高效液相色谱法测定药品中的二硫苏糖醇和氧化型二硫苏糖醇

建立了高效液相色谱法同时测定药品中二硫苏糖醇(DTT)和氧化型二硫苏糖醇(DTTox)含量。采用Waters X-Bridge C18柱(250×4.6mm,5μm)分离,流动相为体积比为30∶70的甲醇-水(含0.02%三氟乙酸),检测波长为210nm。结果表明,DTT和DTTox在选定质量浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.999),DTT和DTTox的检出限(S/N=3)为0.02μg/mL,定量限(S/N=10)为0.07μg/mL。平均加标回收率分别为99.32%、99.49%,相对标准偏差分别为2.34%、2.23%。该方法简单、准确,灵敏度高,重复性好,适用于药品中DTT和DTTox的检测。

二硫苏糖醇对小鼠运动耐力、肝组织自由基代谢、肝糖原含量及血清GPT活性影响研究

研究了二硫苏糖醇(DTT)对小鼠运动能力的影响,并以牛磺酸(Tau)和维生素C作阳性对照.结果表明,与牛磺酸组和维生素C组比较,服DTT组小鼠的游泳时间明显延长(P<0.05);小鼠游泳力竭即刻肝细胞MDA含量明显降低(P<0.05),血清GPT活性下降幅度比牛磺酸组和维生素C组大;肝组织SOD活性升高幅度大于牛磺酸组,小于维生素C组.这说明含有双羟基双巯基的二硫苏糖醇是一种有效的自由基清除剂,可减少运动后因脂质过氧化而产生的内源性自由基对机体的损伤,保护细胞膜的完整性,具有增强抗氧化酶活力和提高小鼠运动能力的作用.

一种简单快速检测汞离子的1,4-二硫苏糖醇膜修饰金平板电极

将1，4-二硫苏糖醇（DTT）自组装在100nm厚的平整金膜表面，形成DTT膜修饰金平板电极（GPE），构建了一种新颖的简单、快速测定汞离子的选择性电极分析方法．通过电化学交流阻抗和循环伏安法探讨了该电极的响应原理，即固定在Au表面的DTT通过另一端的巯基与汞离子发生强配位作用而吸附结合带正电荷的汞离子，引起电极表面膜电位的变化，从而选择性地识别汞离子．实验结果表明，该电极在pH=6．0的Tris-HCl缓冲溶液中对汞离子有良好的电位响应性能，其线性范围为1．0×10^-8～1．0×10^-3mol／L，能斯特响应斜率为（29．62±0．2）mv／-pc（25qC），检出限为5．1×10^-9mol／L．该汞离子检测电极的响应时间仅为20s，且有较好的重现性和稳定性．通过测定各种离子的选择性系数，发现Cu2＋，Fe2＋，Na＋，K＋，Mg2＋，Ba2＋，Ca2＋，Zn2＋，Sn2＋，Pb2＋，Ag＋，Al3＋，Fe3＋，Ni2＋，N02-，IO3-，BrO3-和ClO3等离子不干扰该电极对汞离子的检测．此外，将该电极用于实际水样中微量汞离子含量的测定，结果与双硫腙分光光度方法一致，且回收率为98．20％～101．75％．

二硫苏糖醇处理导致大豆叶片两光系统间激发能分配失衡

通过叶绿素荧光技术研究了二硫苏糖醇 ( 1 ,4 dithiothreitol,DTT)对大豆叶片光系统I(PSI)和光系统Ⅱ (PSⅡ )间激发能分配的影响。结果显示 :DTT处理没有影响叶片最大光化学效率 (Fv/Fm) ,但光下叶绿素荧光降低比率 (Rfd)下降 ;强光下 ,DTT处理叶片PSⅡ开放反应中心激发能捕获效率 (Fv′/Fm′)比对照高 3 0 %～ 40 % ;分配给PSⅠ的激发能比对照叶片低约 3 0 % ,分配给PSⅡ的激发能比对照叶片高 2 0 %左右 ,激发能分配严重偏离平衡状态 ;DTT处理叶片PSⅡ的激发能压力 ( 1 -qP)较对照高 ,但非光化学猝灭(qN)明显比对照低 ;进一步的实验揭示DTT的引入抑制了玉米黄质 (Z)的生成和状态转换 (qT)。据此 ,推测DTT可能通过抑制天线色素的调节能力导致两光系统间激发能分配失衡。

