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Anti-CD19Fab-(CP)_(3)新型二聚化抗体的构建及靶向性观察
1
作者
雷晓敏
范冬梅
+4 位作者
袁向飞
卢杨
张砚君
王建祥
熊冬生
《山东医药》
CAS
2023年第28期14-17,31,共5页
目的构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体,鉴定其蛋白分子量及相对含量并观察其靶向性。方法通过基因克隆技术构建原核表达载体PAYZ-Anti-CD19Fab-(CP)_(3)及阳性对照质粒PAYZ-Anti-CD19Fab-(CPP)_(3),将质粒转化至大肠杆菌16C9...
目的构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体,鉴定其蛋白分子量及相对含量并观察其靶向性。方法通过基因克隆技术构建原核表达载体PAYZ-Anti-CD19Fab-(CP)_(3)及阳性对照质粒PAYZ-Anti-CD19Fab-(CPP)_(3),将质粒转化至大肠杆菌16C9中进行表达。表达产物经过透析及Protein G亲和层析柱纯化,采用SDS-PAGE电泳法及液相串联质谱法(LC-MS)鉴定Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体分子量及相对含量;采用流式细胞术检测二聚化抗体与CD19^(+)B系淋巴瘤Raji细胞的结合能力以及二聚化抗体对CD19鼠源亲本全抗的竞争能力。结果成功构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3),所得产物纯化后经SDS-PAGE及LC-MS法鉴定其主要成分为二聚化抗体,含量为76.2%;Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化比例高于对照Anti-CD19Fab-(CPP)3,差异有统计学意义(P<0.05)。同浓度下,与Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)及Anti-CD19Fab相比,Anti-CD19Fab-(CP)_(3)对Raji细胞的结合能力更强,亲和力更好,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论通过在Fab的CH1尾端引入(CP)_(3)的改构方式可有效形成高比例二聚化抗体,显著提高抗体对靶细胞的靶向性,未来可应用于多价抗体及相关药物研发。
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关键词
Anti-CD19Fab-(CP)_(3)
Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)
二聚化抗体
靶向性
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题名
Anti-CD19Fab-(CP)_(3)新型二聚化抗体的构建及靶向性观察
1
作者
雷晓敏
范冬梅
袁向飞
卢杨
张砚君
王建祥
熊冬生
机构
中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)、北京协和医学院、天津市血液病细胞治疗研究重点实验室、实验血液学国家重点实验室、国家血液系统疾病临床研究中心、细胞生态海河实验室
天津医学健康研究院
天津市急腹症器官损伤与中西医修复重点实验室
出处
《山东医药》
CAS
2023年第28期14-17,31,共5页
基金
国家自然科学基金重点项目(81830005)
细胞生态海河实验室创新基金项目(22HHXBSS00032)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2021-I2M-1-041)。
文摘
目的构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体,鉴定其蛋白分子量及相对含量并观察其靶向性。方法通过基因克隆技术构建原核表达载体PAYZ-Anti-CD19Fab-(CP)_(3)及阳性对照质粒PAYZ-Anti-CD19Fab-(CPP)_(3),将质粒转化至大肠杆菌16C9中进行表达。表达产物经过透析及Protein G亲和层析柱纯化,采用SDS-PAGE电泳法及液相串联质谱法(LC-MS)鉴定Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体分子量及相对含量;采用流式细胞术检测二聚化抗体与CD19^(+)B系淋巴瘤Raji细胞的结合能力以及二聚化抗体对CD19鼠源亲本全抗的竞争能力。结果成功构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3),所得产物纯化后经SDS-PAGE及LC-MS法鉴定其主要成分为二聚化抗体,含量为76.2%;Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化比例高于对照Anti-CD19Fab-(CPP)3,差异有统计学意义(P<0.05)。同浓度下,与Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)及Anti-CD19Fab相比,Anti-CD19Fab-(CP)_(3)对Raji细胞的结合能力更强,亲和力更好,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论通过在Fab的CH1尾端引入(CP)_(3)的改构方式可有效形成高比例二聚化抗体,显著提高抗体对靶细胞的靶向性,未来可应用于多价抗体及相关药物研发。
关键词
Anti-CD19Fab-(CP)_(3)
Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)
二聚化抗体
靶向性
Keywords
anti-CD19Fab-(CP)_(3)
anti-CD19Fab-(CPP)_(3)
dimeric antibody
targeting effect
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
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作者
出处
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1
Anti-CD19Fab-(CP)_(3)新型二聚化抗体的构建及靶向性观察
雷晓敏
范冬梅
袁向飞
卢杨
张砚君
王建祥
熊冬生
《山东医药》
CAS
2023
0
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