千金子二萜醇p53依赖性抗肿瘤活性及构效关系研究

采用噻唑蓝(MTT)法测定6种千金子Lathyrol与Ingenol型二萜醇及其衍生物对不同p53基因型非小细胞肺癌细胞株的抗肿瘤活性,研究千金子二萜醇及其衍生物的构效关系及p53蛋白在千金子二萜醇发挥抗肿瘤活性中的作用与机制。结果表明:天然千金子二萜醇3位羟基成酯后可增加非小细胞肺癌毒性,其中以巨大戟醇甲基丁烯酸酯的细胞毒作用最强。表达p53蛋白可以进一步增加二萜醇酯类衍生物的细胞毒性。在千金子二萜母体醇中引入酯基团可以增强其抗肿瘤活性,同时也能增强其p53依赖的抗肿瘤作用。这一研究为千金子二萜醇作为抗肿瘤先导物来源及其进一步结构优化提供了科学依据。

千金子二萜醇对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞体外生长的抑制作用

目的观察中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞的抑制作用。方法将人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞在不同浓度含千金子二萜醇(111、333、1 000、3 000、9 000μg/ml)的培养基中培养,MTT法观察千金子二萜醇对细胞体外增殖情况的影响。结果24 h后两实验组细胞增殖速度减慢,并随浓度增加增殖速度减慢明显;3 000、9 000μg/ml浓度组有统计学差异(7860细胞:P=0.005,P=0.002;renca细胞:P=0.005,P=0.003),以9 000μg/ml浓度组作用最强,人肾癌7860细胞生长抑制率达76.03%,小鼠肾癌renca细胞生长抑制率为64.65%;与空白对照比较差异显著(P=0.002,P=0.003);两实验组细胞增殖比较没有明显差异(P>0.05)。结论中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞有明显抑制作用,使两细胞体外生长被显著抑制,证实千金子二萜醇是一种有临床应用前景的抗肿瘤中药提取物。

大戟二萜醇酯类成分及其毒效关系研究进展

本文回顾了国内外对大戟属植物中大戟二萜醇酯类成分毒性的研究概况,分析该类成分毒效与结构之间的关系,归纳总结该类化合物在大戟属植物资源中的分布,为大戟属植物资源以及大戟二萜醇酯类成分的开发利用提供新思路,并为其临床应用的安全有效提供科学依据。

千金子二萜醇衍生物抗非小细胞肺癌的作用及机制

目的:非小细胞肺癌占所有肺癌的85%,具有较高的发病率和病死率。非小细胞肺癌的治疗研究和新药开发迫在眉睫。本研究主要探讨千金子二萜醇衍生物的活性及其抑制非小细胞肺癌细胞生长的作用机制。方法:以千金子二萜醇为原料合成3个千金子二萜醇衍生物,采用磁共振验证结构;采用MTT法检测上述衍生物对非小细胞肺癌细胞(A549和H1299细胞)增殖活力的影响,筛选出活性最佳的化合物进行后续实验。集落形成、划痕、Transwell实验分别用于检测A549和H1299细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)和蛋白质印迹法用于检测A549细胞中E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、MMP2等mRNA和蛋白质的表达水平。结果:3个千金子二萜醇衍生物均呈剂量依赖性地抑制A549和H1299细胞的生长,且对正常细胞Beas-2B和16HBE细胞抑制作用较弱,具有一定的选择性杀伤作用。其中C-5苯甲酰化千金子二萜醇的活性最佳,作为后续实验的药物。与对照组相比,处理组的A549和H1299细胞克隆团明显变小且数目明显减少,相对迁移率明显降低,侵袭细胞数目明显减少(均P<0.05)。在mRNA水平上,integrinα2、integrinβ1、MMP2、MMP9、β-catenin、N-cadherin表达均降低,E-cadherin表达增高(均P<0.05);在蛋白质水平上,N-cadherin、β-catenin、MMP2和integrinαV表达均降低,E-cadherin表达增高(均P<0.05)。结论:本研究合成的千金子二萜醇衍生物抑制非小细胞肺癌的活性较好,其中C-5苯甲酰化千金子二萜醇可能通过调控上皮间质转化过程显著抑制非小细胞肺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。

大戟二萜醇酯对大鼠颈上神经节胆碱能传递的影响

应用细胞内生物电记录技术观察了两种大戟二萜醇酯对大鼠颈上神经节胆碱能传递的影响.灌流5或10μmol/L 的4β-大戟二萜醇-12,13-双丁酯(PDB)增大膜电阻而不影响膜电位,对刺激节前神经诱发的快兴奋性突触后电位(f-EPSP)及外源性乙酰胆碱(ACh)引起的 ACh电位均有浓度依赖性的增强作用,并诱导自发性 EPSP,表明 PDB 通过突触前、后机制易化交感神经节的胆碱能传递.4β-大戟二萜醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯(PMA,10μmol/L)灌流30min 对神经节细胞的电生理性质及其胆碱能传递无明显影响.

