温郁金二萜类化合物C对幽门螺杆菌诱导人胃GES-1上皮细胞炎症的抑制作用及其对NF-κB信号通道的影响

目的通过体外实验研究温郁金二萜类化合物C对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)诱导炎症的抑制作用及对NF-κB信号通路的影响。方法选用Hp I型菌株感染人胃上皮细胞株GES-1,建立体外Hp感染细胞模型,并予不同浓度温郁金二萜类化合物C、阿莫西林等进行干预,ELISA法检测上清液中IL-8、IL-4,并应用Wester blot方法检测NF-κB中p65、IKKα、IKKβ蛋白表达。结果 MTT法显示温郁金二萜类化合物C对胃GES-1细胞的IC5为5 mg.L-1,阿莫西林为5 mg.L-1,Hp作用于人胃GES-1上皮细胞后,上清液中IL-8明显升高,其中以12 h浓度最高,而予不同浓度温郁金二萜类化合物C、阿莫西林组干预后,IL-8水平在各个时间段均低于模型组,其中以高浓度温郁金二萜类化合物C组下降最为明显(P<0.05)。而IL-4水平在Hp作用于人胃GES-1细胞后下降,予中浓度温郁金二萜类化合物C组、高浓度二萜类化合物C组干预后IL-4水平明显升高(P<0.05)。温郁金二萜类化合物C具有抑制Hp促p65进入胞核,抑制Hp所刺激的IkBα的降解,抑制p65、IkBα磷酸化,抑制蛋白IKKα、IKKβ的表达等作用。结论 NF-κB信号通路在Hp引起慢性胃炎的发病机制中起到核心作用,采用温郁金二萜类化合物C可阻断NF-κB信号通路,可以有效减少Hp诱导的促炎性因子的分泌与增加抑炎因子的分泌。

一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０分别为７．６ｍｇｇ－１和９．１ｍｇｇ－１，在４ｍｇＬ－１时即明显抑制ＨＬ－６０细胞的对数生长；对３Ｈ－ＴｄＲ参入作用在培养４８ｈ后有一定抑制作用；透视电镜显示肿瘤细胞有损伤表现；细胞周期分析显示Ｇ２＋Ｍ期细胞增多；ＮＢＴ还原反应试验阴性。结论Ｆ－Ａ明显抑制ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞生长，抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示Ｍ期阻滞，研究初步提示Ｆ－Ａ不具细胞诱导分化作用。

2D NMR研究新呋喃二萜类化合物的结构

从中药黄独 Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｂｕｌｂｉｆｅｒａ Ｌ．中通过柱层析色谱分离得到 ３个化合物．其中 １个 为新骨架的呋喃二萜类化合物命名为ｎｅｏｄｉｏｓｂｕｌｂｉｎ，采用核磁共振（１Ｈ，１３Ｃ，ＤＥＰＴ，１Ｈ－１Ｈ ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，ＮＯＥＳＹ ａｎｄ ＴＯＣＳＹ）的波谱方法确定了它的结构和相对构型，其余 的 ２个化合物分别为 Ｄｉｏｓｂｕｌｂｉｎ Ｂ，５－ｕｒｅｉｄｏｈｙｄａｕｔｏｔｉｏｎ．

天然二萜类化合物的抗肿瘤活性

采用ＭＴＴ快速比色法，以长春碱（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ，ＶＬＢ）为阳性对照，研究了３６种从中草药中分离提取的天然二萜类化合物对三种不同癌细胞（肝癌ＳＭＭＣ－７７２１、肺腺癌Ｌ（３４２）、胃腺癌ＭＣｃ８０－３）生长的抑制活性。结果表明：６种二萜类化合物抗肿瘤活性强度与其化学结构密切相关；其中Ｅ（１８）、Ｅ（２１）和Ｅ（１３）的抑瘤活性强度比长春碱强，顺序为：Ｅ（１８）～Ｅ（２１）＞Ｅ（１３）＞ＶＬＢ＞Ｅ（１９）＞Ｖ８＞Ｅ（１２）；酯酰化取代基是影响其抗肿瘤活性强度的主要官能团。

HPLC-APCI-MS分析半边旗中二萜类化合物

目的 建立一种准确可靠的分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法 用高效液相色谱 (HPLC) 大气压化学电离源 (APCI) 质谱 (MS)联用的方式 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行测定。主要的二萜类化合物 5F和 4F的准分子离子为 [M -H]- 1 ,发生源内分子离子碰撞活化解离 (CID)现象时 ,出现 [M -H]- 1 和 [M -H2 O -H]- 1 离子峰。采用 [M -H]- 1 为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量 ,优选质谱条件和色谱条件。分析色谱柱为DiamonsilODS ,4 6mm× 15 0mm ,流动相为 3 0 %CH3CN 70 % 2mmol·L- 1 NH4 Ac,流速 1 0mL·min- 1 ,进样 5 μL。以测定半边旗中二萜类化合物 5F为例 ,对此方法进行了应用。结果 半边旗中二萜类化合物 5F为 1 18mg·g- 1 ,方法线性范围 0 0 5～ 2 5 μg,相关系数均优于 0 999,检出限达 0 4ng(进样 5 μL)。 5F的加标回收率为 97 8% (n =3 ) ,5F保留时间为 4 3min。结论 本法灵敏、准确、可靠 。

