平行五波长高效液相色谱指纹图谱全息整合法定量鉴定杞菊地黄丸的整体质量

建立了杞菊地黄丸(QijudihuangPill,QJDHP)平行五波长(PFW)高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并依据系统指纹定量法结合全息整合法定量鉴定了杞菊地黄丸的整体质量。采用反相HPLC法,以丹皮酚(POL)为参照物峰,分别于203、228、265、280和326nm下检测,分别确定了51、49、52、49和47个共有指纹峰,建立了QJDHP的PFW-HPLC指纹图谱。分别以权重法、均值法和投影参数法整合5个波长下各样品的定性定量全信息,结果基于5个波长综合信息用系统指纹定量法鉴定11批QJDHP样品,其中有8批质量为好,1批为较好,质量一般为2批。评价时以均值法最为简捷和准确。本实验结果表明,平行多波长指纹图谱整合法是基于从全信息角度整体定性和定量鉴定中药质量的有效可信方法,是对HPLC-二极管阵列检测(DAD)三维指纹图谱的简化定量处理,其整体综合定量鉴定结果具有可靠性。

平行五波长高效液相色谱指纹图谱全息整合法定量鉴定补中益气丸整体质量

目的建立补中益气丸(Buzhong Yiqi Wan,BZYQW)平行五波长HPLC指纹图谱,用全息整合法鉴定补中益气丸整体质量。方法采用RP-HPLC法,以橙皮苷(HI)为参照物峰,在203、228、265、280、326 nm下检测,分别确定了82、87、61、68、48个共有指纹峰,建立BZYQW平行五波长HPLC指纹图谱。分别以权重法、均值法和投影参数法整合五波长下各样品的定性定量全信息,并用系统指纹定量法(SFQM)鉴定了10批BZYQW的质量等级。结果 10批BZYQW,用平均值法评价S3和S5的质量等级是Ⅶ级(次);用权重法评价S3的质量级别是Ⅷ级(劣);用投影参数法评价S3、S5和S6的质量级别是Ⅶ级(次)。其余质量级别均≤Ⅵ(一般)。结论平行多波长指纹图谱全信息整合法是基于从多维全信息角度整体定性和整体定量鉴定中药质量的有效可信方法 ,可作为补中益气丸质量控制的依据。

五波长高效液相色谱指纹图谱和红外指纹图谱联合鉴定复方丹参片质量

目的建立复方丹参片(compound Danshen tablet,CDST)五波长HPLC指纹图谱(HPLC-FP),测定其红外定量指纹图谱(IR-FP)和一阶导数定量指纹图谱(D-IR-FP),先把五波长HPLC-FP整合后再与IR-FP进行等权整合用以综合评价其质量。方法采用RP-HPLC法,记录254、265、280、290和326 nm 5个波长下色谱图,以丹酚酸B为参照物峰,确立40个共有指纹峰。以系统指纹定量法全面鉴定其质量,将五波长测得100个指纹图谱按均值法生成对照指纹图谱评价样品质量,分别在每个波长下进行评价,再按方均开方值法整合5个波长下的Sm和Pm及α,并重新评价20批CDST质量。用IR-FP和一阶导数定量指纹图谱基于系统指纹定量法进行质量评级。最后把HPLC-FP和IR-FP等权整合。结果 HPLC-FP和IR-FP等权整合后鉴定20批CDSTs的S9质量(1级)极好;S8,S13和S18质量(2级)很好;S4、S6和S16质量(4级)较好;其余13批质量(3级)均好。结论多波长HPLC-FP结合IR-FP联合鉴定中药质量即能突出紫外吸收化学成分也能表达饱和化学键成分对质量评价的贡献作用。

