基于薄层色谱-生物自显影-MSn法表征枸骨叶中的脂肪酶抑制活性成分

为寻找枸骨叶的降脂减肥活性成分,本文采用薄层色谱-生物自显影法,筛选其具有脂肪酶抑制活性的成分,再通过原位TLC-EFISI-MSn技术,对具有脂肪酶抑制活性的成分进行快速结构解析。通过对10个具有脂肪酶抑制活性的薄层色谱-生物自显影斑点进行快速解析,初步鉴定出15个可能的成分,包括9个熊果烷型三萜、1个齐墩果烷型三萜,以及5个18,19-裂环型三萜,其中有7个活性斑点所包含的12个化合物通过对照品比对得到验证。该方法能够快速从枸骨叶中筛选、表征出具有脂肪酶抑制活性成分,从而为确定枸骨叶活性成分的筛选和鉴定提供依据。

应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性

目的采用薄层色谱-生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。方法用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和传统显色剂显色，拍摄图像，采用模拟扫描，获得各抗氧化成分的峰面积。结果以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力，结果表明浙江天台产乌药（94340）、四川凉山产厚朴（175647）和收集于上海的紫苏子（153206）清除DPPH自由基能力最强。以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性，表明去甲异波尔定（43．8％～66．0％）、厚朴酚与和厚朴酚（73．2％～93．2％）、木犀草素与芹菜素及成分“U”（47．6％～68．0％）分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。

二维薄层色谱技术的研究进展

二维薄层色谱是一种新型的薄层色谱技术,主要包括单固定相二维薄层色谱、双固定相二维薄层色谱和二维移植薄层色谱。本文通过查阅国内外文献,对不同二维薄层色谱技术的操作方法及特点、二维薄层色谱图像处理、与其他技术联用的进展进行了介绍,并对其未来发展提出了展望。二维薄层在保留了一维色谱的所有优点的基础上,大大扩充了峰容量,提高了分离效果,可为中药质量控制的发展研究提供新的思路。

二维薄层色谱法在苦参生物碱成分分析中的应用

建立可用于苦参的二维薄层色谱方法。采用微波加热的方法快速获得苦参提取液,在硅胶薄层板上,以氯仿和甲醇(4:1,v/v)为第一维展开剂,以乙腈和水(9:1,v/v)为第二维展开剂,分别对苦参提取液、苦参碱和氧化苦参碱溶液进行二维展开,通过与苦参碱和氧化苦参碱的标准品的二维展开对比,并结合液质联用技术,对二维展开的定性分析能力进行评价。二维薄层色谱可以提供多维度的分离和Rf信息,适用于中药等复杂体系的初步分离和定性分析。

薄层色谱-生物自显影观察新疆两色金鸡菊中清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分

目的:采用薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography),观察新疆两色金鸡菊提取物中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分.方法:以1,1'-二苯基苦基苯肼(DPPH)和2,2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为显色剂,观察新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中清除自由基的有效成分;以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p-Nitrophanyl-β-D-Gluopyranoside,p NPG)为底物,观察水提物和醇提物中具有抑制α-葡萄糖苷酶(来源于啤酒酵母菌)的活性成分.采用混合标准物质TLC色谱进行活性成分定性分析.结果:新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中均含有马里苷、奥卡宁、栎草亭-7-O-β-D-葡萄糖苷、黄酮奥卡宁(flavanokanin)、绿原酸、芦丁和槲皮素等化学成分.经薄层色谱-生物自显影实验,两色金鸡菊水提物和醇提物中的黄酮奥卡宁、马里苷、芦丁和绿原酸均有较强清除DPPH和ABTS自由基的能力;水提物和醇提物中黄酮奥卡宁、奥卡宁和马里苷能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性.结论:经薄层色谱-生物自显影技术可快速发现两色金鸡菊中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分,为进一步研究提供了指引.

二维高效液相色谱技术用于分析中药制剂中的麻黄类生物碱

构建了一个离线的二维高效液相色谱系统,以解决成分复杂的中药样品的分离和痕量组分的定量问题。该系统在原有的单泵、单检测器高效液相色谱仪的基础上作了相应的改进而构成,样品先在第一维的Zor-bax SB-C18色谱柱中进行分离之后,利用一个六通切换阀将目标组分切换并收集,浓缩后再注入第二维的Ai-chrom Bond-AQ C18色谱柱中进行分离。利用上述方法对3种麻黄类生物碱进行了二维分离和分析,实验结果表明,样品的分离明显改善,并且这个系统可用于中药的直接进样分析。

