云斑尖塘鳢研究进展与前景展望

云斑尖塘鳢原产于东南亚地区,自20世纪80年代末引进我国,并实现人工繁育和养殖,已发展成为重要的名特优水产鱼类品种。随着养殖规模快速扩大,原有引进品种已经无法满足产业发展的需求,因此迫切需要加快云斑尖塘鳢种质资源研究,培育出能够适应人工配合饲料、生长速率快、抗寒、抗病能力强的适宜本土养殖新品种。本文综述了国内外半个世纪以来云斑尖塘鳢相关的研究进展;首先阐述了云斑尖塘鳢生殖和生长发育等生物学特征及研究进展,探讨了温度、盐度、溶解氧等环境条件对云斑尖塘鳢的影响;然后进一步总结和探讨了云斑尖塘鳢人工养殖领域的进展和面临的饲料、种质资源开发、病害防治等问题;同时也探讨了云斑尖塘鳢未来发展方向。

添加微生态制剂和碳源对云斑尖塘鳢生长性能及肌肉品质的影响

[目的]探究在养殖水体中添加微生态制剂和碳源在云斑尖塘鳢养殖生产中的应用效果,为改善云斑尖塘鳢养殖环境和肌肉品质提供基础数据。[方法]以葡萄糖为碳源,研究添加微生态制剂和碳源对云斑尖塘鳢生长、肌肉质构和营养组成、氨基酸、脂肪酸等营养成分的影响,并对其肌肉品质进行评价。[结果]在水体中添加微生态制剂和碳源显著促进了云斑尖塘鳢生长,增重率与对照组相比提高了25.19%;添加微生态制剂和碳源提高了云斑尖塘鳢肌肉中灰分含量,试验组比对照组提高了11.38%;显著降低了粗脂肪含量,试验组比对照组降低了39.74%;但对粗蛋白、水分含量和氨基酸组成与含量无显著影响(P>0.05);添加微生态制剂显著降低了云斑尖塘鳢肌肉中脂肪酸的含量(P<0.05),饱和脂肪酸与多不饱和脂肪酸均显著低于对照组(P<0.05),其中n-3系多不饱和脂肪酸差异最显著,降低了37.23%。[结论]在养殖水体中添加225 g/(hm^(2)·d)的微生态制剂和投喂饲料重量的1%葡萄糖可以促进云斑尖塘鳢的生长,降低云斑尖塘鳢肌肉中粗脂肪含量,增加粗灰分含量。

人工养殖云斑尖塘鳢的生长特性

研究了人工养殖条件下云斑尖塘鳢(Oxyeleotris marmoratus)的生长特性。结果表明:经过2个月的生长期,云斑尖塘鳢的平均体长从最初的(17.36±0.99)cm增加到(19.05±0.57)cm,体质量从(139.13±12.90)g增加到(205.50±15.78)g,体长增加10%,体质量增加48%。不同的养殖时间除对摄食率(FR)无显著影响外(P>0.05),对特定生长率(SGR)、饵料转化效率(FCR)和生长效率(GE)都有显著影响(P<0.05)。体长生长与时间表现为线性相关,体质量生长与时间表现为指数相关。云斑尖塘鳢体质量与体长之间呈幂函数关系,不同养殖时间下,幂指数b值都接近3,表明云斑尖塘鳢的体长和体质量呈等速生长。

云斑尖塘鳢肿大细胞病毒属虹彩病毒的分离与鉴定

2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内脏器官肝脏、脾脏和肾脏未分离到致病菌。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾尖塘鳢,7d后开始出现死亡,10d后全部死亡,对照组无死亡。自然发病鱼和人工感染鱼的病理切片显示肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞,超薄切片经电子显微镜观察,肝脏、脾脏和肾脏观察到大量病毒颗粒。电镜下病毒呈六边形,直径约135 nm,形态与虹彩病毒相似。针对虹彩病毒主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)序列设计引物,提取自然发病鱼和人工感染鱼的DNA作为模板,均能扩增出预期大小的特异性产物。利用NCBI的Blast搜索,结果显示扩增序列与肿大细胞病毒属的传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、闪电丽鱼虹彩病毒(DGIV)和条石鲷虹彩病毒(RBIV)MCP核苷酸序列同源性分别为98.8%、98.1%和94.7%。利用MCP序列构建的系统发育树显示,导致云斑尖塘鳢发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属虹彩病毒,暂命名云斑尖塘鳢虹彩病毒(MSGIV)。

