光化学反应-串联质谱法鉴定细胞中不饱和卵磷脂双键的位置

以二苯甲酮(Benzophenone,BP)为光化学反应的反应物,建立了乳腺细胞中不饱和卵磷脂双键位置和双键异构体相对含量的在线光化学反应-脉冲直流电喷雾串联质谱(PB-pulsed-dc-ESI-MS/MS)的检测方法。通过三相萃取法提取细胞中的脂类,在254 nm紫外光的照射下,使不饱和卵磷脂中的CC和BP中的羰基发生特异性的环加成反应(Paternó-Bǜchi,PB反应),将反应后的PB产物通过非接触式的脉冲直流电喷雾(Pulsed directed current electrospray,pulsed-dc-ESI)方式电离,并进行低能碰撞裂解得到二级串联质谱(MS/MS),从得到的二级谱图的子离子中可以获得双键位置以及双键异构体相对含量的信息。检测了癌细胞MCF-7和正常细胞MCF-10A中8种不饱和卵磷脂中的双键位置,且对其中4种双键异构体的相对含量进行分析,发现PC 16∶0_18∶1中Δ9异构体的含量在两种细胞中差异不明显,PC 18∶0_18∶1和PC 18∶1_18∶1中Δ9异构体的含量略有差异,LPC 18∶1中Δ9异构体的含量在癌细胞和正常两种细胞中差异比较明显(56.0%±1.3%vs.71.7%±6.8%)。本方法快速简易,可用于分析双键位置及双键异构体相对含量,有望对不同细胞状态以及不同疾病状态进行鉴别。

高效液相色谱串联质谱测定蜂蜜、蜂王浆中氯霉素残留

前处理方法包括添加同位素内标氯霉素-d5和采用10%偏磷酸沉淀蜂王浆产品中的蛋白质,上清液经乙酸乙酯提取,自制硅胶柱和Oasis小柱净化.净化后的提取溶液用高效液相色谱-电喷雾电离质谱检测,多反应监测3对离子(321.0/256.9、321.0/194.0、321.0/175.8).该方法对不同基质样品的加标回收率为91%～107%;相对标准偏差小于10%;蜂蜜和蜂王浆的方法检出限分别为0.1 μg/kg和0.2 μg/kg.

电子电器产品中禁用物质检测方法(之二)——有机溴系阻燃剂质谱分析方法

本文依相关欧盟ROHS玩具,电器产品等相关要求,针对溴系阻燃剂中受限物质——多溴二苯醚建立了气相色谱-二级质谱检测方法。该方法具有低检出限,定性定量准确,稳定性高,操作容易及运行成本低等优点。

气相色谱-串联二级质谱法测定PM2.5中3种硝基多环芳烃

目的建立大气PM2.5中3种硝基多环芳烃的气相色谱-串联二级质谱测定法。方法大气PM2.5经石英滤纸采集,待测化合物用二氯甲烷-丙酮有机溶剂提取,提取液用旋转蒸发仪浓缩至1.0 ml;经中性硅胶柱净化,收集洗脱液浓缩至1.0 ml,用气相色谱-串联二级质谱法检测。结果 2-硝基荧蒽的检出限为2 ng/ml,3-硝基荧蒽、1-硝基芘的检出限为5 ng/ml;2-硝基荧蒽的最低检出浓度为1 pg/m^3,3-硝基荧蒽、1-硝基芘的最低检出浓度为3 pg/m^3(采样体积以1 500 m^3计)。3种硝基多环芳烃的加标回收率为88.5%~96.0%,相对标准偏差(RSD)为2.0%~5.2%。结论该方法操作简便、灵敏度高,适用于PM2.5中3种硝基多环芳烃的测定。

同位素稀释结合气相色谱-串联二级质谱法测定PM2.5中12种硝基多环芳烃

目的采用同位素稀释结合气相色谱-串联二级质谱技术,建立空气PM2.5中12种硝基多环芳烃检测方法。方法空气PM2.5经石英滤纸采集,剪碎后放入烧杯,加50μl同位素内标溶液,待测物分别用60 ml二氯甲烷超声提取2次,再用40 ml丙酮超声提取1次,合并提取液,提取液经旋转蒸发仪浓缩至1.0 ml;经中性硅胶柱净化,收集洗脱液再浓缩至1.0 ml,用气相色谱-串联二级质谱法测定。结果2-硝基联苯、2-硝基芴检出限均为2 ng/ml,最低检出浓度为1 pg/m^(3);5-硝基苊、3-硝基蒽的检出限均为2 ng/ml,最低检出浓度为2 pg/m^(3),其他化合物的检出限均为5 ng/ml,最低检出浓度为5 pg/m^(3)(采样体积均以1500 m^(3)计)。12种硝基多环芳烃的加标回收率为73.4%~119.6%,相对标准偏差(RSD)为1.4%~18.2%。结论该方法适用于PM2.5中12种硝基多环芳烃的测定。

