刺五加果生物活性及其应用进展

本文对刺五加果生物活性、质量评价方法、提取方法进行综述,并对刺五加果的产品以及综合利用进行展望。

刺五加果的抗疲劳作用

目的:研究刺五加果的抗疲劳作用,探讨其抗疲劳作用机制,为开发利用刺五加资源提供实验依据。方法:超声提取法提取刺五加果实,制备刺五加果实水提液。采用耐力游泳小鼠为抗疲劳动物模型,随机分为阴性对照组、阳性对照组和3个不同剂量(0.5、1.0和1.5g·mL-1)刺五加果实组(每组10只)。通过对力竭游泳时间、肝糖原、肌糖原、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、血乳酸(LAC)和血尿素氮(BUN)等指标的测定,检测刺五加果实水提液抗疲劳效果。结果:与阴性和阳性对照组比较,刺五加果实不同剂量组小鼠负重游泳时间明显延长(P<0.01);运动小鼠LDH活力显著提高,LAC及BUN水平降低(P<0.01);运动后小鼠肝糖原和肌糖原储备量显著提高,有氧运动糖份供给增加;运动小鼠SOD活力增高(P<0.05)。结论:刺五加果具有抗疲劳作用,其机制是通过保证中枢及运动肌糖供给实现的。

短梗五加果花色苷微球的制备及其缓释效果评价

为探索短梗五加果花色苷微球的制备工艺,提高其稳定性,以短梗五加果花色苷为芯材,以海藻酸钠和壳聚糖为壁材,采用锐孔法制备短梗五加果花色苷微球。通过单因素试验考察了不同因素对短梗五加果花色苷微球包埋效率影响,采用Box-Behnken设计和响应面法优化了短梗五加果花色苷微球的最佳工艺条件。结果表明:海藻酸钠质量分数1.9%、壳聚糖质量分数1.7%、氯化钙质量分数1%和壁芯比4∶1的条件下,包埋效率可达92.9%。锐孔法制备得到的短梗五加果花色苷微球呈球形,大小均匀,在人工胃液和肠液中具有一定的缓释效果。

无梗五加果中总香豆素和6,7-二甲氧基香豆素的含量测定

目的测定无梗五加果中总香豆素及6，7-二甲氧基香豆素的含量。方法以东莨菪内酯为对照品，采用分光光度法，于348nm处测定总香豆素含量。采用HPLC法测定6，7-二甲氧基香豆素含量。色谱柱为Hypersil BDS C18（4．6mm×250mm，5 μm），流动相为甲醇-磷酸水溶液（pH3．0）-乙腈-四氢呋喃（体积比为15：77：6：2），检测波长为340nm。结果总香豆素质量浓度在3．44～12．9mg·L^-1（r=0．9992）内、6，7-二甲氧基香豆素质量浓度在1～40mg·L^-1（r=0．9999）内线性关系良好；平均回收率分别为100．6％、97．7％；总香豆素和6，7-二甲氧基香豆素的质量百分含量分别为0．12％、0．0037％。结论方法准确、可靠，可为无梗五加果的质量控制提供参考依据。

短梗五加果多酚预防大鼠动脉粥样硬化作用

目的:研究短梗五加果多酚(Acanthopanax sessiliflorus fruit polyphenols,ASFP)对大鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的预防作用,并探讨其作用机制。方法:40只雄性SD大鼠随机平均分成4组,每组10只。采用高脂饮食结合腹腔注射VD3的方法建立As模型,不同剂量ASFP给药组自造模开始之日起分别灌胃150、75 mg/(kg·d)的ASFP,空白组和高脂饮食组大鼠灌胃等量生理盐水,各实验组连续处理12周后,检测大鼠血清生理生化水平并计算As指数;苏木素-伊红染色观察大鼠主动脉As病变情况;Western blot检测主动脉中黏附分子和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路关键基因的蛋白表达水平。结果:与高脂饮食组相比,ASFP能显著降低大鼠血清中的血脂、黏附分子和炎症因子水平,减少主动脉中的脂质沉积,改善各层结构排列紊乱,显著降低主动脉中细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子-1、磷酸化p38和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(phospho-extracellular signal regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)的蛋白表达量。结论:ASFP具有预防As的作用,其作用可能与其降血脂和抑制p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信号通路,进而抑制炎症因子的表达有关。

