烷为研究下丘脑-垂体-睾丸轴及睾丸内局部调节,提供了有用的实验手段。

二甲磺酸乙烷对成年大鼠睾丸间质不同时间点细胞类固醇合成酶的影响

目的研究二甲磺酸乙烷(EDS)注射对雄性大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶表达的影响,并进一步了解EDS对大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶可能的调节机制。方法将25只90 d雄性SD大鼠随机分为两组,对照组(0 d,n=5)一次性腹腔内注射生理盐水,EDS组(n=20)一次性腹腔内注射EDS 70 mg/kg体重。EDS组注射后7、21、35、90 d后取血清和睾丸组织,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清及睾丸中的睾酮水平,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹方法(Western blot)分别检测睾酮合成相关基因类固醇急性调节蛋白(St AR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶1型(3β-HSD1)、P45017α-羟化酶1(P450c17a1)、17β-羟基类固醇脱氢酶3型(17β-HSD3)m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,EDS处理7 d后,睾丸内的睾丸间质细胞几乎完全被破坏,导致睾酮水平急剧下降(P<0.01),睾酮合成相关酶St AR、3βHSD、P450scc、P450c17、17β-HSD3的m RNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.01),而处理21、35 d后,上述相关酶m RNA及蛋白表达水平均有所回升(P<0.01或P<0.05),处理90 d后,上述相关酶基因及蛋白的表达水平已经基本上恢复到与对照组相近的水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EDS能够特异性地破坏雄性SD大鼠睾丸组织中的睾丸间质细胞,EDS的此种效应对研究睾丸间质细胞缺失下睾丸功能的变化进而研究精子发生的内分泌调控均有较大意义。

EDS诱导小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡中NDRG2的表达及意义

目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL EDS的培养基刺激TM3细胞,以Western blot、Real-time PCR、流式细胞术等方法检测TM3细胞凋亡及NDRG2的表达变化。结果随EDS浓度增高,诱导小鼠睾丸间质细胞发生凋亡的比率升高,并且在EDS诱导的小鼠睾丸间质细胞中,NDRG2的表达较对照组呈现剂量依赖性增高。结论 NDRG2可能参与到睾丸间质细胞的凋亡。