我国汉族糖尿病慢性肾脏疾病与肌肽二肽酶1基因的相关性研究

目的探讨肌肽二肽酶1(CNDP1)基因多态性与中国汉族人群糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)的关系。方法选取健康对照者(NC)90名、T2DM患者210例和CKD患者280例(CKD组再分为GFR≥90 ml/(min·1.73 m^2)亚组105例,60 ml/(min·1.73 m^2)≤GFR<90 ml/(min·1.73 m^2)亚组84例,GFR<60 ml/(min·1.73 m^2)亚组91例),利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)行CNDP1 rs4892247位点多态性检测。结果 NC、T2DM和CKD组TT、CT、CC 3种基因型频率分别为66.7%、26.7%、6.7%,60.5%、31.9%、7.6%和46.8%、43.2%、10.0%;C等位基因频率分别为20.0%、23.6%、31.6%;NC组与CKD组,T2DM组与CKD组基因型和等位基因C的频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,携带C等位基因的CNDP1与CKD的发生呈正相关(OR=2.634,P<0.05)。结论 CNDP1 rs4892247基因多态性可能与中国汉族人群发生CKD发病风险增高相关。

血清和尿CN1在老年糖尿病肾病中的诊断价值分析

目的研究血清和尿中肌肽二肽酶1(CN1)对老年糖尿病肾病(DN)的诊断价值。方法选取我院诊治的168例T2DM病人,根据尿白蛋白/肌酐比值(UACR),分为对照组(UACR<30 mg/g,n=46)和DN组(UACR≥30 mg/g,n=122)。比较2组血清和尿中CN1水平及临床生化指标,并进行相关性分析。采用多因素Logistic回归分析影响DN发生的因素。采用ROC曲线分析各指标对DN的诊断价值。结果与对照组比较,DN组估计肾小球滤过率(eGFR)较低,而UACR、血肌酐、血BUN、血UA、胱抑素C、血清和尿CN1水平明显较高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。血清、尿CN1水平与UACR、血肌酐、血BUN水平呈显著正相关,与eGFR呈显著负相关(均P<0.05)。eGFR、胱抑素C、血清CN1和尿CN1是DN的独立影响因素。ROC曲线分析显示,eGFR、胱抑素C、血清CN1、尿CN1及联合检测对DN诊断的AUC分别为0.851、0.760、0.838、0.849、0.944,联合检测的AUC显著优于单项指标(P<0.05)。结论DKD病人血清和尿CN1水平升高,是影响老年T2DM病人DN发生的独立危险因素,eGFR、胱抑素C、血清和尿CN1联合检测对DN具有较高的诊断价值。

DPEP1在结直肠上皮内瘤变组织中的表达及临床意义

目的:通过检测二肽酶1(dipeptidase 1,DPEP1) mRNA及其蛋白质在人结直肠上皮内瘤变组织中的表达,探讨其与临床病理特征的关系。方法:应用实时荧光定量(real-time fluorescence quantitative,RFQ)-PCR和免疫组织化学方法分别从mRNA和蛋白质水平检测DPEP1在60例结直肠上皮内瘤变(腺瘤并高级别上皮内瘤变35例,腺瘤并低级别上皮内瘤变25例)组织,结直肠正常黏膜上皮组织30例,高分化腺癌组织20例石蜡包埋标本中的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果:DPEP1 mRNA在35例高级别上皮内瘤变,25例低级别上皮内瘤变组织中的表达量分别为0.560±0.052和0.328±0.040(P=0.001),在60例结直肠上皮内瘤变组织、30例结直肠正常黏膜上皮组织及20例高分化腺癌组织中的表达量分别为0.684±0.108、0.235±0.045和0.832±0.136 (P <0.001)。DPEP1蛋白在高分化腺癌组织中的表达率为100%(20/20),明显高于结直肠上皮内瘤变83.33%(50/60)和结直肠正常黏膜上皮组织20%(6/30),弥漫性分布于细胞质中(P <0.01)。DPEP1在高级别上皮内瘤变组和低级别上皮内瘤变组的阳性表达率分别为88.57%(31/35)、76%(19/25); DPEP1表达水平与上皮内瘤变病理分级及进展相关(P <0.05),但在不同性别、年龄中的表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:DPEP1在结直肠上皮内瘤变和早期结直肠癌中表达并可影响肿瘤细胞的侵袭性,与肿瘤的进展相关。

DPEP1基因过表达BT549细胞株的建立和鉴定

目的探讨二肽酶1(dehydropeptidase-1,DPEP1)基因表达载体的构建及DPEP1蛋白在肿瘤细胞中的过表达情况及其影响。方法将DPEP1全长基因PCR扩增,EcoR Ⅴ和Nhe Ⅰ双酶切后克隆入带有同样双酶切pcDNA5/FRT/TO表达载体,并获取pcDNA5/FRT/T0/DPEP1,筛选阳性克隆,Sanger测序确证。扩增pcDNA5/FRT/T0/DPEP1质粒并将其转染入BT549细胞系,获得DPEP1过表达,借助Western blot、CCK-8等实验技术分析其表达及影响作用。结果成功构建了DPEP1的过表达载体,转染肿瘤细胞株,并获得DPEP1过表达蛋白,目的蛋白表达明显升高,其过表达的条带灰度约为阴性对照的20倍。结论研究的成功实施为将来阐明DPEP1基因在肿瘤中的作用及机制奠定了实验基础。