二维薄层色谱比色法测定蒜芪口服液中黄芪甲甙的含量

采用正丁醇提取，二维ＴＬＣ分离，香兰素－高氯酸比色法，测定了蒜芪口服液中黄芪甲甙的含量，回收率为９６．３％（ｎ＝５），ＲＳＤ为０．７５％。

黑果腺肋花楸果微乳系统薄层色谱分析及生物自显影抗氧化活性研究

建立了新食品原料黑果腺肋花楸果实中多种成分半定量测定方法,并测定其抗氧化能力及初步确定抗氧化活性成分。以质量分数75%含水量微乳-甲酸(体积比9∶1)为展开剂,采用高效薄层色谱法同时对黑果腺肋花楸果实中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、金丝桃苷和绿原酸进行含量测定,并采用DPPH自由基法和薄层生物自显影技术初步确定黑果腺肋花楸果中抗氧化活性成分。结果表明,方法学考察表明微乳系统薄层色谱分析方法良好;维生素C清除50%DPPH自由基质量浓度约为13.5μg/mL,黑果腺肋花楸质量浓度约为0.18 mg/mL;薄层生物自显影结果表明,黑果腺肋花楸果中矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、金丝桃苷、绿原酸,新绿原酸均具抗氧化活性。该研究建立的高效薄层扫描方法重复性、稳定性好,可作为一个简单、快速的半定量方法,黑果腺肋花楸果中抗氧化活性的测定及成分指认可为后续研究奠定基础。

利用二维生物自显影技术快速检测追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分

目的:利用培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术(2D-TLC bioautography)快速检测、追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分。方法:以二维薄层色谱将金钱松内生真菌代谢产物样品展开,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为指示菌,氯化三苯四氮唑(TTC)为显色剂,采用培养基覆盖生物自显影技术对其抗细菌活性成分进行检测、追踪。结果:该方法展开系统筛选简单,抑菌斑位置准确、斑点清晰,其优化条件为:以乙酸乙酯:正己烷(3:7)为弱极性展开系统,甲醇:二氯甲烷(1:9)为强极性展开系统,用20%甘油滤纸对湿室保湿,以14h菌龄的枯草芽孢杆菌为指示菌种子液,自显影薄层板36℃培养14～18h,1%TTC显色时间为1～2h,含0.2%～0.6%琼脂的半固体肉汤培养基应使用混菌法生物自显影,含1%琼脂半固体肉汤培养基应使用涂布法生物自显影。结论:培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术是一种快速检测、追踪抗菌活性成分的方法,尤其适用于成分复杂的天然产物中抗菌成分研究。

远志薄层色谱鉴别及生物自显影色谱筛选研究

目的通过远志薄层色谱及生物自显影色谱分析,为远志质量评价及对抑制乙酰胆碱酯酶活性成分筛选提供支持。方法采用薄层色谱法分离和自显影活性测定技术,对不同来源远志进行多成分分离及抑制乙酰胆碱酯酶活性分析。结果远志药材可见十二个薄层色谱主斑点,远志汕酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖、远志糖苷A可用于远志药材鉴别;细叶远志皂苷、远志皂苷元可用于远志药材质量评价。利用生物自显影色谱斑点初步筛选出1个活性成分。结论远志薄层色谱鉴别方法简便易行,特征性强,可以用于不同远志药材鉴别以及评价药材质量优劣;薄层生物自显影色谱适用于远志乙酰胆碱酯酶抑制成分的筛选。

薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选中的应用

薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography)将薄层色谱分离和生物活性测定相结合,是一种活性指导下的快速靶向追踪分离、筛选活性成分的方法。此法操作简单、耗时短、灵敏度和专属性高,常应用于抗细菌、抗真菌、抗氧化,以及对乙酰胆碱酯酶抑制剂、葡萄糖苷酶抑制剂等活性天然产物的筛选。笔者对薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选方面的应用进行综述。

二维薄层色谱-表面增强拉曼散射联用技术用于饮料及水果中糖精钠的快速分析

采用高稳定、高灵敏的纳米金/多孔二氧化硅复合材料作为SERS基底,构建了一种二维薄层色谱-表面增强拉曼散射(TLC-SERS)联用方法,该技术结合了薄层色谱(TLC)的快速分离功能和SERS定性定量分析的优点,提高了分离能力。采用对巯基苯胺作为探针分子研究了基底的均匀性和批-批重复性。Mapping扫描实验表明,24个测量点峰强度的相对标准偏差(RSD)为5.9%,说明该基底具有良好的点-点重复性。9个批次基底信号值的RSD为7.5%。将该基底用于糖精钠的检测,线性范围为0.1~200 mg/L,检出限为0.06 mg/L。用于实际样品测定,检测出饮料中糖精钠为141 mg/L,水果中为18 mg/L,10 min内能完成分析测试。该方法灵敏度高,特异性强,前处理方式简单,实现了饮料及水果中糖精钠的快速检测。

