共表达甘油脱氢酶和二羟丙酮激酶对大肠杆菌生长及甘油代谢的影响

考察共表达甘油脱氢酶(GldA)和二羟丙酮激酶(DhaKLM)对大肠杆菌生长及甘油代谢的影响。结果表明:在好氧条件下,共表达甘油脱氢酶及二羟丙酮激酶可以提高大肠杆菌利用甘油合成菌体的效率,利用等量的甘油,重组菌最高菌密度比对照菌提高了70%,细胞干质量为3.54 g(以每升发酵液计)。在厌氧条件下,仅共表达甘油脱氢酶并不能促进大肠杆菌的甘油代谢,而同时共表达甘油脱氢酶和二羟丙酮激酶可以明显提高大肠杆菌代谢甘油的能力,每克菌体消耗的甘油量提高了42%,每克干细胞中达11.08 g,代谢产物组成也发生显著变化,乙酸成为主要产物。这说明共表达gldA及dhaKLM基因能有效促进大肠杆菌好氧利用甘油生长及厌氧甘油代谢的能力。

慢性乙型肝炎肝脏炎症分期与血清多肽分子的相关性分析

背景:准确诊断肝组织炎症程度对慢性乙型肝炎(CHB)的预后评估具有重要临床意义。肝活检具有较多缺陷,因此迫切需寻求非创伤性、准确可靠的血清诊断标记物。目的:应用血清多肽组学法筛选CHB患者肝脏炎症分期的多肽诊断标记物。方法:建立146例前瞻性队列,包括126例CHB患者和20名对照者。采用Scheuer病理学标准进行肝脏炎症分期;液相色谱法串联质谱法(LC-MS/MS)分离和筛选血清差异多肽峰;多反应监测(MRM)法分析血清差异多肽分子m/z 520.3离子对与炎症程度、病毒载量的关系。计算受试者工作特征曲线下面积(AUROC),评估差异多肽诊断炎症分期的敏感性和特异性。结果:LC-MS/MS法筛选出9个差异表达多肽峰。差异多肽分子m/z 520.3为二羟丙酮激酶(DAK)片段,其4个离子对(520.3/176.1、520.3/353.7、520.3/459.8和520.3/503.3)的SPAR值随着肝脏炎症程度加重而逐渐减少,但与病毒载量(HBeAg阳性和HBV-DNA)无关。多肽离子对520.3/176.1、520.3/503.3区分G2～G4期与G0～G1期的AUROC值分别为0.840、0.856;区分G3～G4期与G0～G2期的AUROC值分别为0.886、0.888。结论:血清DAK的多肽分子m/z 520.3能有效诊断CHB的肝脏炎症程度。

产甘油假丝酵母甘油分解代谢CgGCY1、CgGCY2和CgDAK基因的克隆、敲除及其功能

产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)能够利用甘油大量生长菌体而无有机酸、醇等代谢物积累,是潜在的优良宿主细胞.为了解C.glycerinogenes甘油分解代谢途径,成功克隆得到二羟基丙酮(DHA)途径的编码基因Cg GCY1、Cg GCY2和Cg DAK.利用"Ura-Blaster"敲除盒分别构建的缺失突变菌Cggcy1?/gcy2?和Cgdak?均不能在甘油培养基中生长.q RT-PCR及酶活测定结果显示,与葡萄糖培养相比,甘油培养下细胞通过强化糖异生、HMP途径积累生物量,下调EMP途径和副产物合成关键酶表达以弱化有机酸、醇的合成,同时上调TCA循环以补偿EMP途径下调带来的能量和还原力不足,使得生物量提高24.5%而不积累有机酸、醇等代谢物.以甘油为共底物进行木糖发酵,木糖醇产量和转化率达到39.4 g/L和89%,与葡萄糖为共底物相比分别提高了79%和32.8%.本研究表明C.glycerinogenes甘油分解代谢仅依赖于DHA途径,以甘油为共底物更有利于木糖醇的合成和转化;结果可为代谢改造C.glycerinogenes以甘油为共底物合成高附加值化合物打下基础.