白果肽的二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性及其抑制机理研究

食源性二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ)抑制肽可有效调节机体内糖代谢,降低机体血糖水平。为评估白果肽(phenylalanine-alanine-proline-serine-tryptophan,FAPSW和methionine-proline-glycine-proline-proline,MPGPP)的降糖潜能,采用体外试验测定其DPP-Ⅳ抑制活性,并进一步通过分子对接和分子动力学模拟揭示其抑制机理。结果表明,FAPSW和MPGPP具有良好的DPP-Ⅳ抑制活性,且MPGPP的DPP-Ⅳ抑制活性[IC_(50)=(0.158±0.009)g/L]强于FAPSW[IC_(50)=(2.540±0.126)g/L];分子对接结果表明,静电相互作用、氢键、疏水作用和范德华力在FAPSW和MPGPP抑制DPP-Ⅳ活性中起重要作用;分子动力学结果表明,FAPSW和MPGPP结合DPP-Ⅳ能形成稳定的复合物结构,且MPGPP-DPP-Ⅳ复合物的稳定性要强于FAPSW-DPP-Ⅳ。结合自由能结果表明,静电相互作用在FAPSW和MPGPP结合DPP-Ⅳ中起主导作用。研究结果可为FAPSW和MPGPP在功能食品领域的开发和利用提供一定的理论参考。

鲟鱼皮二肽基肽酶-Ⅳ抑制肽咀嚼片的制备工艺优化

针对市场上含有鲟鱼皮二肽基肽酶-Ⅳ(Dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制肽咀嚼片的相关产品较少的问题,采用湿法造粒技术和模糊数学法分析方法及单因素实验、响应面试验及正交试验,对咀嚼片配方及制备工艺进行优化。结果表明:咀嚼片最优配方为肽粉添加量46.52%,木糖醇添加量23.94%,CMC-Na添加量7.88%,硬脂酸镁添加量7.00%,奶粉及微晶纤维素添加量分别为10%与4.66%;在转台速度20 r/min,充填深度11 mm,充填压力28 kN,原料粒度350目的制备条件下,制得的咀嚼片硬度适中,表面光滑且色泽均匀,模糊数学分析法综合得分为69.75分。本研究通过辅助加料配合湿法造粒技术,对鲟鱼皮DPP-Ⅳ抑制肽咀嚼片的配方及制备工艺进行优化,旨在为咀嚼片产品的制备提供理论支持。

新型口服降糖药——二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂

胰高血糖素样肽(GLP-1)在调节血糖方面起着重要的作用,但其在体内可迅速被二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解失活。DPP-Ⅳ抑制剂可有效抑制GLP-1的降解,通过促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素释放、抑制食欲、减慢胃排空等作用调节血糖,具有不易引起严重低血糖事件、不引起体重增加等特点。本文对GLP-1和DPP-Ⅳ抑制剂的作用特点及已上市使用的西格列汀、维格列汀和沙格列汀的临床疗效、药代动力学以及不良反应等方面进行了综述。

2014—2018年我国七城市二肽基肽酶Ⅳ抑制剂和胰高血糖素样肽1受体激动剂及钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂使用情况调查

目的通过调查我国7个城市二肽基肽酶Ⅳ抑制剂(DPP-4i)和胰高血糖素样肽1受体激动剂(GLP-1RA)及钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)的使用情况及用药趋势,为促进药物合理使用提供基础参考数据。方法数据来源于2014年1月至2018年12月中国药学会医院药学专业委员会"医院处方分析合作项目"收集的我国7个城市中87家各级样本医疗卫生机构的抽样处方,对患者用药情况进行分析。结果5年来,7个城市DPP-4i,GLP-1RA,SGLT2i这3类降糖药物的销售金额呈逐年上升趋势,2018年药品销售金额中,DPP-4i(1643.81万元)>GLP-1RA(394.56万元)>SGLT2i(48.23万元)。药品销售金额排名前5位分别为西格列汀(828.63万元)、沙格列汀(393.12万元)、利拉鲁肽(375.97万元)、维格列汀(188.15万元)、利格列汀(131.15万元)。结论2014-2018年我国7城市DPP-4i、GLP-1RA和SGLT2i这3类新型降糖药物的使用较为合理,临床治疗中医师优先选择疗效和经济性较好的品种。

二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂对自发性2型糖尿病大鼠血清GLP-1和GIP的影响及调控机制

