猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠的免疫效力分析

本研究旨在开发一种用于防制猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病的新型二联基因工程疫苗,并对其免疫效应进行评价。选择猪链球菌2型蛋白溶血素SLY、HP0197和副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15和HPS06257 4种蛋白,重组表达并纯化,添加一定比例的佐剂制成含有不同组分的亚单位疫苗。研究表明该二联亚单位疫苗及各单苗能够引起小鼠良好的体液免疫,并能保护机体分别抵抗致死剂量猪链球菌2型(SS2)和副猪嗜血杆菌(HPS)强毒株的攻击。此外,调理吞噬试验表明疫苗高免血清能够有效杀死细菌,并赋予机体被动抵抗SS2和HPS感染的能力。研究证实制备的猪链球菌-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗在小鼠具备良好的免疫保护效力。

PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究

【目的】研制PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白与PPV VP2结构蛋白二联亚单位疫苗。【方法】设计截去NLS信号肽序列的Cap蛋白氨基酸序列和VP2蛋白氨基酸全序列,分别进行大肠杆菌偏嗜密码子优化,构建重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统表达出可溶性的Cap蛋白和VP2重组蛋白。将重组蛋白纯化后分别与ISA201佐剂混合制备单苗和二联亚单位疫苗,免疫ICR小鼠,同时设立PBS空白对照和大肠杆菌BL21对照。首免后21d进行加强免疫,利用MTT比色法、细胞中和试验法和ELISA法对免疫小鼠淋巴细胞的转化功能及细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α)mRNA水平、免疫后中和抗体效价以及ELISA抗体水平进行检测。小鼠二免21d后进行PPV和PCV2混合攻毒,利用Real-time PCR法定量测定攻毒后小鼠脾脏的病毒含量。【结果】成功构建了重组质粒pET32a-Cap和pET32a-VP2,表达出可溶性蛋白Cap和VP2,经GEM颗粒和饱和硫酸铵沉淀法纯化蛋白,获得的PCV2Cap蛋白质量浓度为1 213μg/mL,PPV VP2蛋白质量浓度为1 025μg/mL。两种蛋白混合乳化制苗后无相互免疫抑制作用,并且能够诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。免疫后42d,单苗免疫组和二联亚单位疫苗组PCV2ELISA抗体效价均能达到800以上,中和抗体达到32~38,PPV HI抗体效价均高于6,PPV中和效价高于300,并且诱导机体产生强烈的淋巴细胞增殖反应,提高IL-4和IFN-γ的mRNA表达水平。攻毒试验结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2和PPV含量显著低于对照组,免疫组组间无显著性差异。【结论】利用大肠杆菌表达的PCV2Cap蛋白和PPV VP2蛋白制备的二联亚单位疫苗免疫ICR小鼠,其抗体水平与Cap、VP2单苗免疫水平相当,且对ICR小鼠有较好的免疫保护作用。

嗜水气单胞菌与迟缓爱德华氏菌亚单位二联疫苗对小鼠的免疫效果

将嗜水气单胞菌 ( Ah) J-1株的 HEC毒素和胞外蛋白酶 ( ECP)分别与迟缓爱德华氏菌 ( Et) 3 8株的脂多糖 ( LPS)及脱毒多糖 ( PS)偶联 ,制成 3种亚单位二联疫苗 :HEC-PS、ECP-PS、HEC-LPS。将它们与 Ah J-1和 Et3 8全菌灭活疫苗一同分别免疫小鼠 ,并设注射 PBS对照组 ,检测各组小鼠体液免疫及细胞免疫水平。结果显示 ,用间接 ELISA、溶血抑制和全菌凝集试验检出这 3种亚单位疫苗的抗体水平无明显差异 ,并且都对 Et3 8有凝集活性。用 MTT法检测脾淋巴细胞转化率和腹腔巨噬细胞吞噬活性 ,显示亚单位疫苗的细胞免疫指标均明显高于对照组 ,但略低于全菌苗免疫组。在第 2次免疫后的第 6周 ,分别用 1 0 0 LD5 0 Ah J-1和2 .3 7× 1 0 7CFU Et3 8攻击 ,Ah J-1攻击各组的保护率依次为 ,HEC-PS组 83 .3 %、ECP-PS组 80 %、HEC-LPS组 92 .3 %、Ah J-1全菌组 1 0 0 %、Et 3 8全菌组 2 5%、对照组无保护力 ;Et 3 8攻击各组的保护率依次为HEC-PS组 90 %、ECP-PS组 90 .9%、HEC-LPS组 85.7%、Ah J-1全菌组 62 .5%、Et3 8全菌组 1 0 0 %、对照组为 1 2 .5%。表明