湿热泄泻模型大鼠的尿液代谢组学研究

目的应用基于超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用(UPLC-Q/TOF-MS/MS)尿液代谢组学方法筛选湿热泄泻潜在代谢标志物,探讨大鼠湿热泄泻发病机制。方法采取高糖高脂(HF)+高温高湿(HH)+腹腔注射产肠毒性大肠杆菌(EC)建立大鼠湿热泄泻模型,采集大鼠造模各阶段(高糖高脂,高温高湿,攻毒)尿液样本,应用尿液代谢组学技术分析样本,多元统计分析方法分析代谢数据。结果筛选出左旋谷酰基-左旋半胱氨酸、左旋甲酰犬尿氨酸、5-羟基-N-甲酰犬尿氨酸、核黄素-5-磷酸、亚油酸、左旋色氨酸和褪黑素等7个潜在代谢标志物。结论湿热泄泻涉及色氨酸代谢、核黄素代谢与亚油酸代谢等代谢通路,表明大鼠体内出现能量、氨基酸及脂类代谢紊乱,本研究结果为揭示中(兽)医湿热泄发病机制提供了参考依据。

大豆下胚轴谷丙转氨酶酶学性质分析

大豆是一种重要的固氮农作物,在其种子萌发和初期幼苗生长过程中氨基酸代谢作用较强,表达活性较高的谷丙转氨酶(GPT)。为探明大豆下胚轴谷丙转氨酶的蛋白序列和酶学性质,以指导其在基因工程和农业生产中的应用,本研究通过对豆芽下胚轴蛋白组进行液相色谱串联二级质谱分析,确定大豆下胚轴所表达的GPT序列,利用谷氨酸和丙氨酸与茚三酮反应的显色差异测量GPT活力,并探究其酶学性质。结果显示:以茚三酮比色法测得大豆下胚轴谷丙转氨酶在35℃和pH7.0条件下对于丙酮酸的Km值为0.186 mmol·L-1,对于谷氨酸的Km值为1.05 mmol·L-1;Co2+、Mg2+和Ca2+对大豆谷丙转氨酶有激活效应,EDTA2-、尿素、Mn2+和Fe2+有抑制效应;大豆下胚轴谷丙转氨酶具有活性的温度范围为10~60℃,pH范围为4.0~8.0,最适温度为35℃,最适pH7.0。

SPE-UPLC-MS/MS测定葡萄酒中的高氯酸盐

为建立前处理简单、定量准确、灵敏度高的葡萄酒中高氯酸盐的快速测定和分析方法,本研究使用酸化甲醇提取葡萄酒样品,最终选择WAX固相萃取柱前处理净化,亲水性聚丙烯滤膜(GHP)过滤,经Phenyl-Hexyl色谱柱分离,以电喷雾离子源(ESI)在多反应监测(MRM)负离子模式下测定葡萄酒中高氯酸盐。结果表明,该方法的检测时间为12 min,检出限和定量限分别为0.15μg·L^-1和0.5μg·L^-1,在1、2、5、10和20μg·L^-1水平的加标回收率介于94.5%~105%之间,相对标准偏差(RSD)小于3.17%。该方法的建立可为葡萄酒生产企业和相关监管部门提供一定的技术支撑。

葡萄籽提取物化学成分分析及防腐效果评价

为进一步明确葡萄籽化学成分及其提取物的防腐抑菌效果,该研究以宁夏贺兰山东麓产区酿酒葡萄籽为原料,采用非靶向超高压液相色谱串联二级质谱(UPLC-MS/MS)技术分别测定葡萄籽体积分数95%乙醇总浸提物(TE)及其正丁醇萃取物(TEN)的化学成分;此外,以山梨酸为对照,探究2种葡萄籽提取物对细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和真菌(尖孢镰刀菌、黑曲霉、柑橘青霉菌)的防腐抑菌效果。结果表明,两种提取物(TE及TEN)中共鉴定出60个化学成分,包括7种酚类、7种氨基酸、6种生物碱、6种有机酸、4种黄酮等成分。除枯草芽孢杆菌以外,质量浓度为1.5 g/L的TEN样品及TE样品对其他菌株的抑菌效果均为100%;此外,质量浓度为1 g/L的TEN样品对金黄色葡萄球菌及三种真菌抑菌效果为100%。因此,TEN防腐抑菌效果较好。

