针刺强刺激对类痛经大鼠镇痛效应及二酰甘油/蛋白激酶C信号通路的影响

目的观察针刺强刺激对类痛经大鼠的镇痛效应及二酰甘油(DAG)/蛋白激酶C(PKC)信号通路的影响。方法40只雌性SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、针刺弱刺激组和针刺强刺激组,每组10只,适应性饲养7 d后,采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素注射法建立类痛经模型。其中,空白组与模型组不予针刺干预,针刺弱刺激组予Φ0.20 mm×1.5 mm揿针治疗,针刺强刺激组给予Φ0.25 mm×40 mm一次性针灸针进行深刺并行平补平泻手法,两组分别留针20 min后,观察大鼠的扭体反应。比较4组的扭体潜伏期和扭体评分,子宫平滑肌细胞内Ca 2+平均荧光强度(MFI),血清和子宫组织中的DAG水平,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平和PKCγ蛋白表达的变化。结果模型组的扭体潜伏期短于空白组[(251±90)s比(505±76)s]、扭体评分高于空白组[(34.2±25.0)分比(5.9±2.1)分](P<0.01);针刺弱刺激组、针刺强刺激组的扭体潜伏期长于模型组[(354±109)s、(513±76)s比(251±90)s](P<0.05或P<0.01),针刺强刺激组的扭体评分低于模型组[(9.9±6.6)分比(34.2±25.0)分](P<0.01);针刺强刺激组的扭体潜伏期长于针刺弱刺激组(P<0.01)、扭体评分低于针刺弱刺激组[(9.9±6.6)分比(23.1±11.9)分](P<0.05)。模型组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI显著高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI均明显低于模型组(578±134、588±288比1099±872)(P<0.05)。模型组血清和子宫组织中的DAG水平均明显高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组血清和子宫组织中的DAG水平均明显低于模型组[(8.5±2.6)μg/L、(9.0±3.6)μg/L比(14.4±3.1)μg/L,(6.5±3.4)μg/L、(7.3±2.6)μg/L比(13.4±4.2)μg/L](P<0.01)。模型组的CaMKⅡ水平显著低于空白组(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平高于空白组(P<0.01);针刺强刺激组的CaMKⅡ水平显著高于模型组(0.24±0.07比0.17±0.07)(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平明显低于模型组(0.39±0.10比0.71±0.18)(P<0.01);针刺强刺激组的PKCγ蛋白表达水平低于针刺弱刺激组(0.39±0.10比0.62±0.22)(P<0.05)。结论针刺强刺激类痛经大鼠三阴交穴能更好地缓解大鼠的腹痛,且镇痛效应优于针刺弱刺激,其机制可能与DAG/PKC通路引起子宫平滑肌细胞内Ca 2+水平降低相关。

二酰甘油激酶α mRNA在肝癌中的表达

目的检测二酰甘油激酶α（DGKα）mRNA在肝癌中的表达，探讨DGKα在肝癌发生、发展过程中的作用。方法应用半定量RT-PCR和原位杂交法检测DGKα mRNA在30例肝癌、癌周肝硬化及5例正常肝组织中的相对表达量及分布。结果半定量RT-PCR检测结果显示：DGKα mRNA的表达水平在肝癌组织（0．798±0317）和正常肝组织（0．908±0．425）显著高于癌周肝硬化组织（0．205±0．102），差异有统计学意义（P〈0．05）；原位杂交染色显示：DGKα mRNA在肝癌组织和癌周肝硬化组织主要分布于肝细胞胞质，阳性细胞数分别为（57．6±6．3）个／mm^2和（26．3±4．9）个／mm^2；在正常肝组织分布于肝细胞核，阳性细胞数为（69．8±8．7）个／mm^2；癌周肝硬化组织与肝癌组织、正常肝组织之间阳性细胞数差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DGKα在肝癌的不同时期的表达变化，很可能与肝癌的发生、发展密切相关。

二酰甘油激酶ζ功能的研究进展

二酰甘油激酶ζ(DGKZ)作为Ⅳ型二酰甘油激酶家族(DGKs)同工酶的一种,在细胞的生命过程中发挥重要作用。DGKZ基因在真核生物的脑、骨、心脏和免疫系统中表达,并与肿瘤的发生发展密切相关。本文将从这四部分对该基因目前的研究进展进行综述。

二酰甘油激酶α、蛋白激酶C在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的研究肝癌组织中二酰甘油激酶α（DGKα）和蛋白激酶C（PKC）的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测DGKα在60例肝癌组织、癌旁组织及10例正常肝组织中的表达，统计分析DGKα的表达与临床病理因素的关系。结果DGK仅和PKC在正常肝组织的阳性表达率最高，分别为90．0％（9／10）和100．0％（10／10），在肝癌组织中分别为81．7％（49／60）和71．7％（43／60），在癌旁组织中明显降低，分别为58．3％（35／60）和61．7％（37／60），三种肝组织中DGKα及KFC蛋白的表达阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）。正常肝组织、癌组织及癌旁组织中两蛋白表达部位逐渐从肝细胞胞质和（或）细胞核移至胞膜。肝癌组织中DGKα与PKC表达呈正相关（r=0．495．P〈0．05）。DGKα阳性表达率与原发性肝癌的分化类型、是否有门静脉癌栓和TNM分期有关（均P〈0．05）。结论分期越晚、分化越差的肝癌中DGKα的活性越强，DGKα可能促进了原发性肝癌的病理进程。