云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢及其杂交子一代间的遗传关系

应用RAPD技术研究云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢及其杂交子一代(F1)间的遗传关系。筛选得到25个随机引物均在亲本和杂交子一代间呈现多态,遗传相似性指数和遗传距离的计算结果显示,正交F1(云斑尖塘鳢♂×线纹尖塘鳢♀)与母本平均遗传相似系数(0.7090)高于与父本平均遗传相似系数(0.5948);反交F1(云斑尖塘鳢♀×线纹尖塘鳢♂)与母本平均遗传相似系数(0.6301)也高于与父本平均遗传相似系数(0.6089)。说明正反交子代在遗传关系上均偏向各自的母本,对扩增带和聚类图的分析均得到这一结果,表明F1所接受的双亲遗传物质并非完全对等的,所获得的遗传信息可能更多来自母本。

线纹尖塘鳢(♀)、云斑尖塘鳢(♂)及其杂交、回交子代遗传变异的微卫星分析

为选育出生长快、外形美、耐粗饲、易起捕的尖塘鳢属鱼类新品种。本研究用20对微卫星引物对线纹尖塘鳢(♀)、云斑尖塘鳢(♂)及其杂交、回交子代的遗传变异进行分析。结果表明:20对引物在4个群体中共检测出87个等位基因,平均等位基因数以线纹尖塘鳢最低(1.6087),杂交子代F1最高(2.9130);平均有效等位基因数依次为云斑尖塘鳢(2.2570)>杂交子代F1(2.1516)>回交子代F2(2.1061)>线纹尖塘鳢(1.5164);在4个群体中平均观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)和香农指数(I*)4个参数的变化范围分别为:0.4891～0.7767、0.2714～0.5193、0.3473～0.4458、0.3662～0.7993。其中,各参数均为线纹尖塘鳢群体最低,平均观测杂合度和香农指数杂交子代F1最高,平均期望杂合度回交子代F2最高,多态信息含量云斑尖塘鳢群体最高,且各群体的平均观测杂合度均高于平均期望杂合度;哈代—温伯格平衡的x2检验结果表明:绝大多数位点发生了偏离(P<0.05);根据Nei’s遗传距离建立的UPGMA聚类图表明:杂交子代F1和回交子代F2聚为一支后再与线纹尖塘鳢聚为一支,而云斑尖塘鳢为另一支,并且无论是杂交还是回交均表现了一定的母本效应。

云斑尖塘鳢微卫星分子标记的筛选与检测

用磁珠富集法分离云斑尖塘鳢的微卫星序列,由所获得的1032个克隆中筛选出146个阳性克隆,经测序81个含有微卫星序列,52个为完美型,27个为非完美型,2个为复合型,其中43个微卫星序列重复次数在10以上。所获得的云斑尖塘鳢微卫星序列中除探针中使用的CA重复单元和GA重复单元外,还有TAC等其他类型的重复单元。设计合成38对微卫星引物,其中29对引物可稳定扩增出条带,使用这些引物对云斑尖塘鳢48个个体进行检测显示:观测杂合度平均值为0.63,期望杂合度平均值为0.43。29对引物中1对引物表现为单态,7对表现为高度多态,14对表现为中度多态,7对表现为低度多态,多态性较为丰富,说明本研究开发的绝大部分微卫星分子标记较为理想。

云斑尖塘鳢幼鱼摄食特性的初步研究

研究了云斑尖塘鳢(Oxyeleotris marmorata)幼鱼的摄食特性。结果表明:在幼鱼阶段,云斑尖塘鳢的摄食方式为主动掠食;个体全长10mm的日摄食量约为体重的11.66%,40mm的日摄食量约为体重的51.04%,69mm的日摄食量约为体重的55.30%;日摄食量与幼鱼全长呈正相关关系:A=11.3577+0.7664L(r=0.876);云斑尖塘鳢幼鱼的适口饵料鱼全长为其全长的25%～50%,幼鱼摄食15～17h后可完全消化饵料鱼;云斑尖塘鳢幼鱼昼夜摄食节律明显,一昼夜出现一个摄食高峰,高峰时段为19:00-01:00。

云斑尖塘鳢微卫星标记在两种虾虎鱼亚目鱼类群体间的适用性研究

利用微卫星DNA-聚合酶链式反应(STR-PCR)技术对已开发的14对云斑尖塘鳢(Oxyeleotrismarmorata)微卫星标记在线纹尖塘鳢(Oxyeleotris lineolatus)和河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)群体间进行通用性分析。结果显示,14对云斑尖塘鳢微卫星标记在线纹尖塘鳢群体均能扩增出特异性条带,在河川沙塘鳢群体中也有10对引物可稳定扩增,其中9对在线纹尖塘鳢群体中具有高度多态性,6对在河川沙塘鳢群体中具有高度多态性。通过这10对通用微卫星标记检测3个种群的平均观测杂合度(Ho)为0.344 9,平均期望杂合度(He)为0.704 3,平均多态信息(PIC)含量为0.536 9。同时获得3个有着较高的通用性微卫星位点(H27、H142和H97),平均PIC值均大于0.5,具有高度多态性,在3种虾虎鱼亚目鱼类中具有较高的通用性,这3个位点在3种虾虎鱼亚目鱼类之间共检测得到6～22个不等的等位基因,并获得1个可以用于鉴别沙塘鳢科与塘鳢科特异基因型的等位基因位点(H97)。因此,通过已开发的云斑尖塘鳢微卫星标记来获得适用相近物种的微卫星标记是可行的。