二硫苏糖醇诱导Eca109细胞凋亡及P38磷酸化检测

目的:检测二硫苏糖醇(DTT)诱导Eca109细胞凋亡及磷酸化P38(PP38)水平。方法:取对数生长期Eca109细胞分为3组:2mmol/L DTT处理组、PP38抑制剂SB203580孵育细胞2h后再加DTT处理组及对照组。应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用免疫组织化学技术检测P38的磷酸化水平。结果:DTT组、SB203580+DTT组及对照组的细胞凋亡率分别为16.8%、7.8%和3.1%。DTT组和DTT+SB203580组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.01);与DTT组相比,SB203580+DTT组凋亡率下降(P<0.01)。DTT组PP38水平高于对照组(P<0.01)。结论:DTT可诱导人食管癌Eca109细胞凋亡,P38磷酸化起促进凋亡的作用。

二硫苏糖醇对大鼠硒性白内障的抑制作用

目的:探讨自行配制的二硫苏糖醇(DTT)滴眼液对SD大鼠硒性白内障(模拟老年性白内障)的抑制作用。方法:对出生后12d的SD乳鼠(约25g)行皮下注射Na_2SeO_3(0.2ml/次,隔天注射1次,共计3次,累计剂量约210μg),注射开始后6d,将发生硒性白内障大鼠左眼设为对照组,右眼作药物干预组,滴眼4次/d(分别滴入生理盐水及25mmol/L的DTT),每次1滴,持续用药3周;定时对大鼠双眼散瞳作裂隙灯检查,以游标尺测量大鼠眼晶状体核性斑块最大直径变化。另取硒性白内障乳鼠分别设为DTT(n=89)、吡诺克辛(PDE,n=22)及吡诺克辛钠(PSED,n=24)干预组及生理盐水对照组(n=45),分别使用25mmol/LDTT、日本产吡诺克辛滴眼液、国产吡诺克辛钠滴眼液。滴眼4次/d(同组乳鼠左、右眼滴相同的药物或生理盐水),每次每只眼1滴(约40μl),持续用药3周。定时散瞳后,用裂隙灯检查大鼠双眼皮质病变、混浊程度。结果:(1)DTT滴眼液可以明显抑制白内障大鼠晶状体核性混浊斑块的发展;(2)DTT滴眼液可以有效降低白内障大鼠晶状体伴发皮质混浊的发生率;(3)DTT滴眼液抗硒性白内障晶状体混浊的效果优于其他临床常用的抗老年性白内障药物PDE和PSED。结论:DTT滴眼液对SD大鼠硒性白内障具有良好的抑制作用。

采用二硫苏糖醇消除抗CD38单抗干扰血型血清学检测1例

目的探讨采用二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)消除抗CD38单抗对于多发性骨髓瘤患者血型血清学检测干扰的方法。方法对1例采用抗CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者常规进行血型血清学检测,包括直接抗球蛋白试验和不规则抗体筛选等;进一步采用放散技术、酶技术及DTT处理红细胞后进行不规则抗体鉴定。结果该患者直接抗球蛋白试验阴性,不规则抗体筛选呈现出泛反应特征;使用DTT处理细胞后,可消除泛反应化。结论抗CD38单抗的治疗会造成血型血清学检测干扰现象,DTT可有效地消除干扰,从而有效保障患者输血安全。

低浓度二硫苏糖醇去除CD38单抗干扰输血相容性检测的评估

目的:探讨低浓度二硫苏糖醇(DTT)去除CD38单抗对输血相容性检测干扰的有效性和安全性,制定合理的临床输血策略。方法:按照标准方法进行血型表型、直接抗人球蛋白试验及抗体筛查,分别用0.2、0.1、0.05、0.02、0.01和0.005 mol/L的DTT处理抗筛细胞及供者红细胞,用抗人球蛋白卡式法对CD38单抗治疗后血清进行抗体筛查及交叉配血。结果:DTT 0.01 mol/L 37℃处理检测红细胞30 min可以去除CD38单抗对抗体筛查及交叉配血的影响,同时保留其对抗-K、抗-LW、抗-JMH、抗-Lub、抗-e、抗-Dia及抗-Jka同种抗体检测的有效性。10例患者红细胞输注后均未发生急性或迟发性溶血性输血反应,血常规检测显示红细胞输注有效。结论:0.01 mol/L DTT在去除CD38单抗对输血相容性检测干扰的同时保留了对大多数同种抗体的检测能力,该方法安全有效。