目的观察二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-4)抑制剂沙格列汀对自发性2型糖尿病(T2DM)大鼠血清肠促胰素胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽(GIP)的影响,并探讨其调控机制。方法选取40只OLETF大鼠,随机分为4组:自发性T2DM组,低、中、高剂量组,另选取同种系10只LETO大鼠为对照组。3剂量组给予浓度分别为(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2 mg/ml)沙格列汀灌胃,自发性T2DM组和对照组给予生理盐水灌胃,1次/d,持续12周。对比灌胃6、12周后各组血清胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽(GIP)水平;灌胃12周后进行糖耐量试验,并对比各组空腹胰岛素(FINS)水平;灌胃12周后处死取胰脏组织检测并对比胰腺细胞凋亡率、蛋白激酶B(Akt)、叉头转录因子1(FoxO1)、胰十二指肠同源盒因子(Pdx1)、葡萄糖转运子1(GLUT2)、葡萄糖激酶(GCK)mRNA、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)蛋白相对表达量。结果血清GLP-1、GIP、FINS水平、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1值、Pdx1、GLUT2、GCK mRNA和蛋白组间比较,对照组最高、中剂量组其次、低、高剂量组稍低、自发性T2DM组最低,除低、中剂量组比较差异无显著性外(P>0.05),其他每2组间比较差异均有显著性(P<0.05);灌胃第12周血清GLP-1、GIP水平与灌胃第6周比较,3剂量组显著升高(P<0.05),自发性T2DM组显著降低(P<0.05),对照组差异无显著性(P>0.05);自发性T2DM组大鼠在注射葡萄糖后60 min血糖水平达到峰值;对照组及3剂量组在注射后30 min血糖水平达到峰值,且在30~120 min内随时间延长显著降低(P<0.05);糖耐量试验血糖水平、胰腺细胞凋亡率组间比较,对照组最低、中剂量组其次、低、高剂量组稍高,自发性T2DM组最高,除低、中剂量组比较差异无显著性外(P>0.05),其他每2组间比较差异均有显著性(P<0.05)。结论 DPP-4抑制剂可显著促进自发性T2DM大鼠GLP-1、GIP的分泌,调节糖代谢,减少胰岛细胞凋亡,其中1 mg/kg DPP-4抑制剂效果最佳,推测与上调p-Akt、p-FoxO1蛋白、Pdx1、GLUT2、GCK mRNA和蛋白表达、激活FoxO1/Pdx1信号通路有关。

三种乳源生物活性肽的二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性研究

通过从分化成熟的人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中提取二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)建立体外筛选DPP-Ⅳ抑制剂的模型,用Ile-Pro-Ile(IPI)作为阳性对照测定其半抑制质量浓度(IC_(50))评价该模型,并测定3种来源于酪蛋白的四肽Leu-Pro-Leu-Pro(LPLP)、Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)和Asp-Gln-Leu-Gln(DELQ)的抑制率,研究了DPP-Ⅳ抑制肽的抑制类型和复合抑制作用。实验结果表明:IPI的IC_(50)为(31.51±1.51)μg/m L,与文献报道的相近,证明该模型可以应用于DPP-Ⅳ抑制剂的筛选;LPLP的IC_(50)为(0.84±0.06)mg/m L,QEPV的IC_(50)为(14.45±1.07)mg/m L而DELQ的IC_(50)大于100 mg/m L,即LPLP和QEPV具有一定的抑制作用;LPLP和QEPV的作用均为非竞争性机制,并且两种多肽联合对DPP-Ⅳ抑制作用为协同抑制作用。

新型降糖药——二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂临床应用进展

随着经济的发展及人们生活方式的改变,糖尿病的患病率逐年上升,目前我国总体糖尿病患病率9.7%。双胍类、磺脲类、噻唑烷二酮类和α糖苷酶抑制剂为传统的口服降糖药。新型口服降糖药二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制剂的降糖机制与传统药物有所不同,其以葡萄糖浓度依赖性通过减少肠促胰素的降解针对α、β细胞进行双向调节,临床疗效确切,现就DPP—Ⅳ抑制剂的研究进展予以综述。

治疗2型糖尿病的新药——二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂

目的介绍二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂作为一种新型治疗糖尿病的药物近年来的研究进展。方法参阅近年来用国内外大量相关文献,从DPP-Ⅳ抑制剂的结构、治疗糖尿病的作用机制、临床研究等方面进行综述。结果该类药物能以葡萄糖依赖方式诱导胰岛素的分泌,几乎不引起低血糖的危险,并且耐受性好。结论DPP-Ⅳ抑制剂作用于新的靶点,具有其他药物没有的优点,将是一类优良的抗2型糖尿病新药。

二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的研究进展

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种肠促胰岛素,它通过刺激和保护胰岛β细胞,促进胰岛素的合成和分泌,降低餐后血糖。二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)抑制剂能增强GLP-1的活性,降低2型糖尿病患者的高血糖症状,是一类新型的抗糖尿病治疗药物。临床研究表明DPP-IV单用或与二甲双胍、吡格列酮合用都有明显的降血糖作用,具有治疗效果显著、服用安全,耐受性好,不良反应少等特点,近年来已经成为糖尿病药物研究开发的热点。文中就其作用机制、国内外开发现状、构效关系及研究进展等进行综述。

