2D-DIGE-HPLC-nESIMS/MS对2,4-二硝基苯磺酸损伤HaCaT细胞差异蛋白质的鉴定

采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3。凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain)。DeCyder定量分析软件在每块凝胶上平均检测到1 200个以上蛋白斑点,每块胶上都匹配得到的相同蛋白质斑点有846个。其中有7个斑点丰度变化在50%以上,统计学意义显著(P值小于0.05)。利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI MS/MS)成功鉴定5个表达上调的斑点分别为X染色体开放阅读框26(Cxorf26)、人辅分子伴侣23(PTGES3)、钙调蛋白(CALM3)、肌球蛋白轻链6(MYL6)和断裂点丛集区蛋白1(BANF1);2个表达下调蛋白斑点被鉴定为转录延伸因子B肽链2(TCEB2)和核糖体蛋白L23(RPL23)。除MYL6被报道与皮肤疾病相关外,其它蛋白与皮肤病变的关系有待研究。该研究得到的7个差异表达蛋白为DNBS类化学致癌物职业接触者皮肤病变研究提供了有价值的线索。

相转移催化合成2，4－二硝基苯磺酸钠

本文以ＰＥＧ作相转移催化剂，在碱性水溶液中，以亚硫酸钠为磺化剂，对２，４－二硝基氯苯进行磺化，收率达８７％，与目前广泛采用的氧化镁催化磺化法相比，提高收率４０％左右。

2,4-二硝基苯磺酸催化加氢工艺研究

本文以2,4-二硝基苯磺酸为原料,经催化加氢合成了2,4-二氨基苯磺酸。通过正交实验考察了不同的反应浓度、反应温度、不同的氢气压力对还原反应纯度的影响。考察了不同的反应浓度对还原反应收率的影响。试验确定的最佳工艺条件是:水和硝基物的体积质量比为8∶1,反应温度在85～90℃,氢气压力0.8～1.0MPa,还原收率可以达到98.2%,纯度在99.5%以上。

中波紫外线与化学致癌物诱导下HaCaT细胞的蛋白表达应答

对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激,利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术,对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了鉴定.有65个蛋白质点发生了明显表达差异(P<0.05),与UVB或DNBS单独处理细胞相比,有41个蛋白点表现为UVB和DNBS的正协同效应,13个蛋白点表现为负协同效应,5个蛋白点与UVB单独处理相近,6个蛋白点与DNBS单独处理相近.HPLC-nESI-MS/MS从65个差异表达蛋白质点中共鉴定出60种单一(Unique)蛋白.采用生物信息学方法对这些鉴定蛋白所涉及的分子功能、参与的生物学过程及信号通路进行了系统分析.实验得到了与紫外辐射和化学诱导损伤的直接相关蛋白,有助于研究不同环境条件下皮肤癌的形成及皮肤疾病的有效防护与治疗.

溃疡性结肠炎大鼠中缝隙连接蛋白的表达及分布

目的分析缝隙连接蛋白(Cxs)在二硝基苯磺酸(DNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型中的表达和分布差异,探究缝隙连接蛋白在UC中的可能作用机制。方法选取30只雄性SD大鼠,随机分为对照组和DNBS诱导的UC组,通过免疫荧光检测对照组和UC组中Cx32和Cx43蛋白的表达和分布的差异。通过实时定量PCR,Western blot检测对照组和UC组中的Cx32和Cx43蛋白和mRNA表达的差异。结果UC组大鼠中的Cx32和Cx43 mRNA相对表达量分别高于对照组的2.3倍和3.4倍,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫荧光显示UC组大鼠中Cx32和Cx43的平均荧光密度分别为115.2±4.6、104.6±7.2,高于对照组的106.3±5.7、59.5±4.8,但仅Cx43的表达差异有显著统计学意义(P<0.01);UC组大鼠中Cx32和Cx43分布于细胞膜和细胞核并显著向核转移;Western blot结果显示,UC组大鼠中Cx43蛋白表达量较对照组升高1.6倍,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论DNBS诱导的UC大鼠模型中,缝隙连接蛋白参与炎症过程,尤其是Cx43在UC的疾病过程中可能具有重要的作用。