BVDV与IBRV二重二温式PCR检测方法的建立及应用

针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5′非翻译区(5′UTR)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gB基因分别选取2对引物,建立这2种病毒的二重二温式PCR检测方法,该方法特异性高,可检出BVDV与IBRV,与牛轮状病毒等均无交叉反应;对BVDV与IBRV的最低检测质量浓度为1.32、0.047 mg/L。使用该方法对采集自宁夏地区的113份具有BVDV与IBRV临床症状的牛的粪便进行检测,结果显示BVDV与IBRV的阳性检出率分别为12.39%、22.12%,2种病原体混合感染的阳性检出率为7.08%。与单重二温式PCR检测结果进行比较,得出BVDV阳性符合率为93.33%,IBRV阳性符合率为92.53%,2种病原体混合感染的阳性符合率为100%。

牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。