筛选肿瘤细胞中的瓜氨酸化蛋白

目的：筛选肿瘤细胞中的瓜氨酸化蛋白。方法培养食管癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌和胃癌细胞系，用2张相同凝胶在相同条件下对肿瘤细胞系中提取的蛋白进行二维电泳（2－DE）分析；将其中1张2－DE凝胶上的蛋白印迹转印至聚偏氟乙烯膜上，用抗瓜氨酸抗体杂交后检测免疫信号。将二维蛋白质印迹法（2－D WB）结果与另外1张2－DE蛋白图谱进行对比，将显示瓜氨酸免疫信号的蛋白从第2张2－DE凝胶中收集并进行质谱鉴定，以确定瓜氨酸蛋白。用免疫共沉淀法验证各肿瘤细胞系中瓜氨酸化蛋白的表达。结果2－DWB和质谱分析结果显示，培养的肿瘤细胞系中存在瓜氨酸化的α－烯醇化酶（ ENO1）、热休克蛋白60（ HSP60）、细胞角蛋白8（KRT8）、微管蛋白β（TUBB）、T细胞受体β链（TCRβ）、波形蛋白和蛋白质二硫化物异构酶。免疫共沉淀法分析结果显示，肿瘤细胞中有ENO1、HSP60、KRT8和TUBB的瓜氨酸化和表达。结论肿瘤细胞系中存在ENO1、HSP60、KRT8和TUBB被瓜氨酸化的现象。