云香水仙WD40基因克隆及序列分析

目的探讨云香水仙WD40基因在花色形成中的作用。方法基于前期的转录组数据,以云香水仙为材料,采用RT-PCR技术对WD40基因进行克隆,并结合Real-time PCR检测其在不同花期的表达水平。结果克隆得到1个WD40基因,命名为NtWD40,开放阅读框长为1020 bp,共编码339个氨基酸。同源性分析表明,云香水仙与拟南芥、苹果、矮牵牛及苜蓿的相似系数分别为68%、68%、68%和69%。Real-time PCR分析表明:始花期NtWD40的表达量较其他花期有明显差异。结论NtWD40可能参与云香水仙类黄酮途径相关色素的合成。

‘云香’水仙NtWRKYY1基因的分离与功能分析

为明确WRKY转录因子在‘云香’水仙中的功能,该研究以‘云香’水仙为材料,克隆了WRKY基因,命名为NtWRKYY1(GenBank登录号为KX056495)。序列分析显示,NtWRKYY1基因开放阅读框(ORF)长度为510bp,编码169个氨基酸。多序列比对和系统进化树分析显示,NtWRKYY1编码蛋白含1个WRKY结构域和C2H2锌指结构(Cx4Cx23HxH),与AtWRKY57聚在一起,属于第Ⅱc类WRKY转录因子。组织表达和时空表达分析显示,NtWRKYY1基因在花中表达量高于根和叶,且在花瓣及副冠中的表达量随开花过程(花蕾期、始花期、盛花期、衰败期)呈上升趋势。植物激素和非生物胁迫分析显示,NtWRKYY1基因受脱落酸(ABA)、高温、干旱和盐诱导,受茉莉酸甲酯(JA)抑制,表明NtWRKYY1基因可能在‘云香’水仙花朵的衰老过程中起正调节作用,同时参与‘云香’水仙ABA、JA等激素信号转导及高温、干旱、盐碱等非生物胁迫过程的调控。利用In-Fusion克隆技术成功构建过表达载体pMDC140-NtWRKYY1,并采用农杆菌介导叶盘法转化烟草。RT-PCR和GUS染色结果显示,目的基因已成功导入烟草基因组中。