五加丹方对绝经综合征模型大鼠下丘脑PLC-β/IP3/CaM通路作用的研究

目的:探讨中药方剂五加丹方对去卵巢雌性大鼠下丘脑组织匀浆中PLC-β1、IP3、IP3R、CaM及PLC-β1、IP3R1、GnRHmRNA和GnRH、CaM蛋白的影响,试图阐释五加丹方对PLC-β/IP3/CaM通路及绝经综合征的影响。方法:取雌性SD大鼠64只,随机分为空白组(NG)、模型组(MG)、中药对照组(TMC)、西药对照组(WMC)各10只,五加丹方高(WH)、中(WM)、低剂量组(WL)各8只。除NG组外,其余6组均手术摘除大鼠双侧卵巢复制去势模型。模型复制成功后,各组采用灌胃给药1次/日,TMC组及WMC组分别给予相应剂量更年安片混悬液及补佳乐混悬液灌胃,NG组、MG组予等剂量生理盐水灌胃。4周后,处死大鼠,检测脑组织中PLC-β1、IP3、IP3R、CaM的含量;PCR法检测PLC-β、IP3R1、GnRH mRNA表达;Western Blot法检测各组脑组织CaM和GnRH蛋白的表达。结果:与NG组比较,大鼠去势后下丘脑组织PLC-β1、IP3、IP3R、CaM含量明显升高(P<0.01),PLC-β1、IP3R1、GnRHmRNA的表达显著升高(P<0.01),GnRH、CaM蛋白表达较空白组均升高(P<0.01),五加丹方可降低去势模型大鼠下丘脑组织中PLC-β1、IP3、IP3R、CaM水平,并下调PLC-β1、IP3R1、GnRHmRNA的表达。结论:五加丹方下调GnRH的表达,可能是通过作用于GnRH上游调节因子PLC-β1、IP3、IP3R、CaM等而产生,从而起到协调生殖轴功能,改善绝经综合征患者生殖内分泌水平。

五加丹方对去势模型大鼠血清性激素及下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH基因表达的影响

目的:探讨五加丹方对去卵巢大鼠血清中FSH、E2及下丘脑弓状核组织匀浆Kiss-1、GPR54、GnRH·RNA表达的影响,进一步探讨五加丹方对绝经综合征的作用机制。方法:将64只成年期雌性大鼠随机分为7组,空白组、模型组、中药对照组、西药对照组各10只,五加丹方高、中、低剂量组各8只。除空白组外,其余各组均手术去势。各组灌胃给药每日1次,正常组及模型组给予等剂量生理盐水灌胃每日1次,实验过程中空白组大鼠灌胃死亡1只。连续给药4周后,腹主动脉取血并处死大鼠,脑立体定位留存下丘脑弓状核组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)含量,PCR技术检测各组大鼠下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,模型组FSH水平明显升高(P<0.01),E2水平明显下降(P<0.01)。与模型组比较,西药对照组血清E2水平明显升高(P<0.01),五加丹方高剂量组、中剂量组、中药对照组血清E2水平也明显升高(P<0.05)。各给药组血清FSH含量均下降,五加丹方高剂量组与西药对照组下降明显(P<0.01),中药对照组、五加丹方中剂量组、低剂量组也明显降低(P<0.05)。(2)与空白组比较,模型组Kiss-1 mRNA、GPR54 mRNA、GnRH mRNA表达均明显上升(P<0.01);与模型组比较,五加丹方高剂量组、中剂量组、西药对照组的Kiss-1 mRNA、GPR54 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,五加丹方高剂量组、西药对照组GnRH mRNA表达明显下降(P<0.01);五加丹方中剂量组明显降低(P<0.05)。结论:五加丹方可以改善去势模型大鼠的血清性激素水平,可以降低去势模型大鼠下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA的过高表达,这可能是五加丹方临床治疗绝经综合征的生殖内分泌机制。