中西医结合治疗氨酰基脯氨酸二肽酶缺乏症患儿呼吸道感染后脓毒症1例

氨酰基脯氨酸二肽酶缺乏症(prolidase deficiency,PD)为罕见的常染色体隐性遗传病,目前为止,世界范围内报道的确诊病例不足百例[1]。临床表现无特异性,主要表现为皮肤病变、智力障碍以及五官、骨骼和关节的异常。脓毒症的本质为机体对感染性因素反应失调所导致的器官功能障碍综合症。笔者采用中西医结合治疗PD患儿呼吸道感染,现报道如下。

人的基因工程氨酰基脯氨酸二肽酶的多效酶活性(英文)

目的 研究人氨酰基脯氨酸二肽酶除催化水解C端为脯氨酸残基的二肽外 ,是否还有G类有机磷化合物水解酶 (G酶)活性。方法 用基因工程技术克隆及表达人的重组氨酰基脯氨酸二肽酶。氨酰基脯氨酸二肽酶及G酶活性用常规方法测定。结果 COS 7细胞表达的人氨酰基脯氨酸二肽酶催化有机磷化合物梭曼的水解 ,也水解二肽化合物Gly Pro。两种活性比未转染的COS 7细胞高 2倍。比较转染了带有氨酰基脯氨酸二肽酶基因的重组载体的COS 7细胞和对照组细胞中的两种酶活性 ,可以看到有平行的升高趋势及恒定的酶活性比值。结论G酶和氨酰基脯氨酸二肽酶为同一个酶 。

α-天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收

构建了α天冬氨酰二肽酶基因（ｐｅｐＥ）与载体ｐＢＶ２２０连接的高表达重组质粒（ｐＢＶＰＥＰ，４３３７ｂｐ）。转化大肠杆菌后，目的基因表达为两种形式的产物，即细胞质中可溶性蛋白（～７５％）和包含体蛋白，共占细菌总蛋白的３０％左右。ＳＤＳＰＡＧＥ分析温敏诱导的表达蛋白，可以观察到约２７ｋＤａ的高表达蛋白条带，与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法，回收了包含体中９５％以上的表达蛋白。

α-天冬氨酰二肽酶基因工程菌的固定化及其应用

报道 α天冬氨酰二肽酶基因工程菌的固定化及其细胞性质， 并用于 Ａｓｐａｒｔａｍ ｅ的合成．

α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的FT-IR研究

我们用FT IR方法 ,研究了α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的二级结构 ,定量估算了天然酶的各种二级结构含量 ,α 折叠结构为 2 9% ,α 螺旋含量为 3 3 %～ 3 4% ,这与园二色谱测量α 螺旋为 3 3 %的结果有很好的一致 ,剩余的残基被认为形成不同类型的转角和无规结构。在进化酶中 ,β 折叠结构仍为 2 9% ,而α 螺旋为 3 0 %～ 3 1 % ,其它结构为不同类型的转角和无规结构。

2型糖尿病药物治疗新进展——肠促胰岛素激素类似物及二肽酶-Ⅳ抑制剂

早在20世纪60年代末期，Perley等发现，即使在相同的血糖浓度下，口服葡萄糖后刺激胰腺8细胞分泌的胰岛素多于静脉给予葡萄糖后分泌的胰岛素。这提示肠道可能释放对胰岛素分泌具有调节作用的因子。直到近年才发现并命名该因子，称之为肠促胰岛素激素（incretin）。它包括葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（glucose -dependent insulinotropic peptide,GIP）和胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）。

胰高血糖素样肽和二肽酶-Ⅳ抑制剂作用

胰高血素样肽-1和二肽酶-Ⅳ抑制剂开拓了2型糖尿病的治疗方法。本文对其作用机制，生理功能，临床试验等的实验。结果：给予本类药物能刺激胰岛β^-细胞增生和再生，不会使体重增加等作用。在2型糖尿病治疗上将是个突破。结论：胰高血糖素样肽和二肽酶-Ⅳ抑制剂可能将成为治疗2型糖尿病的新选择。