甘遂饮片中巨大戟二萜醇的含量测定

目的建立甘遂饮片中3-O-（2,3-二甲基丁酰基）-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇（简称为DBDI）的含量测定方法。方法以DBDI为指标,采用HPLC-ELSD法对甘遂饮片进行测定,色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm）,流动相为甲醇-水作梯度洗脱,流速为1.1 ml/min,检测器为蒸发光散射检测器,柱温为35℃。结果建立了甘遂饮片中DBDI的HPLC-ELSD含量测定方法,DBDI在进样量为5.78~57.8μg的范围内（r=0.999 7）,进样量的常用对数值与峰面积的常用对数值呈良好的线性关系,平均回收率为97.94%,RSD为2.50%,另外对6批生甘遂和9批制甘遂饮片进行了含量测定。结论采用HPLC-ELSD法测定甘遂饮片中DBDI的含量,方法简便,重复性好,可作为甘遂饮片的质量控制方法。

千金子二萜醇通过NF-κB通路影响肾癌小鼠MMP-2、MMP-9的表达

目的分析千金子二萜醇对肾癌小鼠基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响及其机制。方法30只6~8周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为模型组、千金子二萜醇(Lathyrol)实验组(千金子给药组)和核转录因子(NF)-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组,每组10只。每只小鼠左侧腋下注射1.5×10^(6)个Renca肾癌细胞,千金子给药组中药(Lathyrol,20 mg/kg)灌胃3 w,模型组以相同体积生理盐水灌胃,结束前3 d PDTC组腹腔注射PDTC 50 mg/kg。每3 d检测1次小鼠移植瘤体积,绘制体积变化曲线;剥离皮下移植瘤组织,苏木素-伊红(HE)染色观察移植瘤组织的病理情况;Western印迹检测NF-κB P65的磷酸化水平,免疫组化检测MMP-2和MMP-9蛋白表达情况。结果与模型组相比,千金子给药组移植瘤体积增长缓慢,千金子给药组与PDTC组中NF-κb P-65蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-2,MMP-9表达水平降低。结论Lathyrol通过抑制NF-κB通路活性降低肾癌小鼠中MMP-2、MMP-9的表达。

千金子二萜醇调控TGF-β1/Smad通路影响肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达

目的:探讨千金子二萜醇调控TGF-β1/Smad通路影响肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达的机制。方法:建立肾癌移植瘤小鼠,分为模型组、实验组(千金子二萜醇组)和SB-431542组(TGF-β1/Smad通路抑制剂组),实验组小鼠灌胃给予20 mg/kg千金子二萜醇溶液,模型组灌胃给予等体积生理盐水,SB-431542组腹腔注射10 mg/kg SB-431542溶液,计算脾脏指数;Western blot检测Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达;ELISA检测肾癌移植瘤小鼠血清TNF-α和IL-17表达。结果:给药19 d后,与模型组相比,实验组和SB-431542组小鼠脾脏指数降低(P<0.05),Smad2/3蛋白表达升高(P<0.05),p-Smad2/3蛋白表达、TNF-α和IL-17水平明显降低(P<0.01)。结论:千金子二萜醇可通过调控TGF-β1/Smad通路活性降低肾癌小鼠TNF-α和IL-17表达。

基于网络药理学和分子对接研究千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的作用机制

目的运用网络药理学和分子对接探讨千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在作用机制。方法选取千金子中7种代表性二萜醇酯类成分为研究对象,综合运用SwissTargetPrediction、SEA、OMIM、Gene Cards数据库筛选及预测千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在靶点。通过STRING数据库和Cytoscape 3.7.2软件来建立PPI网络。使用DAVID数据库对筛选出的靶点进行基因本体(GO)生物学过程分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,并应用Cytoscape 3.7.2构建“成分-靶点-通路”网络,最后对千金子二萜醇酯类成分与关键靶蛋白进行分子对接验证。结果7种千金子二萜醇酯类成分涉及252个作用靶点,筛选得到75个治疗白血病的潜在靶点,PPI核心网络表明治疗白血病的关键靶点为CDK1、CDK2、CCNA2,基因富集分析及“成分-靶点-通路”网络图显示千金子二萜醇酯类成分可能通过调节PI3K-Akt、ErbB、p53等信号通路来发挥对白血病的治疗作用。结论本研究表明千金子二萜醇酯类成分可能通过调节细胞凋亡、增殖分化、转录、细胞周期等多种途径来治疗白血病,诠释了中药通过多成分、多靶点、多途径治疗疾病的研究思路,为进一步深入研究千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的作用机制提供了科学依据。