黄芪桂枝五物汤高效液相色谱指纹图谱及含量测定研究

目的建立黄芪桂枝五物汤的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及多指标成分含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters SunFire^(TM)C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃,进样量为10μL。以桂皮醛峰为参照,测定10批样品的HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)进行相似度评价,并对共有峰进行鉴定和药材归属。在上述色谱条件下测定芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、桂皮酸、桂皮醛的含量。结果10批样品共有17个共有峰,相似度均大于0.990;经验证,10批样品HPLC图谱与对照指纹图谱一致性较好。上述5种成分质量浓度分别在19.0~171.0μg/mL、61.6~555.0μg/mL、8.3~75.0μg/mL、18.0~162.0μg/mL、28.4~255.9μg/mL范围内与峰面积线性关系良好;检测限为0.1~1.2μg/mL,定量限为0.3~4.9μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为99.31%,98.93%,100.89%,98.83%,100.85%,RSD分别为0.25%,0.30%,0.60%,1.99%,0.74%(n=6)。结论该方法操作简便,稳定可行,重复性好,可用于黄芪桂枝五物汤的质量控制。

白术高效液相色谱指纹图谱及多指标成分含量测定研究

目的 建立白术高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和多成分含量的测定方法,为其质量控制提供参考。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换法建立白术指纹图谱,应用相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析法进行化学计量学研究,对其差异性成分白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮进行含量测定。结果 建立了白术HPLC指纹图谱,共标定了9个共有峰,并鉴定出其中4个成分;37批样品与对照图谱相似度为0.539~0.996;不同产地、不同批次样品质量存在较大差异,白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮和未知成分峰9是影响白术质量的重要因素。结论 该研究建立的指纹图谱结合多成分同时测定的方法简便、稳定、准确、可靠,可为白术的整体质量评价和质量标准的提升提供参考,为其药效物质基础研究及其相关复方研究等奠定基础。

基于高效液相色谱法的苦参指纹图谱研究

【目的】旨在建立苦参高效液相色谱指纹图谱。【方法】采用Waters Atlantis■T3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),流动相为0.01 mol/L乙酸铵(0.045%浓氨水)和乙腈,流速1.0 mL/min,梯度洗脱,色谱柱温度30℃,检测波长225 nm。检测12批苦参样品,建立指纹图谱,进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。【结果】建立了苦参的高效液相色谱指纹图谱,苦参样品的相似度在0.940~0.998之间,共标定出23个共有峰,并通过标准品确认了其中5个,分别为氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱。聚类分析将12批苦参样品分为4类,主成分分析后23个共有峰缩减为4个主成分。【结论】该方法快速可靠,稳定性和重复性好,可用于苦参的质量控制。

连朴饮基准样品高效液相色谱指纹图谱建立及化学成分鉴定

采用高效液相色谱(HPLC)技术建立连朴饮(LPD)基准样品的指纹图谱,并对其中的化学成分进行分析。该实验使用Welch Ultimate®XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,柱温为30℃,体积流量为1.0 mL/min,进样量为10μL。通过相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对不同批次连朴饮进行质量评价。运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,识别连朴饮中的化学成分。结果表明,15批连朴饮基准样品与对照指纹图谱的相似度均高于0.9,连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法学验证良好。确定23个共有峰,指认8个成分,分别为3号峰栀子苷、7号峰表小檗碱、8号峰盐酸黄连碱、11号峰盐酸小檗碱、12号峰盐酸巴马汀、19号峰染料木素、21号峰和厚朴酚和22号峰厚朴酚。通过聚类分析和主成分分析2种化学模式识别方法,将15批基准样品划分为3类,结果互相印证。主成分1-4是影响其质量评价的主要因子,OPLS-DA共确定12个差异标志物。在连朴饮中鉴定出了91个化合物,主要包含环烯醚萜类、有机酸类、黄酮苷类、黄酮类和异黄酮类、生物碱类、木脂素类和氨基酸类。建立的连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法简单且稳定性、重复性良好,与质谱检测方法相结合,可为其后续制剂开发和质量控制研究提供参考。

基于高效液相色谱指纹图谱结合化学计量法分析广西鹅掌柴质量

目的基于高效液相色谱(HPLC)指纹图谱结合化学计量法,评价广西鹅掌柴的质量。方法采用HPLC法,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱,对10个不同产地广西鹅掌柴进行指纹图谱研究,采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)对其质量进行评价。结果建立了10个不同产地广西鹅掌柴指纹图谱,共标定22个共有峰,相似度为0.922~0.999,并指认了4个色谱峰(红景天苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、柚皮素),CA与OPLS-DA分析可将不同产地广西鹅掌柴大致分为四类,主成分分析筛选出的4个主成分累计贡献率达到95.39%。结论通过指纹图谱结合CA、PCA、OPLS-DA分析可全面综合评价广西鹅掌柴质量,为广西鹅掌柴的质量控制进一步评价提供参考。