LC-MS/MS法测定人血浆霉酚酸浓度及与EMIT法的相关性分析

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中霉酚酸浓度,并与传统的EMIT方法检测结果进行相关性分析,考察两种方法的准确性和可靠性。方法用乙腈沉淀蛋白处理血浆样本,以格列齐特为内标,以5 mmol·L-1醋酸铵-乙腈(50∶50,v/v)为流动相,用Diamonsil C18(2)(150 mm×4.6 mm, 5μm)为色谱柱,柱温25℃,流速0.5 mL·min-1。电喷雾离子源(ESI),负离子模式,毛细管电压4000 V,干燥气(N2)温度350℃,干燥气流速9 L·min-1,雾化器压力275 kPa,霉酚酸和格列奇特内标的碎片电压分别为140和135 V,碰撞能分别为25和12 eV,多级反应监测(MRM)质荷比为m/z 319.3→m/z 191.4(霉酚酸)和m/z 322.5→m/z 170.4(格列奇特)的碎片离子峰。收集临床上服用霉酚酸制剂的患者血浆样本249份,用建立的LC-MS/MS法测定血浆中霉酚酸浓度。用Passing-Bablok回归分析和Bland-Altman分析进行LC-MS/MS和EMIT的相关性分析,考察方法的准确性和可靠性。结果 LC-MS/MS法检测霉酚酸的标准曲线范围是0.05~10μg·mL-1。批内和批间精密度小于11.60%,提取回收率在108.87~111.42%,基质效应为90.91%~92.62%,霉酚酸在设定的各种存储条件下均稳定。用本方法检测了249份服用霉酚酸患者的血浆样本,血浓度范围为0.057~24.90μg·mL-1,平均值为3.26μg·mL-1。EMIT法检测的霉酚酸浓度范围为0.16~24.87μg·mL-1,平均值为4.72μg·mL-1,略高于LC-MS/MS法,但相关性分析显示两种方法具有良好相关性,提示两种方法的测定结果均准确可靠。结论建立的LC-MS/MS法操作简单、快速、灵敏,检测结果略低于传统的EMIT法,但二者相关性良好,提示两种方法均可用于临床上霉酚酸的血浓度监测。

建立HPLC-DAD-MS/MS指纹图谱快速分析农药隐性成分的方法

[目的]利用高效液相色谱-二级管阵列-串联质谱(HPLC-DAD-MS/MS)联用技术,建立了194种常用农药品种的标准指纹谱图库,检测农药产品中的隐性成分,对农药市场进行有效管理和评价。[方法]在离子优化的基础上,采用tMRM(动态多反应监测)模式的分析技术,建立HPLC-MS/MS标准指纹谱图库。[结果]自建了标准指纹谱图库,并对啶虫脒、三唑磷和硝磺草酮3个农药品种进行了隐性成分鉴定,共检出了吡虫啉、氧乐果、马拉硫磷、磺草酮、灭草松和烯草酮等6种隐性成分,匹配性良好。[结论]所建立的HPLC-DAD-MS/MS指纹谱图快速分析农药隐性成分的方法快速有效,特征性和专属性强,为规范农药产品质量、打击农药假冒产品提供了可靠的方法。

UPLC-MS/MS法快速分析换锦花中加兰他敏的动态积累变化

本研究以超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)为基础,建立了1种快速准确检测石蒜属植物中加兰他敏含量的方法。提取液超声波辅助提取离心后,经Waters ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱分离,以含0.1%甲酸的水溶液和乙腈为流动相进行等度洗脱,利用正离子多反应监测模式(MRM)进行分析,使分析时间大幅缩短,提高分析准确度。在0.5～100μg/m L浓度范围内线性关系良好,相关系数达0.999 9,可在3分钟以内的程序时间内得到检测结果,回收率为95.20%～98.92%,相对标准偏差为1.03%～1.75%,经方法学确认本方法准确可靠。应用此方法测得石蒜属换锦花鳞茎周年不同月份加兰他敏含量介于163.86～2 065.79μg/g干重之间,7月积累最高,加兰他敏积累与生长过程密切相关,总体表现为在休眠期积累,不同的生长时期加兰他敏在换锦花各个器官的分配变化较大。本研究揭示了换锦花加兰他敏的动态积累规律,并为研究加兰他敏的合成代谢调控提供了准确的分析手段。