应用LsAB技术显示五羟色胺受体亚型1A在小鼠螺旋神经元上的分布

目的显示五羟色胺(serotonin,5-HT)受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。方法采用出生后3～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,应用酶标链亲和素-生物素(labeled streptavidin-biolin technique,LsAB)技术显示五羟色胺受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。结果实验组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜显示阳性信号,阴性对照组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜上未发现阳性信号。结论五羟色胺受体亚型1A存在于耳蜗螺旋神经元的细胞膜上,推测当毛细胞释放兴奋性神经递质引起螺旋神经元兴奋时,五羟色胺作为神经递质对螺旋神经元的听觉传导活动起着重要的调节作用。

五羟色胺1A受体在小鼠耳蜗螺旋神经元上的表达及其意义

目的:探讨小鼠耳蜗螺旋神经元上是否存在五羟色胺(serotonin,5HT)1A受体。方法:采用出生后3天～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,运用免疫荧光技术检测耳蜗螺旋神经元上五羟色胺1A受体的表达。结果:实验组乳小鼠耳蜗螺旋神经元胞浆内显示阳性表达信号,阴性对照组未发现阳性信号。结论:五羟色胺1A受体应存在于小鼠耳蜗螺旋神经元上,螺旋神经元兴奋时,五羟色胺作为神经递质与螺旋神经元上的五羟色胺1A受体结合,对其兴奋性进行调节。

大鼠脊髓损伤致痉挛后五羟色胺1D受体的表达

目的研究大鼠脊髓损伤(SCI)致痉挛后,脊髓损伤段以下五羟色胺1D受体(5-HT1DR)的表达变化。方法Wistar大鼠36只随机分为假手术(Sham)组、脊髓损伤模型(SCI)组各18只。Sham组只打开脊髓骶2(S2)节段对应椎板暴露脊髓,不予脊髓任何损伤;SCI组使用负压吸引器将脊髓S2节段完全离断1~3 mm,制作脊髓S2全横断损伤模型。术后60 d采用鼠尾痉挛评分法,评估大鼠尾部痉挛程度。免疫荧光染色法观察两组脊髓S2节段以下5-HT1DR的表达和分布,Western印迹和实时荧光定量PCR检测两组脊髓S2节段以下5-HT1DR的蛋白和mRNA表达情况。结果术后60 d,SCI组大鼠尾部痉挛评分均达到4~5分。Sham组和SCI组脊髓中5-HT1DR均主要在脊髓灰质的背角(DH)、中间带(IMZ)和腹角(VH)3个区域表达;3个区域中,SCI组脊髓中5-HT1DR光密度值较Sham组均显著降低(P<0.05)。Western印迹和实时荧光定量PCR检测结果显示:与Sham组相比,SCI组脊髓内5-HT1DR的蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论术后60 d,SCI组大鼠尾部痉挛充分发展,痉挛症状典型;且脊髓中5-HT1DR表达显著下降,两者变化可能相关。

5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对大鼠弥漫性轴索损伤神经保护作用的实验研究

目的探讨8-OH-DPAT[8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin]对大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)的降低脑温及神经保护作用。方法选用SD大鼠30只,建立大鼠DAI模型。模型制成后,将大鼠随机分为三组,A组(对照组):10只,伤后15 min腹腔给予等量生理盐水;B组(恒定体温组):10只,维持体温恒定,伤后15 min腹腔给予8-OH-DPAT;C组(实验组):10只,伤后15min腹腔给予8-OH-DPAT。记录相应时点各组大鼠脑红蛋白(NGB)、热休克蛋白70(HSP70)表达量变化及脑温度值。结果与A组比较C组于给药后15 min即可引起脑温下降,至90 min达到高峰,3 h 25 min脑温恢复至A组水平。相应时点B、C组与A组比较NGB、HSP70的表达均有不同程度增高。结论 8-OH-DPAT具有降低DAI大鼠脑温的效果,伤后早期增强NGB及HSP70的表达起到神经保护的作用,且8-OH-DPAT降低脑温作用和神经保护作用是相辅相成的。

酸枣仁提取物靶向5-羟色胺1A受体影响骨骼增长的微小核糖核酸的筛选及功能验证

目的:筛选由酸枣仁提取物调控的靶向5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)影响骨骼增长的微小核糖核酸(miRNA),并阐明酸枣仁提取物通过该miRNA调控5-HT1AR影响骨骼增长的作用机制。方法:将大小鼠分别分为正常对照组、用药组、阳性对照组和五羟色胺1A受体选择性抑制剂组,并用不同溶液灌胃。一段时间后观察药物对小鼠体长、血清生长激素和脑组织五羟色胺1A受体表达以及对大鼠慢波睡眠的影响。筛选骨骼增长的小鼠与普通小鼠脑组织差异表达miRNAs,优选以五羟色胺1A受体为靶基因的miRNA并进行qRT-PCR验证。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c-3p与5-HT1AR之间的调控关系,进而培养小鼠脑皮层细胞并鉴定。通过给予高剂量和低剂量药物和过表达及沉默miR-200c-3p,ELISA法观察5-HT1AR的表达,并通过qRT-PCR法观察给药后细胞内miR-200c-3p的表达。结果:用药组小鼠血清生长激素、体长及脑组织五羟色胺1A受体表达均高于其他组;慢波睡眠时长用药组与阳性对照组长于正常对照组和抑制剂组;药物对异相睡眠时期无影响;两个实验组有13个miRNAs表达上调,3个miRNAs表达下调;经qRT-PCR验证调控五羟色胺1A受体的为下调的miR-200c-3p,且双荧光素酶报告基因实验证明miR-200c-3p可以调控5-HT1AR表达。体外培养小鼠脑皮层细胞,过表达miR-200c-3p引起5-HT1AR表达下降,而沉默miR-200c-3p后则5-HT1AR表达升高,且药物对体外培养的脑皮层细胞中miR-200c-3p的表达有调控作用。结论:小鼠体内可能存在酸枣仁提取物,通过调控miR-200c-3p的表达上调五羟色胺1A受体的表达,延长慢波睡眠,进而促进生长激素的分泌,最终促进体长增长。

