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中国红豆杉细胞经重复诱导和蔗糖饲喂后云南紫杉烷C生产的相应基因表达变化
被引量:
5
1
作者
高明波
张卫
+2 位作者
李兴泰
阮成江
范圣第
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期101-107,共7页
红豆杉悬浮培养细胞具有可持续生产抗癌药物紫杉醇及其他紫杉烷的潜力。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的次生代谢产物。为促使代谢前体由生成其他紫杉烷的代谢支路转到生产紫杉醇,实验采用实时定量PCR技术(RQ-PCR)...
红豆杉悬浮培养细胞具有可持续生产抗癌药物紫杉醇及其他紫杉烷的潜力。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的次生代谢产物。为促使代谢前体由生成其他紫杉烷的代谢支路转到生产紫杉醇,实验采用实时定量PCR技术(RQ-PCR)揭示细胞培养过程中紫杉醇及紫杉烷合成关键基因的动态变化。在细胞培养的第7天和第12天,以100μmol/L 2,3-二羟丙基茉莉酸(DHPJA)进行诱导,同时在第7天饲喂20 g/L的蔗糖,在此过程中考察6个关键基因(TASY,TDAT,T5αH,TαH,T10βH和T14βH)的表达变化。上述联合调控手段使得Tc产量在第1次诱导8 d后达(554.46±21.28)mg/L,第2次诱导9 d后高达(997.72±1.51)mg/L。代谢早期基因TASY和TDAT在第1次诱导后表达量分别提高了182和98倍,在第2次诱导后表达量分别提高了208和131倍。在每次诱导后基因表达量提高约持续24 h,之后下降。其他4个基因(T5αH、TαH、T10βH和T14βH)的情况有所不同。基因TαH在2次诱导后表达量分别提高了3 061和1 016倍。其他3个基因T5αH、T10βH、T14βH在第1次诱导后表达量分别提高13、38、20倍,在第2次诱导后分别提高7、16、6倍。RQ-PCR结果表明基因表达和Tc积累之间存在紧密相关性:基因表达的变化与Tc产量的变化相一致,诱导可提高6个基因的表达量。基因的高表达随着培养过程逐渐衰减,再次诱导可再次促使基因的高表达。
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关键词
中国红豆杉
云南紫杉烷c
2
3-二羟丙基茉莉酸
实时定量P
c
R
原文传递
原位吸附和茉莉酸甲酯联合使用显著提高中国红豆杉细胞云南紫杉烷c的生产
被引量:
3
2
作者
高明波
张卫
虞星炬
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期223-229,共7页
本实验所用的中国红豆杉细胞悬浮培养体系中,云南紫杉烷c(Tc)是主要的次生代谢产物,该化合物有类神经生长因子活性,提高其产量是进一步规模化生产的前提。本研究考察了原位吸附和茉莉酸甲酯(MJA)联合调控提高Tc产量的可能性。在培养的第...
本实验所用的中国红豆杉细胞悬浮培养体系中,云南紫杉烷c(Tc)是主要的次生代谢产物,该化合物有类神经生长因子活性,提高其产量是进一步规模化生产的前提。本研究考察了原位吸附和茉莉酸甲酯(MJA)联合调控提高Tc产量的可能性。在培养的第7天加入浓度为100μmol/L的MJA虽然会使细胞的生物量下降10%~30%,但是单位细胞内Tc含量和Tc产量均有显著提高,分别是对照的3.6和3.3倍。吸附剂XAD-7在不同时间加入对Tc的合成影响显著。在培养的第7天同时加入100μmol/L的MJA和100g/L的XAD-7会使细胞生物量增加,Tc产量显著提高。培养到第21天,Tc产量达477.4mg/L,为对照的6.3倍,为只加MJA的1.9倍,其中94%的Tc被树脂吸附。实验结果表明,在MJA诱导高表达的过程中,吸附剂XAD-7的加入使细胞内代谢产物外泌,浓度降低,减轻产物反馈抑制现象,从而大幅度提高代谢物产量,有较好的生产前景。
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关键词
中国红豆杉
细胞悬浮培养
茉莉酸甲酯
XAD-7
云南紫杉烷c
原文传递
联合调控对中国红豆杉细胞关键酶基因表达的影响
被引量:
4
3
作者
高明波
张卫
+2 位作者
李兴泰
阮成江
范圣第
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期31-36,共6页
红豆杉悬浮培养细胞可以持续提供抗癌药物紫杉醇及一些紫杉烷类。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的紫杉烷。为了更理性地调控紫杉醇或有用紫杉烷的生产,有必要深入了解其生物合成过程。采用实时定量PCR(Real-time Qu...