二硫苏糖醇对紫外线诱导大鼠白内障的保护作用(英文)

目的:探讨外源性给予二硫苏糖醇(DTT)对于紫外线诱导SD大鼠白内障的保护作用。方法:32只6周龄SD大鼠(约180g)分为4组:第一组为模型组,每天辐射300nm紫外线B(ultraviolet B)15min,辐射强度1×103μW/cm2,连续辐射7d;第二组为实验组,辐射UVB联合每天腹腔注射DTT溶液1mL(腹腔注射于辐射30min前);第三组实验组同第二组外,7d辐射结束后继续用DTT1wk;第四组为空白对照组,不辐射UV-B,每天腹腔注射等量的生理盐水。结果:腹腔注射DTT可以明显减少紫外线辐射引起的脂质过氧化,提高过氧化物酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量,并且可以降低晶状体中钙离子(Ca2+)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结论:二硫苏糖醇对紫外线诱导白内障SD大鼠具有良好的抑制作用。

不同浓度二硫苏糖醇对急性运动小鼠心、肝和肾组织脂质过氧化水平的影响

探讨了不同浓度二硫苏糖醇(DTT)对急、性运动小鼠心、肝、肾组织脂质过氧化水平的影响.108只昆明种系雄性小鼠随机分为安静对照组(A)、运动对照组(B)、运动加五种不同浓度DTT组(分别为C、D、E、F、G)建立急性游泳训练模型.结果表明,运动后即刻,随着DTT浓度的升高,心和肾组织中MDA含量呈现出先上升后下降的趋势.肝组织中呈现出先上升后下降又突然增高的趋势.但运动后即刻F组心、肝、肾组织中MDA含量均低于A、B组.24h恢复后,随着DTT浓度的升高,心、肝、肾组织中MDA含量都呈现出先下降后上升的趋势.不同浓度DTT均具有抗脂质过氧化作用,但不同浓度DTT对不同组织在不同时期的脂质过氧化水平影响不同.

二硫苏糖醇对刺参卵母细胞体外成熟的影响

用海星鞘神经提取液和二硫苏糖醇对刺参卵母细胞进行了体外人工促熟研究。结果显示,二硫苏糖醇对刺参卵母细胞具有明显的促熟作用。刺参卵母细胞包被在滤泡中发育,卵母细胞通过动物极的卵突起连接到单层细胞构成滤泡膜上,充分发育的卵母细胞处于生发泡期,染色质凝集在核仁周围,处于生发泡期的卵母细胞在海水中不会自发成熟。用二硫苏糖醇处理充分发育的卵母细胞20min,卵母细胞的生发泡开始移动,并锚定在卵母细胞的动物极,继而出现生发泡破裂。此后,减数分裂重新启动,第一、二极体分别排出。但海星鞘神经提取液对刺参卵母细胞没有促熟作用。实验表明,二硫苏糖醇浓度在10-5～10-1mol/L范围内,均可促使刺参卵母细胞发生生发泡破裂,10-2mol/L时诱导卵母细胞成熟率可达90%以上。

二硫苏糖醇对流式细胞术分析诱导痰液中淋巴细胞亚群的影响

目的探讨二硫苏糖醇(DTT)对流式细胞术测定诱导痰液中淋巴细胞亚群结果的影响。方法将15名健康人的诱导痰各分为2份,1份按DTT液化诱导痰液程序处理(DTT组),另1份在实行该处理程序后,再用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次(DTT+PBS组),以除去残留DTT。采用流式细胞术分析2组样本中的淋巴细胞亚群百分率及平均荧光强度(MFI)。结果与DTT+PBS组比较,DTT组CD3+CD4+细胞和自然杀伤(NK)细胞百分率明显增加(P<0.05、P<0.01),CD3+CD8+和CD3-CD19+细胞百分率明显减少(P均<0.01);CD3+CD8+和CD3-CD19+细胞MFI均明显减弱(P<0.01、P<0.05),NK细胞MFI明显增强(P<0.05)。2组CD3+细胞百分率及CD3+、CD3+CD4+细胞MFI差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 DTT对诱导痰液中淋巴细胞亚群百分率及MFI检测结果产生影响,诱导痰经DTT液化后应增加PBS洗涤步骤,以去除残留的DTT,降低DTT前处理对结果的影响。