几种香茶菜属二萜类化合物的抗氧化作用

目的 了解香茶菜属二萜类化合物冬凌草乙素(Pon)、香茶菜醛 (Ame)、毛叶香茶菜醇 (Iso)是否具有抗氧化作用。方法 用分光光度法测定Fenton反应体系中细胞色素C(Ⅱ )的含量 ,了解清除·OH的能力 ;用紫外分光光度法测定N-2 的含量 ,了解清除O-·2 的能力 ,用DTNB法测定GSH的含量。结果 Orid、Pon、Ame、Iso ,5 0、10 0、2 0 0 μmol·L-1可清除H2 O2 Fe2 + 反应体系中产生的·OH ,且呈剂量依赖关系。Orid、Pon、Ame、Iso ,4 0 0、80 0 μmol·L-1可清除黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶系统产生的NO-2 。Orid、Pon、Ame、Iso ,1、2 μmol·L-1可明显的减少LPS刺激巨噬细胞产生的NO-2 。Orid、Pon、Ame、Iso ,2、4 μmol·L-1可明显抑制CCl4造成的GSH含量降低 ,具有剂量依赖性。结论 Orid、Pon、Ame、Iso能有效地清除羟自由基和一氧化氮 。

半边旗中二萜类化合物5F对K562细胞几种癌基因表达的影响

目的 研究半边旗中二萜类化合物 5F(11α 羟基 15 氧 16 烯 ent贝壳杉烷 19酸 )对K5 6 2细胞癌基因Bcl 2、Bax、c Fos、c Jun表达的影响。方法 5F作用K5 6 2细胞 2 4h后 ,用蛋白印迹法检测Bcl 2、Bax、c Fos、c Jun的表达。结果 半边旗中二萜类化合物 5F作用于K5 6 2细胞 2 4h后 ,Bcl 2表达减少 ,Bax、c Fos、c Jun表达增多。结论 推测化合物 5F抗肿瘤的机制之一是上调Bax、c Fos、c Jun表达和下调Bcl

半边旗二萜类化合物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的 研究 5F对人病理性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法 将 5F作用于体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞 ,通过3H -脯氨酸掺入法、检测细胞上清液羟脯氨酸含量及人PCⅢ放免试剂盒测定成纤维细胞胶原合成含量。结果 5F可减少成纤维细胞3H -脯氨酸掺入量、细胞上清液胶原蛋白总量及Ⅲ型前胶原的含量。结论

二萜类化合物药理学作用研究进展

二萜类化合物广泛存在于自然界,具有重要的生物学意义。二萜类化合物抗肿瘤活性研究较为透彻,其作用的发挥与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞增殖、直接细胞毒作用及破坏肿瘤组织血管的形成作用相关。二萜类化合物除了抗肿瘤活性外,还具有抗菌、抗病毒、抗炎及免疫抑制作用等。此外,近年来研究发现二萜类化合物尚具有降低血压、防止血栓形成等作用。二萜类化合物作用复杂,作用机制各异,本文对二萜类化合物的研究进行总结。

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PMNF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。

穿心莲二萜类化合物对B16细胞致敏小鼠CTL杀伤活性的影响

目的研究穿心莲二萜类化合物(DAP)对B16细胞致敏小鼠脾脏CTL杀伤活性的影响。方法将♂BALB/c小鼠分为对照组、致敏组、50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP给药组,制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶(LDH)法和DiO/PI双染色法分别测定CTL杀伤活性。结果50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP口服给药可以增加B16细胞致敏小鼠脾脏淋巴细胞中T细胞及CD8+T细胞比例,降低T细胞中CD4+/CD8+比值并增强CTL对B16细胞的杀伤活性。结论DAP可增加B16细胞致敏小鼠脾脏T细胞比例及提高CTL杀伤活性。

半边旗二萜类化合物5F-聚乙二醇固体分散体的研究

以聚乙二醇 6 0 0 0 (PEG6 0 0 0 )为载体 ,采用熔融法制备半边旗二萜类化合物 5F固体分散体 ,测定了 5F原料药、固体分散物以及机械混合物的体外溶出度 ,并对固体分散物进行了扫描电镜观察、红外光谱以及紫外光谱分析 ,结果表明 ,5F固体分散物的溶出度与 5F原料药和机械混合物相比有明显提高 ;5F以超细态分散于载体中 ;5F分子和载体分子之间未发生化学变化。

