Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶激活因子基因的克隆、测序与功能鉴定

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从L.diolivorans基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以E.coliBL21为宿主,进行诱导表达.表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:gldGH表达产生68ku、13ku两个蛋白质,它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化,纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325ku的蛋白质聚合体,由这两个蛋白质以等摩尔量组成,因此假定的激活因子可能为α4β4亚基结构.以L.diolivorans二醇脱水酶为对象,进行激活实验,结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶的分离纯化与酶学性质

1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一种重要的化工和医药中间体原料，是良好的溶剂、抗冻剂或保护剂，是聚酯——聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）和聚氨酯的单体，可在地毯、纺织、工程塑料等领域中广泛应用，也可用于食品、化妆品和制药等行业食品．当前化工合成是生产1，3-丙二醇的主要方法，

甘油脱水酶和二醇脱水酶β亚基生物信息学分析

依赖辅酶B12的甘油脱水酶和二醇脱水酶是同工酶。它们不仅氨基酸序列和蛋白质折叠方式非常相似,而且有着相同的催化机制。该文在同一菌株中将编码甘油脱水酶β亚基基因和编码二醇脱水酶β亚基基因片段分别克隆至T载体,从而获得两段核苷酸片段序列,将pddB序列提交Genbank数据库,获登陆号为DQ483052。同时结合PDB数据库中甘油脱水酶和二醇脱水酶的晶体结构,该文用生物信息学方法对所测序列进行了初步分析,并对两种同工酶的β亚基对脱水酶与辅酶的亲和力进行了比较。

丘状乳杆菌中二醇脱水酶激活因子pduGH的克隆与功能鉴定

以丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)基因组DNA为模版,通过PCR方法得到二醇脱水酶激活因子基因pduGH,连接到表达载体pET30a上,得到重组质粒pET-pduGH。将此重组质粒转化到Escherichia.coli Rosseta(DE3)中进行表达,重组菌株SDS-PAGE结果显示有明显的64.5 ku和12.4 ku两条特异性蛋白。表达的目的蛋白大多为不溶性的包涵体,经变性、复性后得到部分可溶性蛋白。在辅酶B12,ATP,Mg2+或Mn2+存在下,以Clostridium pasteurianum甘油脱水酶为对象进行激活实验,结果证实,重组质粒pET-pduGH的表达产物具有甘油脱水酶激活活性。