黄芪甲苷联用维生素D_3对二维回转培养大鼠原代成骨细胞增殖的影响

探讨了黄芪提取物黄芪甲苷与维生素D3联用对二维回转培养大鼠原代成骨细胞增殖的影响。离体培养大鼠原代成骨细胞后,用碱性磷酸酶染色、茜素红染色等方法对细胞进行鉴定;通过细胞回转器模拟微重力效应,采用MTT、细胞计数等方法研究不同浓度配比的黄芪甲苷与维生素D3混合液对大鼠原代成骨细胞增殖的影响。结果表明,单用黄芪甲苷或维生素D3均对正常培养成骨细胞增殖具有促进作用,最佳促增殖浓度分别为1×10-7 mol·L-1和1×10-8 mol·L-1,当1×10-7 mol·L-1黄芪甲苷分别配以1×10-9 mol·L-1或1×10-8 mol·L-1维生素D3时,其相对增殖率可达200%和196%;不同浓度配比的黄芪甲苷与维生素D3混合液对模拟微重力下二维回转培养成骨细胞的增殖有显著促进作用,其最佳促增殖浓度为1×10-7 mol·L-1黄芪甲苷配以1×10-9 mol·L-1维生素D3。

二维回转培养对MLO-Y4骨样细胞PKD2表达定位及胞内钙信号的影响

目的:PKD2(polycystin2,多囊肾病蛋白2)能够在细胞膜上形成无选择性的阳离子通道,在肾上皮细胞中PKD2与初级纤毛共定位,通过改变胞内的钙信号过程参与细胞对力学刺激的响应。本实验通过二维回转培养来模拟失重效应,旨在探讨二维回转培养对MLO-Y4骨样细胞PKD2表达定位,及胞内钙信号的影响。初步了解PKD2在小鼠骨样细胞MLO-Y4响应力学刺激过程中起的作用。方法:采用二维回转培养骨样细胞MLO-Y4,用RT-PCR和western blotting检测PKD2的表达,用荧光共聚焦显微镜检测细胞中PKD2与初级纤毛的定位及细胞内钙离子含量。结果:与对照组相比,在二维回转培养后,骨样细胞MLO-Y4的PKD2表达在mRNA和蛋白水平都有明显的下降,PKD2、PKD1(polycystin1,多囊肾病蛋白1)和乙酰化的α-tubulin共定位,同时二维回转培养降低了细胞内钙离子含量。结论:在二维回转培养下,PKD2可能通过调节自身表达来改变细胞膜上PKD通道的数目和开放情况来影响细胞内钙离子含量,参与骨细胞对细胞外应力的感受过程,其详细机制还有待进一步实验研究。这将对探讨骨细胞响应力学刺激的具体机制提供重要的理论依据。