响应面法优化刺五加果酒的酿造工艺

以刺五加果实为原料,酿造刺五加果酒,以感官评分和酒精度为评价指标,对料水比、果胶酶添加量、发酵温度和接种量进行单因素试验,在确定发酵温度的基础上,进行其他3个因素的响应面优化试验,确定刺五加果酒的最佳酿造工艺为料水比1.7:1(kg/L),果胶酶添加量60 mg/L,接种量207 mg/L,发酵温度24℃。得到的刺五加果酒颜色呈红色,果香浓郁、酒体丰满、风格独特,酒精度为11.9%vol,感官评分为94,挥发酸为0.3 g/L,总硫为42 mg/L,进行微生物指标检验得到大肠菌群<3个,菌落总数为12个,符合果酒行业标准。

无梗五加果金丝桃苷的分离制备和鉴定

采用薄层层析法对树脂纯化后的无梗五加果总黄酮组成成分进行了分析,结果表明无梗五加果中含有药用成分金丝桃苷。应用制备型高效液相色谱和聚酰胺对其进行了制备,采用紫外光谱、红外光谱和核磁共振对高效液相制备的金丝桃苷进行了鉴定。为无梗五加果的开发利用提供了理论依据。

短梗五加果中木脂素类成分的分离和鉴定

目的:分离和鉴定短梗五加果提取物中木脂素类化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和制备液相等方法对短梗五加果提取物中的化学成分进行分离纯化,并通过NMR和MS等谱学技术确定结构。结果:从短梗五加叶提取物中分离得到7个木脂素类化合物,分别鉴定为丁香树脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),短梗五加苷E(2),杜仲树脂醇双吡喃葡萄糖苷(3),松脂醇二吡喃葡萄糖苷(4),松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),(7S,8R)-urolignoside(6),新短梗五加酚(7)。结论:化合物3、5、6为首次从五加属中分离得到。

大孔树脂纯化无梗五加果花色苷工艺的研究

为建立无梗五加果花色苷的研究工艺,比较7种大孔树脂对无梗五加果花色苷的吸附与解吸效果,在此基础上研究X-5型大孔树脂对无梗五加果花色苷的吸附与解吸条件。结果表明:X-5型大孔树脂是纯化无梗五加果花色苷的理想树脂;动态吸附最适浓度为2.0mg·mL-1,上样液pH值3.0,最大上样量42BV,上样流速1.0mL·min-1;动态解吸最适洗脱剂为pH值3.0的70%乙醇,洗脱体积5BV,解吸流速为1.0mL·min-1。该工艺生产的花色苷产品为紫红色粉末,色价为35.2,是未纯化的17倍。说明此方法适合于无梗五加果花色苷的纯化,且纯化效果理想。

短梗五加果中化学成分的分离和鉴定

目的：对短梗五加果化学成分进行研究。方法：采用开口柱色谱和高效液相色谱进行系统的化学分离,使用1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HSQC和HMBC等波谱学手段,结合ESI-MS质谱确定其分子结构。结果：从短梗五加果中分离了9个化合物,并确定了化合物的结构,分别为川芎哚（1）、3-羧基川芎哚（2）、5-羟基-2-羰基-吲哚-3-乙酸甲酯（3）、烟酰胺（4）、焦谷氨酸甲酯（5）、对羟基苯乙醇（6）、2-（p-羟基苯基）丙烷-1,3-二醇-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）、赤式-愈创木基丙三醇8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（8）、亮氨酸（9）。结论：化合物2、3、5~8为首次从五加属中分离得到。