红豆杉悬浮培养细胞可以持续提供抗癌药物紫杉醇及一些紫杉烷类。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的紫杉烷。为了更理性地调控紫杉醇或有用紫杉烷的生产,有必要深入了解其生物合成过程。采用实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR,即RQPCR)技术考察经调控后紫杉醇及紫杉烷代谢中关键酶基因—TASY,T5αH,TDAT,T10βH,TαH,T14βH表达水平的变化。在细胞培养的第7天和12天,分别以100μmol/L2,3-二羟丙基茉莉酸(DHPJA)诱导,同时在细胞培养第7天进行20g/L蔗糖饲喂、100g/LXAD-7HP的原位吸附。该联合调控处理使得细胞培养第30天时,Tc产量高达1517±37mg/L,是对照处理的11.1倍,是DHPJA重复诱导联合蔗糖饲喂处理的1.7倍。RQ-PCR结果显示:DHPJA的加入可使6个基因表达水平显著提高,但在12小时后快速下降,需补充DHPJA以再次提高基因表达水平。吸附剂同时引入会延缓基因表达水平的提高速度,但却能维持基因表达处于一个较高的水平,表现为在细胞培养中后期,基因表达水平将显著高于无吸附剂的调控体系。与13α-羟化相对应的TαH基因有所不同,吸附剂的存在更显著地抑制其表达,但仍有维持表达的功能。
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关键词
中国红豆杉
云南紫杉烷c
2
3-二羟丙基茉莉酸
XAD-7HP
实时定量P
c
R
原文传递
题名
中国红豆杉细胞经重复诱导和蔗糖饲喂后云南紫杉烷C生产的相应基因表达变化
被引量:
5
1
作者
高明波
张卫
李兴泰
阮成江
范圣第
机构
生物化学工程国家民委-教育部重点实验室
大连民族学院生命科学学院
澳大利亚Flinders大学海洋分子生物过程及生物产品实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期101-107,共7页
基金
National Natural Science Foundation of China(No.20676130)~~
文摘
红豆杉悬浮培养细胞具有可持续生产抗癌药物紫杉醇及其他紫杉烷的潜力。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的次生代谢产物。为促使代谢前体由生成其他紫杉烷的代谢支路转到生产紫杉醇,实验采用实时定量PCR技术(RQ-PCR)揭示细胞培养过程中紫杉醇及紫杉烷合成关键基因的动态变化。在细胞培养的第7天和第12天,以100μmol/L 2,3-二羟丙基茉莉酸(DHPJA)进行诱导,同时在第7天饲喂20 g/L的蔗糖,在此过程中考察6个关键基因(TASY,TDAT,T5αH,TαH,T10βH和T14βH)的表达变化。上述联合调控手段使得Tc产量在第1次诱导8 d后达(554.46±21.28)mg/L,第2次诱导9 d后高达(997.72±1.51)mg/L。代谢早期基因TASY和TDAT在第1次诱导后表达量分别提高了182和98倍,在第2次诱导后表达量分别提高了208和131倍。在每次诱导后基因表达量提高约持续24 h,之后下降。其他4个基因(T5αH、TαH、T10βH和T14βH)的情况有所不同。基因TαH在2次诱导后表达量分别提高了3 061和1 016倍。其他3个基因T5αH、T10βH、T14βH在第1次诱导后表达量分别提高13、38、20倍,在第2次诱导后分别提高7、16、6倍。RQ-PCR结果表明基因表达和Tc积累之间存在紧密相关性:基因表达的变化与Tc产量的变化相一致,诱导可提高6个基因的表达量。基因的高表达随着培养过程逐渐衰减,再次诱导可再次促使基因的高表达。
关键词
中国红豆杉
云南紫杉烷c
2
3-二羟丙基茉莉酸
实时定量P
c
R
Keywords
Taxus
c
hinensis
Taxuyunnanine
c
2
3-dihydroxylpropanyl jasmonate
Real-time Quantitative P
c
R
分类号
Q943.1 [生物学—植物学]
原文传递
题名
原位吸附和茉莉酸甲酯联合使用显著提高中国红豆杉细胞云南紫杉烷c的生产
被引量:
3
2
作者
高明波
张卫
虞星炬
机构
中国科学院大连化学物理研究所海洋生物产品工程组
中国科学院研究生院
大连民族学院生命科学学院