二酰甘油激酶家族在神经系统中的功能与相关疾病研究进展

二酰甘油激酶(DGKs)家族主要通过磷酸化甘油二酯(DAG)为磷脂酸来调节细胞内二者的平衡从而参与细胞活动,该蛋白家族的一个重要特性是其不同亚型在中枢神经系统具有各自的时空表达特异性和疾病相关性。目前已在哺乳动物体内鉴定出10种DGKs亚型,根据调控域的不同将其主要分为5种亚型。根据其亚型特异性发现这些不同同工酶在脑内的表达模式和功能各有不同,参与神经元细胞周期调节、形态发育、突触可塑性以及神经元刺激等过程,同时与特定神经精神疾病如癫痫、双向情感障碍、注意缺陷/多动障碍和亨廷顿病等相关。

基于DGKα-PA信号轴探讨扶正祛邪方对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响

目的探讨扶正祛邪方调节DGKα-PA信号轴对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将H292细胞分为对照组和扶正祛邪方低、中、高浓度组,扶正祛邪方低、中、高浓度组分别予3、6、12 mg/mL扶正祛邪方干预48 h,对照组予等体积培养基常规培养。克隆形成实验观察H292细胞增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移和侵袭情况,ELISA检测细胞磷脂酸(PA)含量,Western blot检测细胞二酰甘油激酶α(DGKα)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)表达。结果与对照组比较,扶正祛邪方低、中、高浓度组细胞克隆形成数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞PA含量明显减少(P<0.01),DGKα、p-AKT、mTOR蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),且以扶正祛邪方高浓度组抑制作用最明显(P<0.01)。结论扶正祛邪方可能通过DGKα-PA信号轴抑制人肺癌H292细胞增殖、迁移,其机制与抑制下游AKT/mTOR信号通路有关。

DGKZ基因沉默条件下人骨肉瘤细胞芯片的生物信息学分析

目的基于生物信息学方法分析二酰甘油激酶ζ(diacylglycerol kinase zeta,DGKZ)基因沉默的人骨肉瘤细胞芯片并探寻其分子机制。方法从GEO数据库中获取人骨肉瘤细胞芯片,在R软件中筛选DGKZ沉默处理组与对照组的差异基因(differential expression genes,DEGs);DEGs提交至DAVID数据库进行基因功能与通路富集分析;利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络,寻找网络结构中的核心基因并预测其转录因子。结果共筛选出368个DEGs,其中包含105个上调的基因与263个下调的基因。GO富集分析结果表明DEGs主要富集的生物学过程有成骨细胞分化的负调控、血管生成、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的负调控、脂肪细胞分化的正调控、细胞周期和Wnt信号通路;KEGG通路富集分析结果表明DEGs主要涉及的通路有TGF-β信号转导通路、癌症通路、胰腺癌、致癌病毒、MAPK信号转导通路以及代谢通路。经STRING数据库与Cytoscape软件找出度值前10的核心基因有SIRT1、EP300、PTGS2、BMP2、HIF1A、RB1、HIST1H2BO、NT5E、H1F0、HIST1H2AC,核心基因通过iRegulon插件预测的转录因子中标准化富集分数最高的是YY1。结论在DGKZ基因沉默条件下,转录因子YY1及相关靶基因能在骨肉瘤中发挥重要作用。

DGKζ的结构功能及研究进展

二酰甘油激酶家族(diacylglycerol kinases,DGKs)是一类可将二酰甘油(diacylglycerol,DAG)磷酸化生成磷脂酸(phosphatidic acid,PA)的脂质激酶,除影响脂质代谢外,DGKs还可调控多种病理生理状态下的信号级联反应。本文重点介绍其家族成员二酰甘油激酶ζ(diacylglycerol kinase ζ,DGKζ)的结构功能和疾病相关研究进展。

DGKs与肿瘤的关系及作用机制研究进展

二酰甘油激酶家族(DGKs)通过调节两种脂质信号(甘油二酯和磷脂酸)之间的平衡在信号转导中起重要作用。哺乳动物的DGKs作为由十种亚型构成的蛋白质家族,根据它们的结构特征将其分为五型。这些亚型可以通过已知和/或预测功能的各种调节结构域,清楚地表明其不同的功能和调节机制。目前大量的研究表明DGKs可通过调节机体的免疫功能及调控多种肿瘤相关信号通路从而对肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移起作用。本文就DGKs与肿瘤之间关系及作用机制进行综述,以期为肿瘤的治疗提供新的思路和方法。

植物PLC-DGK/PA途径介导的渗透胁迫应答反应

肌醇磷脂依赖的磷脂酶C(PLC)是经典肌醇磷脂信号系统的重要组分,它分解二磷酸磷脂酰肌醇分子(PIP2)产生双信使IP3和DAG分子。动物细胞中DAG激活蛋白激酶C(PKC)参与调节多种细胞功能。植物基因组中缺乏PKC的同源序列,DAG被二酰甘油激酶(DGK)进一步磷酸化形成磷脂酸(PA),形成新的植物特有的第二信使分子。酶蛋白PLC和DGK及其作用的底物和产物形成植物特色的信号途径,该信号途径在植物对非生物和生物胁迫的反应中发挥重要作用。该文从蛋白信号分子的表达特征和脂质信号分子的含量变化等两个方面综述了植物特色的肌醇信号途径PLC-DGK/PA在应答渗透胁迫反应中的作用。除了PLC-DG活性外,PA也可由磷脂酶D(PLD)产生。该文还对两种途径产生的PA进行了讨论。