HPLC-ELSD法同时测定无梗五加果中3种3,4-裂环羽扇豆烷型三萜化合物的含量

目的:建立HPLC-ELSD法同时测定无梗五加果中22-α-hydroxychiisanogenin(1)、chiisanogenin(2)和(1R,11α)1,4-epoxy-11-hydroxy-3,4-secolupane-20(30)-ene-3,28-dioic acid(3)的含量方法测定。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%(V/V)乙酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温为25℃,使用蒸发光散射检测气(载气流速1.60 L/min,蒸发温度60℃,漂移管温度45℃)。结果:在70 min内,无梗五加果中上述3个成分完全分离,峰面积的对数与进样量的对数呈现良好的线性关系(r=0.999 5~0.999 7);平均加样回收率(n=6)分别为102.9%(RSD=1.9%)、95.4%(RSD=3.0%)、98.7%(RSD=2.3%)。样品中化合物1~3的含量分别为9.37~9.61、2.03~2.18、0.39~0.45 mg/g。结论:该方法简单、快速、结果可靠,可用于同时测定无梗五加果中化合物1~3的含量。

短梗五加果中的三萜类化合物分离与鉴定

目的:分离和鉴定短梗五加果提取物中的三萜类化合物。方法:采用开口柱色谱和高效液相色谱进行系统的化学分离,使用~1H-NMR、^(13)C-NMR、HSQC和HMBC等波谱学手段,结合ESI-MS质谱确定其分子结构。结果:从短梗五加果提取物中分离得到8个三萜类化合物,分别鉴定为22-α-hydroxychiisanogenin(1),chiisanogenin(2),3-oxo-24-methylenecycloartan(3),mangiferonic acid(4),isomangiferolic acid(5),齐墩果酸(6),白桦脂醇(7),白桦脂酸(8)。结论:化合物3、4、5为首次从五加属中分离得到。

刺五加果化学成分的分析

经分析测定,刺五加果中含有Fc、Se、Cu、Mn等多种必需微量元素和人体全部必需氨基酸。果中Glc、Fuc、Suc、Mal、刺五加三糖分别占样品干重(%)的1.1,5.3,1.8,1.8,6.8其总皂甙含量为0.29%,已有实验证实,刺五加根多糖可提高机体的免疫机能。刺五加果多糖与根多糖的组成相似,但单糖所占摩尔比率有一定差异,其 Ara∶Rha∶xyl∶GaLA∶GaL∶Glc分别是1.0∶1.6∶1.8∶0.7∶4.2∶2.7及1.0∶1.2∶1.6∶1.3∶2.9∶2.8刺五加果中含有超氧化物歧化酶,并且只具 Cu-Zn-SOD 同工酶谱带。急性毒性试验LD_(50)>50克/公斤体重,表明刺五加果浸出物基本无毒。

超滤法分离刺五加果多糖及其抗氧化活性的研究

目的:通过超滤法对刺五加果多糖的分子量分级,筛选出抗氧化活性较好的分子量组分。方法:采用热水提取醇沉淀法提取刺五加果多糖,三氯乙酸法脱除蛋白质,不同截留分子量的超滤膜对刺五加果多糖进行分离,各级多糖通过测定DPPH和超氧自由基O 2-的清除率来进行筛选其抗氧化活性组分。结果:刺五加果多糖经三氯乙酸除蛋白,超滤法分离后,分子量不同的各组分的多糖含量均相应的增大,50~10kDa组分含量最高为88.15%。通过测定DPPH和超氧自由基O 2-的清除率发现,分子量不同的各组分刺五加果多糖均具有不同程度的抗氧化活性,其中抗氧化活性最好的是分子量50~10kDa组分。结论:通过超滤法可以将刺五加果多糖有效的分离和纯化,并通过体外抗氧化实验筛选出最好的活性组分,达到了分离和筛选的目的。

江苏细柱五加果实指纹图谱研究

目的:研究建立江苏细柱五加果实中三萜皂苷类成分HPLC-ELSD指纹图谱分析方法,为其质量控制和药材鉴别提供依据。方法:采用HPLC-ELSD色谱法,使用AlltimaTM-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.5%醋酸水,梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,柱温为35℃。ELSD检测器条件:漂移管温度106℃,载气为氮气,流速为2.9L·min-1,进样20μL。结果:在选定的色谱条件下确定14个共有峰,各批次药材均具有上述特征,但特征峰的相对含量分布差异导致色谱概貌存在一定差异。确定了细柱五加果实中2个三萜皂苷类成分,相对保留时间31min为chikusetsusaponinⅣa峰(10号),相对保留时间50min为3β-[(O-β-D-glucopyranu-ronosyl]oxy)-olean-12-ene-28-olcacid峰(14号),不同批次的10批细柱五加果实中HPLC-ELSD指纹图谱特征峰分离度好,谱峰匹配一致。结论:该方法准确、简单、稳定,其色谱指纹图谱可用于江苏细柱五加果实的鉴别和质量控制。