不同晒晾烟品种西柏烷二萜醇的研究

为客观评价不同晒晾烟品种的西柏烷二萜醇含量,采用气质联用法对6个不同地区11个晒晾烟品种的西柏烷二萜醇含量进行了检测与分析。结果表明:(1)不同品种之间的西柏烷二萜醇含量大小顺序为枇杷叶>杨梅烟>黑烟>寸三皮>麻阳红>小柳叶>烤烟>二黑烟>马耳烟>K16>黑老>公会晒烟,并通过聚类分析将11个晒晾烟品种分成了高含量、中含量和低含量三类。(2)不同类型晒晾烟的西柏烷二萜醇含量大小顺序为浅晒红烟>晒红烟>深晒红烟>晒黄烟。(3)不同部位之间,除马耳烟外,其余品种西柏烷二萜醇含量均表现为中部叶大于上部叶。(4)通过线性相关分析发现,α-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇与β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的含量存在一定的线性相关性,决定系数(R2)为0.9576。

千金子二萜醇调控TGF-β/Smad4通路调节肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡

目的探究千金子二萜醇对肾癌小鼠Th1/Th2免疫平衡的影响及转化生长因子(TGF)-β/Smad4信号通路调控作用的可能机制。方法12只BALB/c小鼠随机分为模型组、实验组(模型+千金子二萜醇)和TGF-β/Smad通路抑制剂组(模型+LY2109761),通过接种肾癌Renca细胞构建肾癌小鼠模型。灌胃21 d后,取小鼠瘤块和脾脏组织并计算各组瘤块体积增长率,Western印迹检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ和Smad4蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平,RT-qPCR检测小鼠脾脏TGF-βRⅡ、Smad4、IL-4和IFN-γmRNA表达水平。结果与模型组相比,实验组肿瘤体积增长率、TGF-βRⅡ、Smad4 mRNA和蛋白表达显著降低,IL-4水平显著降低,IFN-γ水平显著升高,LY2109761组TGF-βRⅡmRNA表达显著升高,蛋白水平显著降低,Smad4蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。结论千金子二萜醇通过调控TGF-β/Smad4信号通路抑制肾癌模型小鼠的肿瘤生长,并调节Th1/Th2免疫平衡。

Box-Behnken响应面法结合熵权法优化千金子二萜醇酯类成分的闪式提取工艺

以千金子中3种主要的二萜醇酯类成分提取率的综合评分为评价指标,通过Box-Behnken响应面法结合熵权法对千金子二萜醇酯类成分的闪式提取工艺进行优化。确定最佳提取工艺为:料液比1∶14(g∶mL)、提取时间2.5 min、提取电压130 V,在此条件下,3种二萜醇酯类成分提取率的综合评分为0.370,与模拟预测值(0.396)接近。该闪式提取工艺设计合理,可为千金子主要二萜醇酯类成分的快速高效提取提供一定的参考。

大戟二萜醇的化学机理——印度乌桕,日本乌桕中致癌物质的形成及其它

一、Phorbol的简解大戟二萜醇(Phorbol)属四环二萜类植物成分,得自大戟科(Euphorbiaceae)和瑞香科(Thymeleaceae)中的许多植物体。其分子式为C_(20)H_(28)O_(?)分子量为364.44。其中C—65.96％,H—7.74％,O—26.34％。四十五年前,例如从大戟科巴豆属的豆巴(Croton、tiglum L)种子中的一种脂肪油——巴豆油含此种化学成份,用作剧烈的泻下药,也作为发红剂和抗刺激剂(Counterirritant)用。但在1941年发现,其显示辅致癌剂(Cocarcinogens)的活性,因而得知大戟二萜醇是巴豆油中某些具有助长肿瘤生长的化合物的母体。

中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的影响

目的探讨中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白(Skp)2表达的影响。方法建立肾癌786-0细胞移植瘤裸鼠模型,分为对照组和实验组,每组8只。对照组移植瘤裸鼠灌胃等体积的生理盐水,实验组移植瘤裸鼠灌胃20 mg/kg千金子二萜醇溶液,21 d后处死裸鼠,取出瘤体,然后采用免疫组化(SP)法检测Skp2的表达。结果两组Skp2在裸鼠的瘤体中表达率差异显著(P=0.04)。结论中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的表达有一定的抑制作用。

RP-HPLC法测定千金子中3种千金二萜醇酯的含量

目的:对千金子中千金子素L1(化合物Ⅰ)、千金子素L2(化合物Ⅱ)和千金子素L3(化合物Ⅲ)3种千金二萜醇酯进行含量测定。方法:采用反相高效液相色谱法,使用Prevail-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(75∶25),流速1.0mL·min-1,检测波长280nm,柱温25℃。结果:化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ进样量均在0.1～4.0μg范围内有良好的线性关系;相关系数r分别为0.9998,0.9999,0.9996;平均回收率(n=6)分别为97.9%(RSD为1.5%),100.9%(RSD为1.5%),99.6%(RSD为1.2%)。结论:本方法能够准确测定千金子中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3种千金二萜醇酯的含量。