肤痒颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立

目的:建立肤痒颗粒的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:选择C18色谱柱,流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液,梯度洗脱,总流速1.0 mL·min-1,检测波长327 nm,柱温35℃,进样量为10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2.0版)对19批次的肤痒颗粒进行相似度分析。结果:HPLC指纹图谱共发现9个共有峰,其中4个为已知特征峰,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、阿魏酸。19批次肤痒颗粒与对照图谱相似度为0.767~0.995,相对保留时间范围为0.189~1.587,相对峰面积范围0.032~11.220。19批样品可聚为3类,特征图谱比较显示,14家公司中A公司的2批次、B公司的1批次样品相似度均低于0.9,E、G公司样品及L公司的一批次样品相似度大于0.98。结论:建立的该肤痒颗粒HPLC方法稳定性、重复性良好,可作为肤痒颗粒的质量评价指标,为肤痒颗粒质量控制提供参考。

灯芪通脉颗粒高效液相色谱法指纹图谱研究

目的:建立灯芪通脉颗粒的指纹图谱法,指认共有成分并评价质量。方法:使用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为水(含0.1%磷酸)-乙腈,梯度洗脱,检测波长为230nm。对10批灯芪通脉颗粒指纹图谱分析,并建立共有模式计算样品间的相似度。结果:样品具有较高的相似性。结论:本方法可用于评价灯芪通脉颗粒质量。

基于偏最小二乘法-判别分析算法分析五味子不同炮制品高效液相色谱指纹图谱的变化

目的建立五味子不同炮制品高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对其进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。方法色谱柱为Agilent Polaris Amide-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,进样量为10μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版进行相似度分析,通过PLS-DA算法对炮制前后五味子指纹图谱进行分析。结果建立了五味子炮制前后的HPLC指纹图谱共有模式,五味子及其炮制品醋五味子与酒五味子指纹图谱中共有峰分别有19个和21个;经相似度分析,与对应对照指纹图谱相似度均大于0.9;经与对照品比对,指认出6个化合物;且PLS-DA分析筛选出6号峰(5-羟甲基糠醛)、8号峰(五味子醇甲)、18号峰、10号峰(五味子甲素)、5号峰和19号峰为主要差异标志物。结论该方法可用于五味子、醋五味子及酒五味子的指纹图谱分析,为完善五味子的质量标准提供了参考。

HPLC多波长切换指纹图谱结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律

目的 建立测定白术、土白术水溶性和脂溶性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换指纹图谱,结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律。方法 建立白术、土白术水溶性及脂溶性成分的HPLC-DAD多波长切换指纹图谱测定方法,测定17批白术和17批土白术的HPLC指纹图谱,采用相似度评价、聚类分析、OPLS-DA分析进行统计分析。结果 白术指纹图谱中共标定9个共有峰,土白术指纹图谱中共标定10个共有峰。指认了新绿原酸、绿原酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮6个成分,土炒后1号峰、4号峰(白术内酯Ⅲ)、8号峰(白术内酯Ⅱ)峰面积增加,2号峰(新绿原酸)、3号峰(绿原酸)、5号峰、6号峰、7号峰、9号峰(白术内酯Ⅰ)、10号峰(苍术酮)土炒后峰面积均降低。结论 所建立指纹图谱方法能够系统地分析白术土炒前后化学成分的变化规律,可为进一步规范白术土炒工艺,制定土白术专属性质量标准,研究土白术炮制原理提供实验基础。