短梗五加果实中异嗪皮啶的提取工艺研究

分别以不同的提取时间、料液比、提取次数、提取溶剂为因素,考察各单因素对异嗪皮啶提取率的影响。保持其他条件不变的情况下,提取溶剂为30%乙醇溶液,料液比达到1∶10的条件下,40分钟,提取2次提取率达到极佳状态,此时提取率为4.2179%,在5克的短梗五加果粉碎样品中,异嗪皮啶的含量高达0.21克。

无梗五加果黄酮的提取及其提取物的自由基清除活性比较

在单因素试验的基础上,采用响应面法优化超声波法提取无梗五加果黄酮的提取工艺,利用高效液相色谱分离及保留时间定性法对提取物组分进行分离及初步分析,通过测定无梗五加果黄酮类提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基的清除作用,比较无梗五加果黄酮类提取物对不同自由基的清除活性。得到的无梗五加果黄酮超声波提取最佳工艺参数如下:乙醇浓度为30%,料液比为1 g∶50 mL,超声提取时间为40 min。实际测得黄酮提取量为54.21 mg/g,达到预期值的99.71%;高效液相色谱分离及保留时间定性法分析表明,无梗五加果黄酮提取物中含有芸香苷、金丝桃苷、槲皮素;无梗五加果黄酮提取物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基都有清除活性,其中对羟自由基的清除活性最强。

RP-HPLC法同时检测短梗五加果中4个有效成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱-紫外法测定短梗五加果中4个有效成分含量。方法:采用Diamasil C_(18)色谱柱(200×4.6mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸为流动相,流速为1mL·min^(-1),检测波长为210nm,柱温为25℃。结果:短梗五加果中4个有效成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内均呈良好线性,r=0.9997~0.9999,平均回收率95.6%~101.6%,RSD为2.4%~3.3%。结论:该方法简便可靠,精密度高,重复性好,适用于短梗五加果有效成分含量测定方法。

无梗五加果中抗氧化物质的提取

以无梗五加干果为原料,在单因素试验的基础上,采用响应面试验设计,以提取液的总抗氧化能力为响应值,以提取温度、提取时间和超声功率为影响提取过程的3个因素进行三因素三水平的试验设计,优化无梗五加果抗氧化物质的提取条件。结果表明:无梗五加干果中抗氧化物质的提取工艺为,提取温度60.84℃,提取时间27.65 min,超声功率226.88 W,此时总抗氧化能力的理论值可达88.440 9 u/m L。结合实际操作调整提取温度61℃,提取时间28 min,超声功率227 W,并重复试验进行验证,平均总抗氧化能力为(88.257 2±0.342 3)u/m L接近预测值。

短梗五加果多酚提取工艺优化及抗疲劳作用

目的:短梗五加果多酚的提取工艺及抗疲劳作用探讨。方法:通过正交试验考察提取次数、提取时间及液料比对短梗五加果多酚得率的影响;建立小鼠负重游泳疲劳模型,考察短梗五加果多酚的抗疲劳作用。结果:短梗五加果多酚提取的因素影响次序为:提取时间>液料比>提取次数,正交试验结果表明最佳提取工艺条件为液料比20∶1(mL/g)、提取时间60 min、提取2次,短梗五加果多酚得率为1.426%;体内研究结果表明短梗五加果多酚能显著延长小鼠负重游泳力竭时间,显著增加机体肝糖原、肌糖原含量,明显提高小鼠体内谷胱甘肽过氧化物酶活力,同时降低乳酸和肌酸激酶水平。结论:短梗五加果多酚能提高小鼠抗疲劳能力。