肾二肽酶的克隆

藤泽药品工业公司分离出能用于??系抗生物质的筛选系的人和猪肾二肽酶(RDP)的cDNA,用动物细胞表达成功,并已在日本生化学会报告.这一类抗生物质对从葡萄球菌等革兰氏阴性菌到绿浓菌等革兰氏阴性菌的广范围的细菌都有很强的抗菌力.但是在活体中RDP常立即被分解.所以尿道感染症不能使用.表达RDP的动物细胞在不被RDP分解的抗生物质筛选上发挥作用.

二肽酶IV在胃癌中的表达及临床意义

目的:检测二肽酶IV(DPP IV)在胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌预后中的价值。方法:收集本院手术后的胃癌组织及对应癌旁正常组织112例,用免疫组织化学方法定性比较胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中DPP IV的表达;Western blot定量比较胃癌组织及癌旁正常组织中DPP IV蛋白的表达。结果:免疫组织化学结果示DPP IV在癌旁正常组织中有3例(占2.7%)表达缺失;胃癌组织中有78例(占69.6%)表达缺失;Western blot结果示DPP IV在胃癌组织中的含量明显低于癌旁正常组织;多因素分析示DPP IV是胃癌不良预后的独立预测因子(P<0.001)。结论:DPP IV表达缺失是胃癌不良预后的独立预测因子。

肌肽二肽酶作为肝细胞癌诊断及预后评估潜在新型标志物的初步探讨

目的探索肌肽二肽酶(CNDP1)作为肝细胞癌(HCC)诊断和预后评估的潜在价值。方法通过基因芯片及GO分析筛选HCC诊断候选标志分子CNDP1。收集HCC癌组织125例,癌旁组织85例,肝硬化组织125例,肝血管瘤远离部位相对正常肝组织32例,以及66例HCC和82例非HCC患者血清样本。分别采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学、蛋白质印迹法和酶联免疫吸附法检测HCC组织及血清CNDP1在mRNA和蛋白表达水平的差异;以受试者操作特征(ROC)曲线和Kaplan-Meier生存分析评估CNDP1在HCC患者诊断和预后中的价值。结果CNDP1在HCC癌组织中的表达水平显著降低;在HCC患者癌组织和血清中CNDP1的水平均显著低于肝硬化患者及正常对照。ROC曲线分析显示血清CNDP1诊断HCC患者的曲线下面积为0.7532(95%CI 0.676~0.8305),敏感度和特异度分别为78.79%、62.50%。血清CNDP1与血清甲胎蛋白(AFP)联合检测能较显著提高诊断效能(AUC=0.8206,95%CI 0.7535~0.8878)。血清CNDP1诊断AFP阴性的HCC患者的敏感度和特异度为73.68%、68.75%(AUC=0.7931,95%CI 0.7088~0.8774)。此外,血清CNDP1水平能够区分小肝癌(瘤体直径<3 cm)(AUC=0.7571,95%CI 0.6374~0.8768)。Kaplan-Meier生存分析显示CNDP1与HCC患者不良预后相关。结论CNDP1可能是HCC诊断及预后评估的潜在标志物,并与血清AFP有一定的互补性。