不同放养密度对云斑尖塘鳢幼鱼生长和存活的影响

对云斑尖塘鳢(Oxyeleotris marmorata)幼鱼在3种不同放养密度下的生长速度和成活率进行了对比试验。培育60 d后的调查结果表明,密度为每667 m2水体放养30 000尾比放养10 000尾或50 000尾更为合适,幼鱼成活率分别为91.3%、88.9%和85.7%。

云斑尖塘鳢仔鱼摄食节律的研究

对自然光照条件下云斑尖塘鳢仔鱼的昼夜摄食节律和在夜间增加不同强度外光源条件下仔鱼的摄食发生率进行了研究。结果表明,云斑尖塘鳢仔鱼具有明显的昼夜摄食节律,晚上摄食发生率是著高于白天,其摄食主要集中在光线较弱的16:00～00:00;5日龄仔鱼在100～500Lx,8日龄和12日龄仔鱼在10～100Lx光照条件下的摄食发生率要明显高于黑暗或更高光照条件下的摄食发生率。

云斑尖塘鳢精子的超微结构

采用扫描电镜和透射电镜观察了云斑尖塘鳢(Oxyeleotris marmoratus)的精子结构。结果显示:扫描电镜下云斑尖塘鳢精子由头部和尾部(鞭毛)组成。头部近似圆形,直径1.98～2.12μm,尾部鞭毛长23.22～32.92μm。透射电镜下云斑尖塘鳢精子由头部、中段和尾部三部分组成。头部细胞核呈扁卵圆形,前端不具顶体,染色质致密,细胞核内偶见小空隙;核膜与质膜间有间隙,其间分布有细胞质、囊泡、溶酶体,在细胞核后端,还分布有5～7个呈环形单层排列的线粒体;植入窝较浅,中段不明显,包括中心粒复合体和袖套;精子尾部的鞭毛细长,轴丝为典型的"9+2"型结构;轴丝外侧具有较发达的侧鳍。

云斑尖塘鳢仔鱼饵料动物的非纯化培养及摄食试验

利用塘泥和水体中的浮游动物种源，对云斑尖塘鳢（Oxyeleotris mermoratus）仔鱼的饵料动物进行非纯化培养并做了仔鱼的摄食试验。结果表明：培养过程中，各类饵料动物组成1～8d以轮虫类占绝对优势，比例达到50％以上，9～10d以枝角类和桡足类无节幼体占优势，比例达到30％以上；各类饵料动物密度变化曲线呈倒“V”字型，其中饵料动物总密度、轮虫类和枝角类密度均在第7d达到最高值，分别为47．6个／ mL、29．5个／mL和16．5个／mL。从仔鱼对饵料的摄食比率看，大小范围为50～100μm的饵料动物仅适合9日龄以下的仔鱼摄食，随着仔鱼的发育，趋向于摄食较大个体的饵料动物。

云斑尖塘鳢不同组织同工酶的研究

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术对云斑尖塘鳢(Oxyeleotris marmoratus Bleeker)的鳍、鳃、肌肉、肝脏、眼睛、心脏、脾脏和性腺8种组织中的4种同工酶(LDH,MDH,SOD,EST)进行了研究,并对其同工酶位点及其酶谱表型进行了分析。结果表明,云斑尖塘鳢4种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。EST由4个基因位点编码;LDH酶带多于典型的5条,并且眼睛中存在LDH-C4;SOD同工酶酶带丰富,共检测到14条酶带;MDH具有上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH)两种类型。

云斑尖塘鳢AFLP分析技术的建立

以云斑尖塘鳢为对象,对其扩增片段长度多态性(AFLP)体系中的连接、预扩增、选择扩增等关键步骤的参数进行了对比实验。结果表明,在采用磷酸化接头,预扩增PCR增加延伸反应及20倍稀释预扩增产物的条件下,可得到清晰稳定的电泳图谱。所筛选的48个引物组合中,14个引物组合的产物带型稳定清晰,分布均匀,扩增片段为50-70条。本研究获得的AFLP优化参数及引物能够运用于云斑尖塘鳢群体遗传分析及分子辅助育种研究。