越鞠丸对创伤后大鼠焦虑行为和海马BDNF及5-HT受体表达的影响

目的探讨越鞠丸灌胃对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠的焦虑行为和海马区BDNF及五羟色胺(5-HT)表达的影响。方法通过掠食性气味诱导PTSD大鼠,将40只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常组、PTSD组和在PTSD基础上进行治疗的3组,即为地西泮治疗组1(阳性对照,0.25 ml静脉注射)、越鞠丸治疗组2(30μg·kg-1·10 ml-1灌胃)、越鞠丸治疗组3(90μg·kg-1·10 ml-1,灌胃);旷场实验测定大鼠的自主活动能力和焦虑行为,高架十字迷宫测定大鼠的焦虑行为和水迷宫实验测定大鼠恐惧记忆障碍。实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测大鼠海马组织的BDNF、5-HT 1A和5-HT2A的表达。结果与正常组比较,PTSD组的焦虑行为明显加强,差异均有统计学意义(均P<0.05);30和90μg·kg-1·10 ml-1的越鞠丸灌胃治疗明显抑制PTSD大鼠的僵立时间、闭合臂停留时间、闭合臂停留时间比、逃避潜伏期;30和90μg·kg-1·10 ml-1的越鞠丸灌胃治疗增加大鼠的总跨格数、中央格停留时间、开放臂停留时间、开放臂停留时间比例(均P<0.05);而且,PTSD组低表达的BDNF、5-HT1A、5-HT2A的mRNA和蛋白水平均被30和90μg·kg-1·10 ml-1的越鞠丸上调(均P<0.05)。结论越鞠丸可明显降低PTSD大鼠的恐惧记忆和自主活动、改善焦虑行为,并维持PTSD大鼠海马组织中的BDNF、5-HT1A、5-HT2A的表达。

腹部推拿通过5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠运动平衡功能的影响

目的观察腹部推拿对新生缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型大鼠行为学的影响,探讨其作用机制。方法7日龄SD大鼠采用经典RICE造模法制备HIBD模型。将造模成功大鼠按随机数字表法分为腹部推拿组和模型组,每组12只,选取12只大鼠作为正常组。腹部推拿组在造模24 h后予腹部推拿,连续干预28 d。各组大鼠于干预第7、14、21、28 d进行平衡木试验,采用HE染色观察大鼠海马CA1区形态结构;荧光PCR法测定海马区5-羟色胺受体(5-HTR1A)基因相对表达量,免疫组化染色法测定海马环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达,Western blot法测定突触蛋白(synaptophysin,SYP)蛋白表达量。结果干预结束后,模型组大鼠海马CA1区细胞呈弥漫性分布,神经元数量减少,出现炎性水肿;腹部推拿组海马CA1区细胞排列层次清晰,炎性水肿改善明显;与模型组比较,腹部推拿组干预第21、28 d平衡木试验评分显著降低(P<0.05),腹部推拿组5-HTR1A基因[(1.18±0.08)比(0.77±0.04)]相对表达量显著升高(P<0.05);腹部推拿组海马区cAMP[(0.32±0.02)比(0.31±0.01)]、PKA[(0.32±0.02)比(0.29±0.01)]、CREB[(0.31±0.02)比(0.28±0.01)]、SYP表达增加(P<0.05)。结论腹部推拿对新生HIBD大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路发挥神经修复作用。

TPH2和5-HT1A基因多态性交互作用与抑郁症的关联研究

目的探讨中国汉族人群色氨酸羟化酶2（TPH2）基因多态性（rs4570625，rs11178997）和5-羟色胺1A受体（5-HT1A）基因多态性（rs878567，rs1364043，rs6265）的交互作用与抑郁症的关联性。方法本研究提取288例抑郁症患者和288名健康对照的DNA，运用单碱基延伸SNP分型技术（SNaPshot）检测SNP位点基因型。使用广义多因子降维法（GMDR）分析基因间的交互作用与抑郁症风险的关联性。结果病例组和对照组的TPH2基因的rs11178997位点基因型[病例组（TT：27；TA：152；AA：109），对照组（TT：82；TA：105；AA：101），P〈0．01]和等位基因[病例组（T：206；A：370），对照组（T：269；A：307），P〈0．01]分布差异具有统计学意义，rs11178997位点A等位基因携带者患病风险显著增加（OR=1．574，95％CI=1．243-1．993）。GMDR分析发现TPH2基因的rs4570625、rs11178997位点，以及5-HT1A的rs878567、rs1364043和rs6265位点的交互模型为最优的交互模型，该模型平均检验准确度为57．67％，交叉检验一致性为10／10，且与抑郁症发病风险相关（P=0．0107）。结论TPH2和5-HT1A基因多态性的交互作用与抑郁症存在关联。