特异性二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂维达列汀的合成与合成工艺优化

目的对特异性二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂维达列汀合成工艺方法进行探索及优化。方法通过文献调研,分析报道路线的优缺点,进而确定合成工艺路线。通过对限速步骤中的主要中间体设计正交实验或单因素实验,确定关键工艺参数。结果目标化合物与中间体的结构均经过1H NMR、MS谱确证,反应总收率为38.5%。结论该合成工艺路线具有原料便宜易得、操作简单、条件温和等优点,并通过优化结晶溶剂提高了收率,更适合工业化生产。

具有DPP-Ⅳ抑制活性的酪蛋白糖肽分离纯化及其序列鉴定

采用牛乳酪蛋白糖巨肽制备酪蛋白糖肽,并分析其对二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ, DPP-Ⅳ)活性的抑制作用,筛选DPP-Ⅳ抑制活性最强的酪蛋白糖肽,并进行分离鉴定。结果表明:(1)酪蛋白糖肽的DPP-Ⅳ抑制率最高达54.55±3.65%;(2)经葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)分离得到两个组分,其中F1组分具有较强的DPP-Ⅳ抑制活性,抑制率达63.27±3.24%;(3)进一步利用反相高效液相色谱及液相色谱串联质谱从F1组分中分离并鉴定得到3条DPP-Ⅳ抑制肽,肽序列分别为MAIPPKKNQDKT、PPKKNQDKTEIPTI、SPEVIESPPEIN。研究结果表明酪蛋白糖巨肽经酶解获得的酪蛋白糖肽具有DPP-Ⅳ抑制活性,具备作为降糖活性功能性配料开发的潜在性。

利用牡蛎制备DPP-Ⅳ抑制肽及其活性分析

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ,EC 3.4.14.5)抑制肽。通过对比5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶)制备的酶解液对DPP-Ⅳ的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-Ⅳ抑制效果最好。通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8%、pH 8.0、温度37℃,酶解时间90 min。酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段。通过质谱鉴定筛选得到2种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys(EITALAPSTMK)和Ile-LeuAla-Pro-Pro-Glu-Arg(ILAPPER)。利用BIOPEP在线模拟分析了这2个肽的胃肠液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-Ⅳ抑制活性研究。结果显示,2个肽段的IC50值分别为354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子对接结果表明,抑制肽与DPP-Ⅳ的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主。本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-Ⅳ抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础。

二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂治疗2型糖尿病研究进展

二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂是治疗2型糖尿病的新药，能显著增强胰高血糖素样肽-1的活性，而且新近研究发现，它可能通过调节脂肪组织中神经肽Y的抗亲脂作用而影响脂肪组织代谢。该药物在降低血糖水平的同时可以保护胰岛β细胞，与吡格列酮、二甲双胍、罗格列酮等联用时，降低空腹血糖和糖化血红蛋白A1c的作用更强，而低血糖、体重增加等不良反应发生率更低。因此，对该药物治疗作用的深入研究必将成为热点。

二肽基肽酶-Ⅳ的制备及其抑制剂体外筛选模型的优化

目的从分化的Caco-2细胞中提取二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ),并建立和优化分子水平DPP-Ⅳ抑制剂的通量筛选模型。方法诱导Caco-2细胞分化并高表达DPP-Ⅳ,提取DPP-Ⅳ,探索酶的存放时间对酶活性的影响;以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(Gly-Pro-PNA)为底物,采用发色底物法检测二肽基肽酶-Ⅳ活性,同时对反应体系的酶用量、底物浓度、反应温度和反应pH进行了优化。结果与结论 Caco-2细胞培养17 d时DPP-Ⅳ含量达峰值;在-80℃条件下,存放18个月对酶活性无明显影响;确定DPP-Ⅳ抑制剂筛选模型反应体系的最适反应条件为:反应酶用量为50μg/L蛋白、底物浓度为4 mmol/L、25℃、pH为7.6;通过该模型对所合成的靶向DPP-Ⅳ的抑制剂类化合物进行筛选,发现5个活性化合物。所述方法提取的DPP-Ⅳ酶及建立的DPP-Ⅳ抑制剂的筛选模型可用于DPP-Ⅳ抑制剂类的早期高通量筛选。