五匹风高效液相色谱指纹图谱及多指标成分定量分析

目的建立五匹风药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及相关指标成分含量测定方法。方法色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为327 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年A版)建立15批药材样品的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价。采用HPLC法测定5个指标成分的含量。结果15批药材样品的HPLC指纹图谱共标定6个共有峰,指认了其中5个,分别为3,3’-二甲氧基鞣花酸-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰酚-3,7-二-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、3,3’-二甲氧基鞣花酸-4’-O-β-D-吡喃木糖苷、3,3’-二甲氧基鞣花酸、3,3’,4’-三甲氧基鞣花酸,相似度介于0.886~0.996。上述5个成分质量浓度分别在22.37~223.72μg/mL(r=0.9993)、6.81~68.08μg/mL(r=0.9992)、5.23~52.34μg/mL(r=0.9993)、4.05~40.46μg/mL(r=0.9995)、17.17~171.74μg/mL(r=0.9993)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为102.03%,104.09%,95.14%,97.13%,98.63%,RSD分别为2.77%,2.11%,1.24%,2.64%,2.31%(n=6)。15批药材样品中5个成分的含量分别为0.162%~0.879%、0.011%~0.253%、0.019%~0.047%、0.019%~0.209%、0.037%~0.107%。结论所建立的方法简便、稳定,结果准确、可靠,可为五匹风药材的质量控制提供参考。

高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料、养殖用水中五氯酚的残留

【目的】本试验旨在建立一种测定猪饲料、饲料添加剂、水等养殖环节投入品中五氯酚残留的高效液相色谱-三重四极杆质谱方法。【方法】待测样品经碱性甲醇水溶液提取,使用阴离子固相萃取柱富集净化,经氮吹浓缩后用2%甲酸甲醇复溶,以5 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇为流动相,经Poroshell 120 EC-C18(3 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱分离;负离子模式下,采用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)进行检测;使用基质匹配外标法测定五氯酚的含量,并对所建方法的线性关系、检测限(limit of detection,LOD)、定量限(limit of quantitation,LOQ)、回收率、准确度、精密度、基质效应等指标进行考察。【结果】猪饲料和饲料添加剂中五氯酚的检测限和定量限分别为0.1和0.5μg/kg,养殖用水中五氯酚的检测限和定量限分别为5和12.5 ng/L;饲料和饲料添加剂中五氯酚定量范围为0.5~20μg/kg,养殖用水中五氯酚定量范围为12.5~500 ng/L,方法线性关系良好,相关系数(R 2)均>0.999。该方法在饲料和饲料添加剂以及养殖用水中的平均加标回收率为69.8%~119.5%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.62%~9.86%,基质效应(matrix effect,ME)为0.62~1.29。【结论】本试验所建方法简便、快捷、灵敏度高、重复性好,适用于猪配合饲料等养殖投入品中五氯酚的测定,可为养殖环节投入品中五氯酚污染筛查提供准确高效的技术手段,从源头保障动物源性产品安全。

高效液相色谱波长切换法同时测定复方愈创木酚磺酸钾口服溶液中6种防腐剂

建立高效液相色谱波长切换法同时测定复方愈创木酚磺酸钾口服溶液中苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯6种防腐剂含量。采用Waters XSelect HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,甲醇作为流动相A,0.1%乙酸铵溶液(用乙酸调节pH值至4.5)作为流动相B,梯度洗脱,流量为1.0 mL/min,柱温为40℃,检测波长分别为226、256 nm,进样体积为10μL。6种防腐剂在质量浓度0.2~28.6μg/mL内与色谱峰面积呈良好线性关系,相关系数均为0.9999,精密度试验测试结果的相对标准偏差为0.1%~0.6%,样品加标平均回收率为98.8%~102.2%。该方法操作简单,专属性强,准确度高,重复性好,可用于复方愈创木酚磺酸钾口服溶液的防腐剂检测,为生产企业的处方、生产工艺和质量标准的把控提供参考作用。