澳大利亚Flinders大学海洋分子生物过程及生物产品实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期223-229,共7页
文摘
本实验所用的中国红豆杉细胞悬浮培养体系中,云南紫杉烷c(Tc)是主要的次生代谢产物,该化合物有类神经生长因子活性,提高其产量是进一步规模化生产的前提。本研究考察了原位吸附和茉莉酸甲酯(MJA)联合调控提高Tc产量的可能性。在培养的第7天加入浓度为100μmol/L的MJA虽然会使细胞的生物量下降10%~30%,但是单位细胞内Tc含量和Tc产量均有显著提高,分别是对照的3.6和3.3倍。吸附剂XAD-7在不同时间加入对Tc的合成影响显著。在培养的第7天同时加入100μmol/L的MJA和100g/L的XAD-7会使细胞生物量增加,Tc产量显著提高。培养到第21天,Tc产量达477.4mg/L,为对照的6.3倍,为只加MJA的1.9倍,其中94%的Tc被树脂吸附。实验结果表明,在MJA诱导高表达的过程中,吸附剂XAD-7的加入使细胞内代谢产物外泌,浓度降低,减轻产物反馈抑制现象,从而大幅度提高代谢物产量,有较好的生产前景。
关键词
中国红豆杉
细胞悬浮培养
茉莉酸甲酯
XAD-7
云南紫杉烷c
Keywords
Taxus
c
hinensis
c
ell suspension
c
ulture
methyl jasmonate
XAD-7
taxuyunnanine
c
分类号
S791.49 [农业科学—林木遗传育种]
原文传递
题名
联合调控对中国红豆杉细胞关键酶基因表达的影响
被引量:
4
3
作者
高明波
张卫
李兴泰
阮成江
范圣第
机构
生物化学工程国家民委一教育部重点实验室
大连民族学院生命科学学院
澳大利亚Flinders大学海洋分子生物过程及生物产品实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期31-36,共6页
基金
国家自然科学基金(20676130)资助项目
文摘
红豆杉悬浮培养细胞可以持续提供抗癌药物紫杉醇及一些紫杉烷类。在中国红豆杉悬浮培养细胞中,云南紫杉烷C(Tc)是主要的紫杉烷。为了更理性地调控紫杉醇或有用紫杉烷的生产,有必要深入了解其生物合成过程。采用实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR,即RQPCR)技术考察经调控后紫杉醇及紫杉烷代谢中关键酶基因—TASY,T5αH,TDAT,T10βH,TαH,T14βH表达水平的变化。在细胞培养的第7天和12天,分别以100μmol/L2,3-二羟丙基茉莉酸(DHPJA)诱导,同时在细胞培养第7天进行20g/L蔗糖饲喂、100g/LXAD-7HP的原位吸附。该联合调控处理使得细胞培养第30天时,Tc产量高达1517±37mg/L,是对照处理的11.1倍,是DHPJA重复诱导联合蔗糖饲喂处理的1.7倍。RQ-PCR结果显示:DHPJA的加入可使6个基因表达水平显著提高,但在12小时后快速下降,需补充DHPJA以再次提高基因表达水平。吸附剂同时引入会延缓基因表达水平的提高速度,但却能维持基因表达处于一个较高的水平,表现为在细胞培养中后期,基因表达水平将显著高于无吸附剂的调控体系。与13α-羟化相对应的TαH基因有所不同,吸附剂的存在更显著地抑制其表达,但仍有维持表达的功能。
关键词
中国红豆杉
云南紫杉烷c
2
3-二羟丙基茉莉酸
XAD-7HP
实时定量P
c
R
Keywords
Taxus
c
hinensis Taxuyunnanine
c
DHPJA XAD-7HP RQ-P
c
R
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中国红豆杉细胞经重复诱导和蔗糖饲喂后云南紫杉烷C生产的相应基因表达变化
高明波
张卫
李兴泰
阮成江
范圣第
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
原文传递
2
原位吸附和茉莉酸甲酯联合使用显著提高中国红豆杉细胞云南紫杉烷c的生产
高明波
张卫
虞星炬
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
原文传递
3
联合调控对中国红豆杉细胞关键酶基因表达的影响
高明波
张卫
李兴泰
阮成江
范圣第
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
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