DPP-4抑制剂对2型糖尿病患者肾脏的保护作用

目的:观察二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂西格列汀对2型糖尿病患者肾脏保护作用。方法:选取本院2014年1-12月收治的2型糖尿病肾病患者48例作为研究对象,随机分为对照组24例、试验组24例。试验组于早餐前加服磷酸西格列汀100 mg,1次/d,对照组继续原治疗方案,根据空腹血糖调整药物剂量。分别于治疗前和试验后6个月末测定患者的体重指数(BMI)、平均动脉压(MAP)及糖化血红蛋白(Hb A1c)、早晨空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、肌酐(Scr)、胱抑素C(Cystatin C,Cys C)及尿白蛋白-肌酐比值(ACR)。结果:两组治疗前后BMI、MAP比较差异均无统计学意义,治疗后FBG、2 h PBG、Hb A1c、ACR及Cys C较治疗前均明显下降,且试验组的Hb A1c、Cys C、ACR较对照组下降更显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)抑制剂是一类具有多种作用机制的新型降血糖药物,不仅可以有效控制2型糖尿病患者的血糖水平,还有一定程度的肾脏保护作用。

新型二肽基肽酶-4抑制剂利格列汀对2型糖尿病患者的疗效

二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-4）抑制剂通过抑制DPP-4酶的活性，提高体内胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素肽（GIP）浓度，发挥葡萄糖依赖的促胰岛素分泌作用和抗胰高血糖素作用，从而降低血糖。自2006年上市以来，DPP-4抑制剂以其良好的降血糖疗效、不良反应少（低血糖风险低、体重影响中性）、服用方便等特点，成为2型糖尿病患者理想的降糖药物之一。

胰高血糖素样肽-1及相关制剂的降糖机制与应用进展

胰高血糖素样肽-1是肠道L细胞分泌的一种十分重要的肠促胰岛素,具有促进胰岛素的分泌、抑制胰高血糖素释放、延缓胃排空、改善β细胞功能并阻止其凋亡等多重作用而发挥独特的降糖作用。胰高血糖素样肽-1的两大类药物,即二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂和胰高血糖素样肽-1类似物作为新型的降糖药物在糖尿病治疗中发挥越来越重要的作用,是近年来糖尿病治疗药物研究的热点之一。

胰高血糖素样肽-1的生理功能及相关药物评价

目的:介绍胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的生理功能及相关药物的临床评价。方法:参阅有关文献,对GLP-1的生理功能及两种相关药物的临床评价进行综述。结果与结论:GLP-1具有促进胰岛素的合成和分泌、抑制胰高血糖素的释放、保护胰岛β细胞、抑制胃排空、有效降低高血糖等作用,但半衰期短、不适用于临床。GLP-1类似物依克那肽(exenatide)和二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂西他列汀(sitagliptin)均能显著降低餐后血糖、空腹血糖及糖化血红蛋白水平,尤其对胰岛β细胞的保护作用为两药的独特优势,揭开了2型糖尿病治疗的新篇章。但由于临床应用历史较短,可能有些不良反应尚未发现,故仍应保持足够警惕。

胰高血糖素样肽1类降糖药物与肾脏关系的研究进展

胰高血糖素样肽1类降糖药物可降低尿蛋白、增加尿钠排出以及改善肾脏疾病的组织病理改变,但其机制尚不明确,可能与心房钠尿肽、肾素-血管紧张素轴、氧化应激有关.本文就胰高血糖素样肽1类降糖药物与肾脏关系的研究进展作一综述.

马氏珍珠贝软体酶法制备降糖肽的工艺优化及肽段分析

目的:以二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase,DPP-Ⅳ)抑制率和葡萄糖消耗量为指标优化马氏珍珠贝软体的酶解工艺,并对酶法制备的降糖肽进行分析。方法:以人肝癌细胞(HepG-2)胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量、体外二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase,DPP-Ⅳ)抑制率为评价指标,比较筛选了酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对马氏珍珠贝软体的酶解效果,通过单因素及正交试验分析酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间等因素对酶解物降糖活性的影响,确定最佳酶解工艺,以液相串联质谱(Nano LC-MS/MS)分析酶解物中肽类物质组成。结果:酸性蛋白酶酶解的产物葡萄糖消耗量和DPP-Ⅳ抑制率优于其他种类蛋白酶,马氏珍珠贝软体制备降糖肽的最佳酶解条件为:45℃、3 h、料液比1:3.5(w:w)、加酶量1000 U/g,在此条件下的葡萄糖消耗量为37.53%、DPP-Ⅳ抑制率为74.21%。最佳工艺制备的马氏珍珠贝软体酶解物中93.88%的肽段分子量低于2000 Da,22.63%的肽段为疏水性肽段,74.92%的肽段N端至少有含有一个疏水性氨基酸。结论:本研究酶法制备的马氏珍珠贝软体降糖肽可通过抑制DPP-Ⅳ的活性及减少胰岛素抵抗发挥降糖作用,对功能食品的研发具有一定的指导意义。