半边旗二萜类化合物5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的 观察中药半边旗二萜类化合物 5F对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibrolast,KFB)凋亡及对Fas蛋白表达的影响。方法 体外培养KFB ,①收集以浓度为 32 μg/ml的 5F作用 12、2 4、36、4 8h后的细胞 ;②收集分别用浓度为 8、32、6 4、 12 8μg/ml 5F作用 4 8h后的细胞 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测成纤维细胞的凋亡率及Fas蛋白的表达。结果 ① 5F作用 12～ 4 8h成纤维细胞出现明显的凋亡 (P <0 0 1) ,对照组成纤维细胞未见明显凋亡 ;②随着药物浓度的增大Fas蛋白表达也增高 (P <0 0 1)。结论 5F可以诱导KFB细胞凋亡 ,促进Fas蛋白的表达。

半边旗中二萜类化合物的超临界CO_2萃取及HPLC-MS分析

目的 建立一种高效准确的提取和分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法 以超临界 CO2 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类化合物 ,采用正交设计法优化萃取条件 ;建立了 HPL C-大气压化学电离源(APCI) - MS联用的分析方法 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行含量测定 ,以选择离子峰面积与总离子流峰面积的比值优选改性剂。主要的二萜类化合物 5 F的准分子离子为 [M- H]- 1。采用 [M- H]- 1为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果 超临界流体萃取最佳条件 :2 5 MPa、6 0℃、15 %甲醇、流量 3.0 m L /min;分析条件 :Diamonsil ODS色谱柱 (15 0 mm× 4 .6 mm,5 μm) ,流动相为 CH3CN- 2 mm ol/ L NH4 AC(35∶ 6 5 ) ,流速 1.0 m L / m in,进样 5μL ,线性范围为 0 .0 5～ 2 .5μg,检出限达 0 .4 ng。 5 F的加样回收率为 97.8% (n=3)。结论 本法提取效率高、检测灵敏度高、选择性好 ,可应用于半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和质量标准的制定。

光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制

目的研究光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC 7721 生长的抑制作用。方法以四唑盐比色试验(MTT)法检测二萜类化合物对SMMC 7721细胞生长的抑制率,用相差倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率及多药耐药基因1(MDR1)的表达水平。结果5~25μM的二萜类化合物对SMMC 7721细胞有较强的抑制作用,与浓度呈线性相关,并呈时间依赖性,72 h半数抑制浓度(IC50)为19 41μM ,20μM的药物作用于SMMC 7721 细胞48 h,流式细胞术检测细胞周期阻滞于G0 ~G1 期,细胞凋亡率为24 95%;在相差倒置显微镜下观察到细胞凋亡的特征形态改变,MDR1表达明显下调,且随药物浓度的增加MDR1 表达水平逐渐下降。结论光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC 7721 有显著的抑制作用,可诱导癌细胞凋亡,明显下调MDR1的表达,具有逆转多药耐药性的作用。

尾叶香茶菜二萜类化合物B对人宫颈癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的:观察尾叶香茶菜二萜类化合物B(DB)对人宫颈癌细胞株Hela细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法:处于对数生长期的Hela细胞分为正常对照组,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg.L-1DB实验组,MTT法观察不同剂量DB作用24和48h后Hela细胞增殖抑制率,相差显微镜观察DB作用后Hela细胞形态的改变,RT-PCR和Western blotting分别观察DB作用后Hela细胞P53、P21、CDK2mRNA和蛋白表达水平。结果:MTT检测,24h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为18.18%、28.89%和32.84%,48h时2.0、4.0、8.0DB组Hela细胞增殖抑制率分别为26.64%、47.03%和51.90%,呈时间-剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);形态学观察,DB作用后Hela细胞变圆、体积缩小,有部分细胞漂浮;2.0、4.0和8.0mg.L-1DB分别作用Hela细胞24和48h后,P53和P21mRNA和蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),CDK2mRNA和蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:DB可抑制Hela细胞生长,其机制可能与上调细胞周期相关基因p53、p21的表达,下调CDK2表达,从而影响细胞从G1期进入S期有关。

半边旗二萜类化合物的液质联用图谱鉴定

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、4.6 mm×150mm,流动相为30%CH3CN-70%2mmol/L NH4AC、流速1.0 ml/min,进样5 μl;质谱分析条件:APCI负离子源,质谱扫描范围m/z 50～700,扫描间隔1s.以对照品为参比,鉴定出贝壳杉烷系二萜类化合物4F、5F和6F的色谱峰;根据色谱行为和质谱行为,推测出6F的16位饱和态化合物以及4F和5F的甙.对不同地区和采集时间的半边旗LC-MS指纹图谱中的主要色谱峰进行比较分析得出,广州市郊和湛江地区以及在11～12月采集的半边旗中5F含量较高.本法简便、快速,可为半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和新药资源的开发提供参考.