高效液相色谱双波长切换法测定石韦配方颗粒中8种有效成分

建立高效液相色谱双波长切换法同时测定石韦配方颗粒中原儿茶酸、咖啡酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 8种成分含量。采用Waters Atlantis T3-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)磷酸溶液作为流动相梯度洗脱,流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为260 nm和330 nm,进样体积为10μL。8种成分在各自质量浓度范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均为0.9999,方法检出限为16.45~89.15μg/L,加标平均回收率为95.76%~99.86%,测定结果的相对标准偏差为0.07%~0.44%(n=6)。该方法操作简单、高效,能同时检测石韦配方颗粒中8种成分的含量,可用于石韦配方颗粒样品中的含量测定及产品质量监控。

300 g/L五氟·吡氟酰悬浮剂的高效液相色谱分析

采用高效液相色谱仪建立一种同时测定300 g/L五氟·吡氟酰悬浮剂有效成分含量的方法,即采用ODS-C_(18)色谱柱和紫外检测器,在210 nm波长下,以乙腈:0.1%磷酸水(体积比为70:30)为流动相,对300 g/L五氟·吡氟酰悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明,在供试的质量浓度范围内五氟磺草胺和吡氟酰草胺质量浓度与其相应响应值之间表现出良好的线性关系,其相关系数分别为0.99996和0.9999,标准偏差为0.03和0.13,变异系数分别为0.57%和0.54%;在4个添加水平上,五氟磺草胺和吡氟酰草胺的平均回收率均为100.07%。说明该方法的线性关系好、准确度和重现性效果好,适用于300 g/L五氟·吡氟酰悬浮剂的质量控制。

不同厂家雷公藤多苷片的超高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱结合化学计量学方法,评价不同厂家生产的雷公藤多苷片质量。方法 采用Waters Cortecs T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm);乙腈-水系统为流动相,梯度洗脱;流速0.4mL·min^(-1);检测波长220 nm。采用ChemPattern软件建立指纹图谱共有模式,并进行相似度评价、主成分分析和聚类分析。同时采用超高压液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术对共有峰进行鉴定。结果 建立了9个厂家共25批雷公藤多苷片的UPLC指纹图谱,标识51个共有峰,鉴定了其中23个色谱峰的结构,发现多数为生物碱类成分。25批样品的相似度为0.18~0.99,存在不同厂家制剂成分差异较大、部分厂家批次间质量不稳定的问题。主成分分析和聚类分析将9个厂家制剂分为3类,并筛选出3个主要差异性成分。结论 UPLC指纹图谱能够反映不同厂家雷公藤多苷片的成分差异,结合化学计量学方法,可为雷公藤多苷片的质量评价提供参考。

五波长高效液相色谱指纹谱定量鉴定速效救心丸

目的建立速效救心丸五波长HPLC指纹谱(FW-HPLC-FP),综合鉴定速效救心丸质量。方法用均值法和主成分整合法分析五波长下各样品定性定量信息,用系统指纹定量法鉴定了12批样品。结果以藁本内酯为参照物峰,根据速效救心丸中化学成分的最大紫外吸收选择检测波长为265 nm、276 nm、290 nm、300 nm和310 nm,并分别指认了29、31、29、27和24个共有指纹峰。以系统指纹定量法鉴定了12批速效救心丸样品质量差异。结论所建立方法快捷、有效和可靠,可作为速效救心丸整体质量控制参考。

用双标定量指纹法定桂附地黄丸平行五波长高效液相色谱对照指纹图谱标准

目的用双标定量指纹法研究桂附地黄丸(Guifu Dihuang Wan,GFDHW)对照指纹图谱(RFP)来实现指纹图谱标准的复原。方法采用HPLC等吸收双波长法测定了桂附地黄丸中没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、马钱苷和丹皮酚含量。在210、230、246、265和280nm 5个特征检测波长处建立GFDHW平行五波长指纹谱;以没食子酸和丹皮酚为双参照物峰,采用双标定量指纹法恢复GFDHW-RFP。结果以GFDHW中5组分含量测定结果和平行五波长指纹谱鉴定结果分别聚类分析比较不同厂家产品质量差异,结果以后者更为准确可靠。建立了GFDHW双标定量指纹法技术标准。结论基于多指标定量分析和平行五波长高效液相指纹谱的双标定量指纹法能够确定RFP的标准制剂和实现实时随行定量检测GFDHW指纹图谱,这是GFDHW现代化的有效新方法。