我国汉族糖尿病慢性肾脏疾病与肌肽二肽酶1基因的相关性研究

目的探讨肌肽二肽酶1(CNDP1)基因多态性与中国汉族人群糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)的关系。方法选取健康对照者(NC)90名、T2DM患者210例和CKD患者280例(CKD组再分为GFR≥90 ml/(min·1.73 m^2)亚组105例,60 ml/(min·1.73 m^2)≤GFR<90 ml/(min·1.73 m^2)亚组84例,GFR<60 ml/(min·1.73 m^2)亚组91例),利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)行CNDP1 rs4892247位点多态性检测。结果 NC、T2DM和CKD组TT、CT、CC 3种基因型频率分别为66.7%、26.7%、6.7%,60.5%、31.9%、7.6%和46.8%、43.2%、10.0%;C等位基因频率分别为20.0%、23.6%、31.6%;NC组与CKD组,T2DM组与CKD组基因型和等位基因C的频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,携带C等位基因的CNDP1与CKD的发生呈正相关(OR=2.634,P<0.05)。结论 CNDP1 rs4892247基因多态性可能与中国汉族人群发生CKD发病风险增高相关。

桦褐孔菌膜二肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

本研究利用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris蛋白表达体系表达了药用担子菌桦褐孔菌的一个二肽酶基因。该二肽酶基因编码区全长1814bp,包含6个内含子,编码465个氨基酸。生物信息学分析发现,二肽酶基因编码的蛋白中不含信号肽序列,但在第55–77位氨基酸之间存在一个跨膜结构。将含跨膜结构和去跨膜结构蛋白的cDNA序列分别克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA上,电转化至巴斯德毕赤酵母X-33中,用1%(V/V)甲醇诱导重组菌株表达目标蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot检测表达蛋白。结果显示,巴斯德毕赤酵母可表达含跨膜结构的完整基因,但目标蛋白不能分泌到胞外,存在于破碎细胞的沉淀中,且没有催化活性;而去跨膜结构的蛋白则可分泌表达到胞外,并具有催化活性。Ni-NTA纯化去跨膜结构的桦褐孔菌二肽酶浓度可达0.12mg/mL,并发现其在pH 7.3、反应温度50℃、反应时间2h的条件下,以Gly-Gly为底物时,其比活为433U/mg。同时检测到其对Ile-Leu、Trp-Trp和Phe-Phe具有较高的水解活性。

利用计算机分析鉴定来源于肉蛋白的二肽酶-Ⅳ和血管紧张素-Ⅰ转化酶抑制多肽

血管紧张素-Ⅰ转化酶（ACE-Ⅰ,EC 3.4.15.1）、肾素（EC 3.4.23.15）和二肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ,EC 3.4.14.5）在高血糖的控制、2型糖尿病和其他代谢综合症相关疾病的发展中起重要作用。本研究利用已知的计算机方法、多肽数据库和软件。

靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV)是治疗II型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能.二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性.本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系.确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37?C、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系.应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选.本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.

大肠杆菌肽酶D的重组表达和晶体生长

用PCR技术扩增大肠杆菌肽酶D(pepD)的基因,并将扩增基因克隆于原核表达载体pET-22b中,获得该蛋白的可溶性高效表达。通过镍亲和层析柱一步纯化后可得电泳纯的重组蛋白。该蛋白为二体形式,每个单体含有一个锌原子。用“悬滴气相扩散法”对该蛋白进行晶体生长,获得单晶。

肺心病患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶测定的临床意义

目的 :研究肺心病患者血清中Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (CⅣ )及脯氨酸肽酶 (PLD)的含量变化及其临床意义。方法 :采用放射免疫分析法检测血清中PCⅢ与CⅣ含量 ;用分光光度比色法检测血清中PLD含量。结果 :肺心病患者血清中PCⅢ、CⅣ及PLD均显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,且其升高程度与病情相关。结论 :肺心病患者血清PCⅢ、CⅣ及PLD水平可作为估价肺血管重建、肺动脉高压及患者病情的参考指标。

兼有血管紧张肽转换酶抑制作用和脑啡肽酶抑制作用的药物在心血管疾病治疗中的应用

兼有血管紧张肽转换酶抑制作用和脑啡肽酶抑制作用的药物是一类全新的药物,比单纯的血管紧张肽转换酶抑制药和脑啡肽酶抑制药具有更强的作用和更多的优点,已在心力衰竭、高血压等的治疗中发挥重要作用。