猪流行性腹泻病毒云南流行毒株N基因序列分析

为了解近年来云南省PEDV流行毒株的变异情况，选取了采集自昆明西翥、富源、厂口、玉溪红塔等地方猪场的不同时间的6份PEDV阳性水样腹泻粪便样品，进行N基因的RT—PCR扩增、测序及序列分析。结果表明，来自同一猪场不同流行时间的TY1、TY2、TY3毒株之间，TY1与TY2毒株N基因核苷酸序列完全相同，仅TY3毒株在第80和第1238位置处的碱基发生了变异（A—C、C—T），TY3与TY1、TY2的毒株N基因核苷酸序列的同源性达99．8％。云南6个流行毒株TY1、TY2、TY3、YXHT、FYDH及Changkou的核苷酸序列的同源性为99．2％～100％。云南6个流行毒株与2014年德国毒株GER—L00721—2014（Accession：LM645057．1）、法国毒株KR011756-FR001—2014（Accession：KR011756．1）及我国2010年河北毒株JF700126．1-HB—HS-2010（Accession：LM645057．1）的核苷酸序列同源性为98．6％～100％，并同属于一个进化分支。云南6个流行毒株与CV777经典疫苗毒株之间的同源性仅为95．2％～95．5％，存在一定的变异，这或许是云南省猪群经PEDV疫苗免疫后保护率较低的原因之一。

靶向survivin利用RNA干扰技术影响云南个旧肺鳞癌细胞株YTMLC凋亡的初步研究

目的检测云南个旧肺鳞癌细胞株YTMLC细胞内源凋亡抑制因子survivin基因的表达以及促进YTMLC细胞凋亡的情况。方法构建和转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2至YTMLC细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测YTMLC细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA-negative非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到sur-vivin基因mRNA转录明显减少,抑制率为80.60%和70.09%;通过PI-AnnexinV双染法检测YTMLC细胞的凋亡分别达(33.42±2.42)%(P<0.01)和(20.09±1.32)%(P<0.01)。结论重组质粒pshR-NA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制YTMLC细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进YTMLC细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。

副猪嗜血杆菌云南本地株的分离及鉴定

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的主要危害猪的一种急性、热性传染病。本试验对疑似副猪嗜血杆菌感染病例病料进行细菌分离培养,对分离菌株进行生化试验鉴定,结果可见菌落有卫星现象,革兰氏阴性的细小杆菌,分离菌株能发酵葡萄糖、乳糖,产酸不产气,不发酵蔗糖、木糖、甘露醇,不产生靛基质,不分解尿素,不分解精氨酸,过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性。证明分离菌株为副猪嗜血杆菌。

稻瘟病菌群体的分子遗传学研究——广东省与云南省稻瘟病菌群体遗传及致病型结构的比较分析

通过基于SRAP标记的分子指纹分析法对由广东省和云南省各40个菌株构成的试验群体进行了遗传结构分析。在相似性系数取0.83时,80个供试菌株被分为25个宗谱;其中广东群体9个宗谱,宗谱频率为22.5%;云南群体16个宗谱,宗谱频率为40.0%,由此说明,后者比前者的遗传多样性高。有趣的是,在25个宗谱中并不存在两个群体共有的宗谱,由此推测它们之间存在明显的遗传特异性或异质性。另一方面,利用中国、日本和IRRI的3套鉴别品种分别对80个供试菌株进行了致病型结构分析。结果表明,在上述3套鉴别品种中,广东群体分别被划分为16、30和20个致病型;而云南群体则分别被划分为12、31和16个致病型。由此说明,两个群体之间遗传多样性方面的差异并没有反映于致病型多样性上。但是,通过对两个群体致病型结构的比较分析表明,两个群体之间存在高度的致病型特异性,这一特性则充分地反映于两者的遗传特异性上。研究结果表明,从多样性和特异性这两方面来进行病原菌群体遗传宗谱和致病型结构分析可能更加合理和全面一些。

基于线粒体细胞色素b基因的细颈囊尾蚴种群遗传多样性研究

为探讨我国细颈囊尾蚴种群之间的遗传相似性及与其他带科带属绦虫的亲缘关系,用线粒体细胞色素b(Cyt b)基因全序列研究了分离自我国四川和云南2省7地区猪、山羊和绵羊共33个细颈囊尾蚴的遗传变异,并用MEGA 4.0程序NJ法和PAUP 4.0程序MP法绘制种系发育树。本研究结果显示:细颈囊尾蚴分离株的Cyt b基因全长为1 068bp,共检测到22个单倍型,单倍型间核苷酸相似性较高(97.3%～99.9%),其与带科带属其他5种绦虫的相似性均在82%以下。系统发育树显示,7个不同地域的细颈囊尾蚴聚为一支,分为3个亚群,且与地理区域、宿主没有直接的相关性,呈现混杂的分布格局,未形成明显的地理分支或宿主分支。研究结果表明:细颈囊尾蚴Cyt b基因存在一定的遗传差异,但种内相对保守,与其他带科绦虫种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记,并为细颈囊尾蚴的种群遗传学研究及其与其他带科绦虫病的鉴别诊断的建立奠定基础。

云南地方株PRRSV感染对猪细胞因子表达的影响

为了探究云南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)毒株对猪部分细胞因子的影响,试验用Marc-145细胞培养云南地方株YN-2011PRRSV毒株,攻毒组仔猪通过口服和腹腔注射方式感染毒株,对照组仔猪以相同方式用生理盐水进行处理,观察仔猪体温、临床状态,分别在感染后第3,7,14,20,30天采集仔猪血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中PRRSV抗体、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-α(IFN-α)的水平,荧光定量PCR检测血清中PRRSV的病毒载量。结果表明:攻毒组仔猪出现精神沉郁、腹泻、耳朵发红、皮肤发绀等猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)临床症状;血清中PRRSV抗体水平在感染后第20天极显著上升且达到抗体阳性临界值(P<0. 01);TNF-α水平在感染后第3,7,14,20,30天高于对照组,除第14天外均差异极显著(P<0. 01);IL-1β及IFN-α水平在各时间点均高于对照组且差异极显著(P <0. 01),二者在感染后第7天达到最高水平;在感染后第7天攻毒组仔猪出现病毒血症,第14天病毒血症消失。说明云南地方株PRRSV YN-2011对仔猪有致病力,使仔猪PRRSV抗体及细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-α水平均明显上调。