二硫苏糖醇代替2巯基乙醇在IgG抗A(B)测定中的应用

目的:评价用二硫苏糖醇代替2巯基乙醇灭活IgM抗体在IgG抗A(B)测定中的应用。方法:80份O型孕妇血清分别经2巯基乙醇和二硫苏糖醇灭活处理,然后进行IgG抗A(B)效价测定。结果:经2巯基乙醇处理的阳性检出率44.7%;经二硫苏糖醇处理的阳性检出率45.9%。经χ2检验,两种方法的检测结果差异无显著性(χ2=0.024,P=0.052 4)。结论:用二硫苏糖醇代替2巯基乙醇灭活处理血清具有无恶臭味、反应快速等优点,可提高工作效率,并减少环境污染,值得推广。

二硫苏糖醇在奶粉含硫氨基酸检测中的应用

目的建立一种在前处理过程中使用二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,反相高效液相色谱法检测奶粉中含硫氨基酸的方法。方法奶粉经酸法水解后,加入二硫苏糖醇对水解液进行还原处理,用反相高效液相色谱法检测奶粉中含硫氨基酸,对还原条件、色谱分离条件进行优化,确定最佳检测条件。结果蛋氨酸(Met)、胱氨酸[(Cys)2]、半胱氨酸(Cys)检测限分别为0.7μmol/L、0.3μmol/L、0.5μmol/L,定量检测范围均为10～750μmol/L,相关系数分别为0.9998、0.9999、0.9991。最佳DTT作用条件为向1mL水解液中加入100μL0.1mol/LDTT溶液,室温反应1h。测得奶粉中Met、(Cys)2含量分别为0.37g/100g、0.14g/100g,加标回收率均在82%～87%之间,相对标准偏差(RSD)≤1.5%。结论在前处理过程中使用适量DTT做还原剂,用反向高效液相色谱法可准确检测奶粉中含硫氨基酸的含量。

利用二硫苏糖醇夹层抑制锂硫电池的穿梭效应

为了抑制锂硫电池的穿梭效应,改善锂硫电池的电化学性能,尝试以二硫苏糖醇(DTT)为剪切剂,对高阶多硫化物进行剪切以阻止其溶解。将二硫苏糖醇(DTT)掺入多壁碳纳米管(MWCNTs)纸中,制得DTT夹层,将该DTT夹层置于锂硫扣式半电池正极片和隔膜之间,正极片的载硫面密度约为2 mg/cm2。SEM观察结果证实DTT均匀分散在MWCNTs纸的表面和空隙中。电化学测试结果表明引入DTT夹层结构的锂硫电池在0.05C倍率首次放电比容量达到1 288 mAh/g,首次库伦效率接近100%,在0.5C、2C、4C倍率下充放电时的比容量分别达到650mAh/g、600mAh/g、410mAh/g。DTT夹层结构的引入可有效剪切高阶多硫化物并阻止其迁移到锂负极,从而抑制穿梭效应,改善锂硫电池的循环稳定性和库伦效率。

二硫苏糖醇/多壁碳纳米管阻隔层抑制锂硫电池的穿梭效应

二硫苏糖醇(DTT)作为剪切剂,对高阶多硫化物进行剪切阻止其溶解,抑制穿梭效应的产生。以二硫苏糖醇(DTT)和多壁碳纳米管(MWCNTs)复合薄膜作为锂硫电池正极片与隔膜之间的阻隔层,抑制多硫化物的溶解和扩散,阻止穿梭效应,减小活性物质的损失,提高锂硫电池的容量和循环性能。利用透射电子显微镜(TEM)和扫描电镜(SEM)等进行结构和性能的表征。电化学测试结果表明,含DTT/MWCNTs阻隔层的锂硫电池在0.2C倍率首次放电比容量达到1674mAh/g,活性物质的利用率达到99.9%。在1C充放电300次循环后,容量依然保持在780mAh/g,是首次放电容量1094mAh/g的71.3%,且库伦效率保持在95.3%以上。在5C和10C倍率下充放电,电池比容量分别达到597和214mAh/g。