对映-贝壳杉烷型二萜类化合物对土壤纤毛虫群落的毒性效应

选取小陇山自然保护区麻沿林区的土壤纤毛虫并通过盆栽实验从纤毛虫的群落结构、丰度和食性三方面研究了对映-贝壳杉烷型二萜类化合物对纤毛虫群落的毒性作用。纤毛虫群落结构采用"非浸没式培养法"进行分析,物种鉴定采用活体观察和蛋白银染色法,同时采用直接计数法分析土壤纤毛虫的丰度。共鉴定到纤毛虫88种,隶属于3纲11目29科42属,其中对照组75种;分析表明二萜化合物可导致土壤纤毛虫群落结构的衰退演替;双因子方差分析显示纤毛虫物种数在二萜化合物各浓度处理组间呈现极显著差异(F5,9=137.776,P<0.01),并在不同时间处理组间呈显著差异(F5,9=2.607,P<0.05);线性回归分析显示土壤纤毛虫总物种数随着二萜类化合物浓度的升高有下降趋势,具有良好的直线线性关系(R2=0.9521)。当二萜类化合物浓度超过32.5 mg/kg时土壤纤毛虫优势种由膨胀肾形虫、长篮环虫、大口薄咽虫和长圆膜袋虫演替为膨胀肾形虫、长篮环虫、苔藓膜袋虫、水藓薄咽虫和大弹跳虫,且C/P系数从小于1变为大于1,当施药浓度超过62.5 mg/kg时,优势种演替为大弹跳虫、小尖毛虫、有肋薄咽虫和一种前口虫。同时,分析还显示肾形目对二萜化合物有较高的耐受能力,下毛目、前口目和篮口目对二萜类化合物有一定的耐受能力。对纤毛虫食性研究发现二萜类化合物对纤毛虫的影响还与纤毛虫的食性有关,尤其对肉食性纤毛虫危害最大。比较分析显示,在相同暴露时间,不同施药浓度下土壤纤毛虫丰度与对照组相比均有极明显的降低,而同一施药浓度,随着暴露时间逐渐延长,纤毛虫的数量逐渐回升,但即使土壤中二萜类化合物残留浓度很低,也对纤毛虫群落有显著的抑制作用。非参数多个独立样本检验分析结果表明各浓度组间纤毛虫的丰度存在极显著差异。结果表明,不同浓度的对二萜化合物对土壤纤毛虫群落结构在种类组成和丰度方面均成具有强烈的扰动作用。

几种二萜类化合物对自由基诱导的线粒体损伤的保护作用(英文)

目的：了解冬凌草甲素（Ｏｒｉｄ）及其它香茶菜属二萜类化合物香茶菜醛（Ａｍｅ）毛叶香茶菜醇（Ｉｓｏ）是否与冬凌草甲素同样具有抗氧化作用。方法：用分光光度法测定脂质过氧化物丙二醛（ＭＤＡ）含量及线粒体肿胀度。用荧光分光光度法测定线粒体膜流动性。结果：Ｏｒｉｄ，Ａｍｅ，Ｉｓｏ４０，８０，１６０μｍｏｌ／Ｌ抑制铁半胱氨酸（Ｆｅ２＋Ｃｙｓ）引起的肝线粒体ＭＤＡ形成，并呈剂量－依赖关系。Ｏｒｉｄ１６０μｍｏｌ／Ｌ抑制肝线粒体膜流动性下降。（Ｐ值分别为０２９７±０．０２２，Ｆｅ２＋Ｃｙｓ的Ｐ值为０４２３±０．０１４）；Ａｍｅ１６０μｍｏｌ／Ｌ还可抑制脂质过氧化引起的肝线粒体肿胀。结论：Ａｍｅ，Ｉｓｏ与Ｏｒｉｄ同样可能通过抑制脂质过氧化而产生抗氧化作用。

冬凌草甲素等二萜类化合物的抗氧化作用

目的 探讨冬凌草甲素等二萜类化合物的抗氧化作用。方法 用比色法对 ade,orid,scul,iso,ame等 5种二萜类化合物抗氧化作用进行了研究。结果 发现由 Fe2 + -cys体系在鼠肝线粒体内产生的自由基用不同浓度的 Ade,Ame和 Iso,orid,scul均有消除作用 ,并呈剂量依赖关系 ,且 Ade和 Iso,Ame,orid等几种二萜类化合物在剂量 160 μmol·L- 1可以抑制由 Fe2 + -cys引起的鼠肝线粒体细胞膜流动性下降。且 ade,ame可以抑制 Fe2 + -vit· C引起的线粒体肿胀。 结论 此 5种二萜类化合物有抗氧化作用。