利用五特征转基因小鼠制备全人源血管内皮生长因子165单克隆抗体

目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性。结果:成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株(V2,V50,V71,V75),建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍。采用甘露糖结合蛋白(MBP)亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF165IgM单抗。体外抗肿瘤活性结果显示,V2、V75单抗对人类膀胱癌细胞系T24细胞的增殖有较好的抑制作用。结论:可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性。

利用五特征转基因小鼠获得的全人源抗VEGF单抗的抑制血管生成及抗肿瘤活性(英文)

为研究一种全人源抗VEGF单克隆抗体在体外和体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性,利用细胞划痕实验检测抗体抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的活性;MTT法检测抗体抑制分泌VEGF的肿瘤细胞增殖能力;Annexin V/PI双染检测抗体诱导肿瘤细胞凋亡活性;通过建立胃癌原位模型,静脉注射给予不同剂量的抗体,免疫组化方法检测抗体在体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性。结果表明一定剂量的全人源抗VEGF抗体能够显著抑制HUVEC细胞的迁移,明显抑制4种分泌VEGF的肿瘤细胞增殖并显示了一定的诱导肿瘤细胞凋亡的能力。静脉注射一定剂量的抗体能够显著抑制胃癌原位肿瘤的生长和肿瘤血管生成。进而表明该全人源抗VEGF单克隆抗体能够在体外和体内都表现出显著的抑制血管生成和抗肿瘤活性。