血型物质与二硫苏糖醇中和IgM抗体后血浆IgG抗体效价比较

目的探讨2种方法中和孕妇血液中血型完全抗体后,免疫性抗-A、抗-B(IgG)效价比较。方法选择孕妇为O型的丈夫为A型、B型,抗-A、抗-B(IgG)效价为1 024的血液标本30份,经血型物质和二硫苏糖醇(DTT)中和完全抗体后采用戴安娜卡式系统检测抗-A、抗-B(IgG)效价。结果抗-A、抗-B(IgG)效价比较,抗-A效价在>64的血型物质中和的4例,DTT中和的9例;抗-B效价在64以上的血型物质中和的5例,DTT中和的9例,血型物质中和后检测IgG抗体效价低于DTT(P<0.01)。结论血型物质和DTT中和IgM抗体的能力有差异,所以在做新生儿溶血病产前检查时应注意,只要存在免疫抗体,不管抗体效价高低均有可能引起新生儿溶血病。

血型物质与二硫苏糖醇中和IgM抗体后血浆IgG抗体效价比较

目的探讨2种方法中和孕妇血液中血型完全抗体后,免疫性抗-A、抗-B(IgG)抗体效价比较。方法选择孕妇为O型,丈夫为A型、B型,抗-A、抗-B(IgG)抗体效价为1∶4～1024)血液标本30份,经血型物质和二硫苏糖醇(DTT)中和完全抗体后采用戴安娜卡式系统检测抗-A、抗-B(IgG)抗体效价。结果血型物质和DTT此2种方法中和完全抗体后测得抗-A(IgG)抗体效价经统计学处理P【0.001,有统计学意义。结论血型物质和DTT中和IgM抗体的能力有差异,所以在做新生儿溶血病产前检查时应注意,只要存在免疫抗体,不管抗体效价高低均有可能引起新生儿溶血病。

二巯基乙醇和二硫苏糖醇检测IgG抗A(B)效价中和能力的比较

目的比较二巯基乙醇(2-Me)和二硫苏糖醇(DTT)中和IgM抗体后检测IgG抗A(B)效价的能力。方法 187份O型、RhD(+)孕妇血清分别经2-Me和DTT中和IgM抗体后,用经典抗人球蛋白法检测IgG抗A(B)效价。结果 2-Me中和IgM抗体后测得IgG抗A(B)效价的几何均数为34.198,DTT中和IgM抗体后测得IgG抗A(B)效价的几何均数为32.434,经配对t检验,两种方法检测结果差异无统计学意义(t=0.142,P>0.05)。结论用2-Me和DTT中和IgM抗体后检测IgG抗A(B)效价结果无差异。

利用HPLC测定二硫苏糖醇(DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响

利用 HPLC测定二硫苏糖醇 (DTT)对苏云金芽孢杆菌伴胞晶体降解的影响。结果表明 ,放置时间对DTT溶液的变化影响显著 ,随着 DTT放置时间的延长 ,2个峰的保留时间都随之延长。利用不同浓度的 DTT降解 Bacillusthuringiensis,伴胞晶体时 ,其检测结果都出现保留时间小于 1 5.0 0 min的 4个主峰 ,与 DTT单独添加在 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的保留时间大于 2 5.0 0 min的 2个峰明显不同 ,也比伴胞晶体单独添加到 Na2 CO3 - HCl缓冲液 1 h后检测的结果多了 1个新峰 ,并且峰高显著增加 ,这表明 DTT对晶体起到降解作用。峰 1和峰 4的保留时间与 Na2 CO3 - HCl缓冲液所测到的色谱特征峰相近 ,峰 2和峰 3为 Na2 CO3 -HCl缓冲液不具有的。在用不同浓度的 DTT在 37℃下降解 B.t.伴胞晶体 1 h后 ,立即用 HPLC进行检测的结果表明峰 2高于峰 3,峰 2的高度与 DTT的浓度成正相关 ;放置 2 4 h后所有处理中峰 2的高度都下降 ,峰 3的高度都高于峰 2 ,峰 2 (Y1 )和峰 3(Y2 )的峰高都与 DTT的浓度 (x)成指数增长 ,Y1 =1 9.1 33e0 .0 1 4 8x (R2 =0 .970 8)和 Y2 =2 9.0 62 e0 .0 1 68x(R2 =0 .9589) ;上述结论表明在 DTT的作用下 ,伴胞晶体不断地被降解 ,使得峰3不断增高 ,DTT的消耗 ,使得峰 2下降 ;随着 DTT浓度的增大 ,