水温对云斑尖塘鳢幼鱼摄食和生长的影响

该文主要研究了水温对云斑尖塘鳢幼鱼摄食和生长的影响。试验共设4个温度(23℃、26℃、29℃和32℃)处理组,每组设3个平行,试验周期45d。结果表明:随着水温的升高,云斑尖塘鳢幼鱼摄食率逐渐升高,32℃时最高;相对增重率、特定生长率和饲料转化效率则呈现先升高后下降的趋势,29℃时达到最大值。方差分析表明,29℃试验组的特定生长率和饲料利用效率均显著高于其他各组(p<0.05);23℃摄食率最低,与其他组差异显著(p<0.05),另外3个温度组之间无显著性差异(p>0.05)。本研究表明,水温对云斑尖塘鳢幼鱼的摄食和生长有显著性影响,水温在29℃时幼鱼的摄食状态最佳,生长最快。

4种常用渔药对云斑尖塘鳢幼鱼的急性毒性试验

在室温静水条件下,测定了聚维酮碘、高锰酸钾、溴氯海因和硫酸铜等4种常用药物对平均体重为(1.61±0.57)g的云斑尖塘鳢幼鱼的急性毒性试验。结果表明,聚维酮碘、高锰酸钾、溴氯海因和硫酸铜对云斑尖塘鳢幼鱼的安全浓度分别为9.44mg/L、1.28mg/L、12.55mg/L和1.03mg/L;4种药物对云斑尖塘鳢幼鱼的毒性大小依次为:硫酸铜>高锰酸钾>聚维酮碘>溴氯海因;4种药物的安全浓度均高于生产使用的常用剂量,在云斑尖塘鳢苗种培育过程中可以安全使用。

云斑尖塘鳢的生物学特性及人工催产试验

在试验研究和生产实践的基础上,揭示了云斑尖塘鳢的生物学特性,并在此基础上对其进行人工繁育的探索,发现2龄种鱼经HCG催产,水温29℃条件下40 h产卵,受精卵56 h孵出仔鱼,仔鱼孵出4 d后卵黄囊全部被吸收,仔鱼开口并进入平游阶段。

云斑尖塘鳢工厂化循环水育苗技术研究

云斑尖塘鳢是广东省名优水产品种之一,利用广州市金洋水产养殖有限公司的现代工厂化循环水育苗池6个,每个育苗池初始投放云斑尖塘鳢苗种30.00(±0.00)万尾,体长为0.33(±0.02)cm,工厂化循环水培育50 d后,云斑尖塘鳢出苗13.87(±1.18)万尾,体长2.63(±0.15)cm,培育存活率为46.22(±3.92)%,体长增长率为800.67(±33.47)%,可增加产值4 427元/m2、利润2 344元,能有效提高土地利用率和经济产出量。

云斑尖塘鳢与线纹尖塘鳢杂交种肌肉营养成分分析

为科学评价云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢及其杂交种肌肉的营养价值,采用国内外通用的营养测定方法对3种尖塘鳢的常规营养组分、氨基酸组分、脂肪酸组分以及矿物质元素进行测定与比较分析。试验结果显示,3种尖塘鳢水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量分别为75.80%~79.23%、18.33%~19.23%、0.62%~1.63%和1.20%~1.33%。其中杂交尖塘鳢肌肉中的粗蛋白与粗脂肪含量显著高于云斑尖塘鳢(P<0.05),且粗脂肪含量显著高于线纹尖塘鳢(P<0.05)。杂交尖塘鳢肌肉的总鲜味氨基酸最高,但与其他2种尖塘鳢相比差异不显著(P>0.05)。必需氨基酸评分结果显示,3种尖塘鳢的必需氨基酸与总氨基酸的比值高于联合国粮食及农业组织/世界卫生组织评分模式,接近全鸡蛋白蛋白质模式。3种尖塘鳢肌肉中共检测到26种脂肪酸,其中杂交尖塘鳢的不饱和脂肪酸的含量为78.51%,显著高于云斑尖塘鳢的不饱和脂肪酸含量(64.02%)(P<0.05)。杂交尖塘鳢肌肉中多不饱和脂肪酸含量为48.18%,显著高于线纹尖塘鳢多不饱和脂肪酸含量(P<0.05),而与云斑尖塘鳢相比,未达到显著水平(P>0.05)。试验结果表明,云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢和杂交尖塘鳢均为营养价值高的鱼类,其中杂交尖塘鳢在氨基酸和脂肪酸组分和含量上均略优于亲本,具有一定的杂种优势。