基于UPLC-MS/MS技术的千金子制霜前后3种二萜醇酯类成分在大鼠体内的排泄动力学研究

目的:基于UPLC-MS/MS技术,研究大鼠灌胃千金子生品、霜品提取物后千金子素L_(1)、千金子素L_(2)和千金子素L_(3)的尿液及粪便的排泄动力学特征。方法:SD大鼠灌胃给予千金子生品、霜品提取物,收集不同时间段的尿液和粪便,采用建立的UPLC-MS/MS方法对千金子制霜前后3个二萜醇酯类成分的浓度进行测定,以DAS 2.0软件计算尿排泄动力学参数,绘制累积排泄率及排泄速率曲线,比较制霜前后的排泄动力学差异。结果:灌胃给药千金子提取物96 h后,千金子素L_(1)、L_(2)和L_(3)在尿液中的累积排泄率分别为0.009%、0.008%、0.009%,在粪便中的累积排泄率分别为16.05%、51.57%、36.33%;灌胃给药千金子霜提取物96 h后,千金子素L_(1)、L_(2)和L_(3)在尿液中的累积排泄率分别为0.014%、0.01%、0.011%,在粪便中的累积排泄率分别为27.32%、59.03%、35.97%。结论:千金子3个二萜醇酯类成分在体内主要通过粪便排泄,制霜后在尿液的半衰期t_(1/2)减小,消除速率常数k_(e)增大,其制霜后毒性减弱可能与药物从体内的排泄量增加、在体内蓄积减少有关。

甘遂中巨大戟萜醇型二萜酯类化学成分的研究

目的 分离鉴定甘遂 Euphorbia kansui中巨大戟萜醇 (ingenol)型二萜酯类化学成分。方法 运用波谱技术 ,尤其是 2 DNMR技术 (1 H- 1 HCOSY,HSQC,HMBC和 NOESY实验 )进行结构鉴定。结果 分离得到 6个巨大戟萜醇型二萜酯 ,确定了其中两个主要化合物的结构 ,分别为巨大戟萜醇 - 3- 2′E,4′Z癸二烯酯 - 2 0 -乙酸酯 [3- O- (2′E,4′Z- decadienoyl) - 2 0 - O- acetylingenol]( )和甘遂大戟萜酯 C(kansuiphorin C) ( )。结论 首次报道了 的全部 NMR数据和 的碳谱数据 ,并利用多种 2 DNMR技术对 和 的全部 NMR数据进行了归属。

鸡肠狼毒植物中曼西醇型二萜成分的研究

目的:研究鸡肠狼毒植物根中的二萜化学成分及其药理活性。方法:冷浸法提取总浸膏,硅胶层析法分离,现代光谱手段鉴定结构。结果:分离得到8个已知曼西醇型二萜,分别为Proliferin A(1)、Proliferin B(2)、Proliferin C(3)、Proliferin D(4)、Euphorprolitherin B(5)、Euphorprolitherin D(6)、SPr5(7)和14-desoxo-3-O-prorionyl-5,15-di-O-acetyl-7-O-nicotinoyl-myrsinol-14β-acetate(8)。应用光谱手段和与文献数据对照的方法鉴定了所有化合物的结构,进一步通过化合物1、2和4对人癌细胞的增殖抑制活性进行研究,结果表明化合物1对人卵巢癌细胞具有明显细胞毒性(IC507.7μmol/L)。结论:从鸡肠狼毒植物中分离得到的化合物Proliferin A是首个具有卵巢癌细胞A2780增殖抑制活性的曼西醇型二萜。

从小桐子油提取分离醇溶性二萜的工艺研究

采用甲醇萃取的方法提取分离小桐子油中醇溶性二萜和脂肪酸;在确定萃取温度和搅拌速率的基础上,探讨了液液比(甲醇/小桐子油)、搅拌时间和提取次数对二萜提取率的影响,分析了冷冻温度和时间与脂肪酸分离的关系;并建立了紫外分光光度法测定小桐子油中二萜的含量的方法。结果表明:当萃取温度30℃,搅拌速率120 r/min,搅拌时间20 min,萃取次数为4次,4次液液比(甲醇/小桐子油)依次为2.5、2.0、1.5和1.0时,萃取效率最佳。

绿柱虫二萜二醇A在手性位移试剂Eu(tfc)_3存在下的~1H—NMR研究

本文研究了在手性位移试剂Eu(tfc)_3存在下,绿柱虫二萜二醇A(clavudiol A)(⊥)中各甲基的化学位移变化,并对19-甲基和20-甲基的~1H-NMR进行了归属。