维药雪菊薄层色谱鉴别方法的研究

目的:建立雪菊的薄层色谱鉴别方法。方法:采用单因素法,筛选出最佳一维薄层色谱条件,结合二维薄层色谱法对17批不同批次的新疆雪菊药材进行鉴别。结果:一维薄层色谱采用聚酰胺薄膜为薄层板,以乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸(7:6:1:0.3)为展开剂,点样量为1μL,展开距离为8 cm,1%三氯化铝乙醇溶液为显色剂,在日光及365 nm紫外灯下观察,斑点清晰,分离度较好。结果显示17批雪菊样品的主斑点与对照药材主斑点一致。二维薄层色谱的展开剂分别为乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸(7:6:1:0.3)和乙腈-水-甲酸(4.5:5.5:0.5),其余条件同一维薄层色谱法。结果发现17批样品主斑点一致,但不同产地的样品间微量成分斑点存在差异,说明二维薄层色谱法能够有效地区分不同产地的样品。结论:本研究所建立的薄层色谱方法分离度、重复性均较好,且简便易行,可用于雪菊药材的鉴定。

二维液相色谱在药物和毒物分析中的应用进展

生物样品中药物、毒物及内源性物质的定性与定量分析在生命科学和药物研发中发挥重要作用。生物样品的基质复杂,干扰物多,待测物浓度与内源性物质相比明显偏低,且样品取样量少,因此要求生物分析方法的特异性强、灵敏度高、重现性好。二维液相色谱技术具有峰容量大、显著降低复杂样品的基质效应和残留现象,及可以实现样品分析的自动化等特点,已成为生物样品分离分析的有力工具,在环境、食品和药物分析中得到广泛应用。本文在简要介绍了二维液相色谱原理装置基础上,对其在生物样品中药物、毒物和内源性物质分析中的应用进展进行了综述。

薄层色谱自显影法分离检测海洋放线菌T-2-3中抑菌成分

目的:采用薄层色谱生物自显影方法对北极海洋放线菌T-2-3提取物的抑菌成分进行研究。方法采用大孔树脂对该放线菌活性成分进行富集,并针对活性成分进行薄层生物自显影检测。结果经检测,Rf 0.40的点为活性化合物。结论薄层色谱生物自显影法是一种快速分离检测抑菌成分的实验手段。

桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱鉴别及抗氧化活性筛选

目的建立桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱(TLC)鉴别方法,并筛选其抗氧化活性。方法采用甲醇为溶剂,超声提取桑枝中的槲皮素和绿原酸,实验了用不同展开系统、显色剂、温度、检视方法及不同薄层板对桑枝中槲皮素及绿原酸薄层鉴别的影响,选择最佳薄层鉴别条件。以1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)显色,筛选其抗氧化活性。结果以乙酸乙酯∶水∶甲酸∶甲苯(17∶2∶2∶0.8)为展开剂在硅胶G板上展开,1%Al Cl3为显色剂,366 nm下检视,桑枝中的槲皮素和绿原酸出现明显蓝色及蓝绿色斑点,薄层-生物自显影实验发现槲皮素和绿原酸的薄层板在紫色背景下呈现淡黄色斑点,证明二者具有抗氧化活性。结论本法操作简便,结果准确可靠,可用于桑枝的质量控制。

黄花柳花中黄酮类成分的薄层色谱分析及抗氧化活性研究

目的建立黄花柳花中黄酮类薄层色谱(TLC)鉴别方法,测定其抗氧化活性。方法采用聚酰胺薄膜层析色谱法对黄花柳花中的黄酮类成分进行鉴别,以75%微乳液-甲酸(9∶0.5)为展开剂,NP-PEG显色,紫外灯366nm下检视。采用薄层生物自显影技术测定黄花柳花对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除能力。结果黄花柳花TLC色谱图中,在与芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品色谱图相应的位置上,均显示相同的亮黄色及绿色斑点;黄花柳花的黄酮类成分对DPPH清除能力IC50为2.4mg/mL,Vc的IC50为16.7μg/mL,黄花柳花的黄酮类成分清除DPPH自由基的能力低于Vc;薄层生物自显影实验发现芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在紫色背景下呈现白色斑点,证明二者具有抗氧化活性。结论薄层色谱方法的建立为黄花柳花质量控制提供了依据,为黄花柳花抗氧化活性的药效学研究奠定了基础。

薄层色谱展开方法的几处改进

介绍了几种薄层色谱展开方法 ,包括中途展开、接力展开、多维接力展开、改进二维展开等 。

TLC-生物自显影技术在中药化学实验中的应用

通过引入"薄层色谱-生物自显影"新技术,对中药化学实验教学进行改革与探索。提高实验操作技能和实验教学质量,加深学生对理论知识的理解,激发学生的学习兴趣,取得了可喜成果和宝贵经验。